1、洗脱缓冲液,室温放置,离心。再次向吸附膜的中间部位悬空滴加经水浴预热的洗脱缓冲液,室温放置,离心。回收得到的产物于冰箱保存备用。结果检测。用的琼脂糖凝胶电泳检测提取物基因芯片清洗仪可选。芯片杂交盒。微量可调移液器和灭菌吸头。灭菌反应管。培养基和试剂缓冲胨水增菌液见附录。硫磺酸盐煌绿增菌液见附录。改良缓冲蛋白胨水见附录。增菌培养液见附录。氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤见附录。弯曲杆菌增菌肉汤见附录。改良新生霉素增菌肉汤见附录。扩增结果检测反应结束后取扩增产物加入载样液,用的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。若在之间出现明显的扩增条带,即可进行芯片杂交实验。注。

2、汤犿犈犆狀胰蛋白胨号胆盐乳糖无水磷酸氢钾无水磷酸氢钾氯化钠蒸馏水将上述成分溶于水后校正至,分装后灭菌,取出后冷却至室温,以肉及肉制品中常见致病菌检测方法基因芯片法.进入循环共个循环最后延伸。扩增结果检测反应结束后取扩增产物加入载样液,用的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。若在之间出现明显的扩增条带,即可进行芯片杂交实验。注如果在此片段范围内无可见扩增条带,同时阳性质控也无可见扩增条带,则可能为扩增失败,建议更换另批次的扩增试剂,重新扩增。芯片杂交杂交体系配制将杂交液置水浴预热,按表配制。表杂交体系组分体积杂交液种扩增产物各总体积变性将杂交体系变性,。

3、清洗仪清洗按需要量配制好芯片洗液和洗液。按仪器操作说明书要求将芯片清洗仪开机预热,待预热完成后将芯片放入清洗槽中开始清洗,清洗完成后,将芯片放入清洗仪器的离心腔中离心甩干。芯片扫描及结果判读芯片杂交结果扫描使用微阵列芯片扫描仪对洗净杂交后的芯片进行扫描分析。结果的判定标准信号值背景信号平均值背景信。倒掉废液,吸附柱放入收集管中。向吸附柱加入漂洗液,离心,倒掉废液。吸附柱放回收集管中,离心,去除吸附柱中残余的漂洗液。将吸附柱置于室温或温箱放置,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱转入个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加经水浴预热的。

4、大肠杆菌李斯特氏菌单核细胞增生李斯特氏菌沙门氏菌沙门氏菌空肠弯曲杆菌单核细胞增生李斯特氏菌注对于核酸序列,除了分别代表各种核酸之外,代表蒸馏水中,经滤膜过滤除菌,每经灭菌的基础液中加,混匀。犃号抗生素溶液万古霉素甲氧苄氨嘧啶乳酸盐多粘菌素将各成分溶于蒸馏水中,经滤膜过滤除菌,每经灭菌的基础液中加。犃号抗生素溶液利福平甲氧苄氨嘧啶乳酸盐多粘菌素放线菌酮将各成分置容量瓶中,加入乙醇,振摇使溶解,加入蒸馏水至,过滤除菌,每经高压灭菌的基础液中加。犃改良犈犆新生霉素增菌肉。

5、置约,加热煮沸至完全溶解,调至,高压灭菌,临用时,以无菌操作分装灭菌玻璃瓶,每瓶或。犃硫磺酸盐煌绿增菌液犜犜犅犃基础液蛋白胨牛肉膏氯化钠碳酸钙蒸馏水除碳酸钙外,将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静置约,加热煮沸至完全溶解,再加入碳酸钙,调至,高压灭菌。向吸附柱中加入去蛋白液,离心,倒掉废液,吸附柱放入收集管中。向吸附柱中加入漂洗液,离预热。取出杂交后芯片,将芯片放在预热好的洗液中,水浴摇床振荡清洗,再转入预热好的洗液中,犛犖犜水浴摇床振荡清洗。最后用预热好清水中振荡清洗次,清洗后的芯片经离心以去除芯片表面的液体。此芯片可避光保存,在内扫描结果芯。

6、如果在此片段范围内无可见扩增条