1、部分病鱼无明由穿刺线向周扩散,其边缘呈云雾状,为运动性阳性若待检菌只生长在穿刺线上,边缘十分清晰,为运动性阴性。加入的溶液,充分混匀,再加入溶液混匀,温育。加入等体积的酚氯仿异戊醇﹕﹕,混匀,离心。取上清液加入等体积的氯仿异戊醇﹕,混匀,离心。取上清液,加入倍体积异丙醇,颠倒混合,室温下静置,离心沉淀用酒精洗涤次,室温晾干。加入的缓冲液溶解,贮规范性附录试剂配方脑心浸液琼脂蛋白胨脱水牛心浸粉氯化钠葡萄糖磷酸氢钠琼脂粉加热搅拌溶解于蒸馏水中,。

2、精氨酸双水解酶培养基蛋白胨酚红琼脂精氨酸盐蒸馏水,分装试管,灭菌。裂腹鱼无乳链球菌病诊断技术规程范围本标准规定了裂腹鱼无乳链球菌病诊断的术语与定义试剂和材料设备和器械临床检查实验室样品采集细菌分离与纯化细菌鉴定结果判定和综合判定等技术规程。本标准适用于齐口裂腹鱼重口裂腹鱼短须裂腹鱼裂腹鱼无乳链球菌病诊断技术规程.酶培养基平板上,培养。菌落周围培养基出现粉红色晕圈为阳性无晕圈为阴性。氧化酶试验以毛细管吸取甲基对苯胺的水溶液滴在细菌的菌落上。菌。

3、黑色为阳性不变黑色为阴性。甲基红试验按表的甲基红试验的规定执行。培养基变红色为阳性不变红色为阴性。过氧化氢酶接触酶在放置,使凝胶完全冻结水浴将冻结的凝胶融化后,在漩涡震荡仪上震荡离心取上层水相转入另个离心管中,加入等体积的酚﹕氯仿﹕异戊醇﹕﹕,混匀,离心取上清液加入等体积的氯仿异戊醇﹕,混匀,离心。裂腹鱼无乳链球菌病诊断技术规程。剖检胃肠道空虚,肠壁变薄,肠腔内有少量淡黄色的粘液肝肿大充血,出血,呈斑驳状,质地变脆,脾肿大,呈紫色脑膜充血出。

4、存。溶液将十烷基硫酸钠加入双蒸水中,加热至助溶,再加入双蒸水定容至,室温保验技术规范水生动物产地检疫采样技术规范鱼类细菌病检疫技术规程第部分通用技术术语和定义下列术语和定义适用于此文件。裂腹鱼无乳链球菌病指由无乳链球菌感染引起的齐口裂腹鱼重口裂腹鱼短须裂腹鱼长丝裂腹鱼和黄河裸裂尻鱼等裂腹鱼类发病或死亡的种细菌性疾病。基因扩增与序列同源性分析扩增获得约的基因片段,其序列与附录所列的基因序列进行比对,同源性达以上。综合判定符合以下所有特倒平板。。

5、不透光的瓶中。电泳缓冲液在双蒸水中溶解碱,。再加双蒸水定容至,室温保存。使用时,配成电泳缓冲液。溴酚蓝指示剂溶液上样缓冲液将溴酚蓝,加双蒸水,在室温下过夜。待溶解后再吲哚试验按表的吲哚靛基质试验的规定执行。培养基变红为阳性不变红为阴性。酶试验将待检菌接种于酶培养基平板上,培养。菌落周围培养基出现粉红色晕圈为阳性无晕圈为阴性。氧化酶试验以毛细管吸取甲基对苯胺的水溶液滴在细菌的菌落上。菌落呈玫瑰红色深紫色为阳性不变色为阴性。硫化氢试验按。培养基。

6、灭菌,倒平板。酶试验培养基酪朊水解物大豆蛋白胨甲苯胺蓝琼脂蒸馏水除和甲苯胺蓝之外的成分,混匀后分装,灭菌。酯酶试验测定培养基基础培养基蛋白胨琼脂蒸馏水,于灭菌底物,于灭菌冷却基础培养基至,加至终浓度为酶培养基平板上,培养。菌落周围培养基出现粉红色晕圈为阳性无晕圈为阴性。氧化酶试验以毛细管吸取甲基对苯胺的水溶液滴在细菌的菌落上。菌落呈玫瑰红色深紫色为阳性不变色为阴性。硫化氢试验按。培养基黑色为阳性不变黑色为阴性。甲基红试验按表的甲基红试验的规。

7、落呈玫瑰红色深紫色为阳性不变色为阴性。硫化氢试验按。培养基黑色为阳性不变黑色为阴性。甲基红试验按表的甲基红试验的规定执行。培养基变红色为阳性不变红色为阴性。过氧化氢酶接触酶试验按表的接触酶试验的规定执行。有气泡产生为阳性无气泡产生为阴性。剖检胃肠道空虚,肠壁变薄,肠腔内。裂腹鱼无乳链球菌病诊断技术规程。基因扩增与序列同源性分析扩增获得约的基因片段,其序列与附录所列的基因序列进行比对,同源性达以上。综合判定符合以下所有特征者判定为裂腹鱼无乳链。

8、试验按表的接触酶试验的规定执行。有气泡产生为阳性无气泡产生为阴性。剖检胃肠道空虚,肠壁变薄,肠腔内冲液刚好淹没胶面。将上述样品和溴酚蓝指示剂溶液混合后加入样品孔,使用分子量标准参照物作对照。电泳约,当溴酚蓝到达底部时停止。于紫外光下观察,并在长波紫外灯下用刀片切下含目的条带约的胶块,放入无菌离心管中称重。扩增产物纯化测序及同源性分析扩增产物纯化在长波紫外灯下用刀片切下含目的条带约的胶块,放入无菌离心管中称重按每琼脂糖凝胶加酚,将酚加入含有目。

9、球菌病临床症状与相符菌落形态和染色观察与和相符生理生化反应结果与相符基因扩增和同源性分析结果与相符。附。裂腹鱼无乳链球菌病诊断技术规程。吲哚试验按表的吲哚靛基质试验的规定执行。培养基变红为阳性不变红为阴性。酶试验将待检菌接种于双蒸水中,缓慢加入,再加双蒸水定容至,室温保存。酚﹕氯仿﹕异戊醇﹕﹕将体积的酚体积的氯仿和体积的异戊醇混合即可,室温贮存于不透光的瓶中,上面加上缓冲液,保存。氯仿﹕异戊醇﹕将体积的氯仿和体积的异戊醇混合即可,室温贮存于。

10、。把待检菌穿刺接种于半固体琼脂,培养。若待检菌由穿刺线向周扩散,其边缘呈云雾状,为运动性阳性若待检菌只生长在穿刺线上,边缘十分清晰,为运动性阴酶培养基平板上,培养。菌落周围培养基出现粉红色晕圈为阳性无晕圈为阴性。氧化酶试验以毛细管吸取甲基对苯胺的水溶液滴在细菌的菌落上。菌落呈玫瑰红色深紫色为阳性不变色为阴性。硫化氢试验按。培养基黑色为阳性不变黑色为阴性。甲基红试验按表的甲基红试验的规定执行。培养基变红色为阳性不变红色为阴性。过氧化氢酶接触酶。

11、的条带胶块的离心管中经漩涡震荡仪震荡,将离心中。电泳缓冲液在双蒸水中溶解碱,。再加双蒸水定容至,室温保存。使用时,配成电泳缓冲液。溴酚蓝指示剂溶液上样缓冲液将溴酚蓝,加双蒸水,在室温下过夜。待溶解后再称取蔗糖,加双蒸水溶解后移入溴酚蓝溶液中,摇匀后定容至,加入溶液滴,调至蓝色。附录资料性附录无乳链球菌基因参考序列,备用。基因扩增反应体系缓冲液无,引物,酶无菌双蒸水补足致。混匀后,离心。设空白对照,空白对照取等体积的双蒸水代替模板。反应条件预。

12、定执行。培养基变红色为阳性不变红色为阴性。过氧化氢酶接触酶试验按表的接触酶试验的规定执行。有气泡产生为阳性无气泡产生为阴性。剖检胃肠道空虚,肠壁变薄,肠腔内裂腹鱼无乳链球菌病诊断技术规程.的剖解变化。实验室样品采集样品采集按执行。细菌分离与纯化在无菌的环境中,从病鱼的肝肾或脑中直接取样常规划线接种培养基,培养。从中挑取表面光滑微隆起边缘整齐的乳白色圆形优势菌落划线接种平板进行纯化培养。细菌鉴定革兰氏染色按。生理生化试验运动性试验半固体琼脂按。

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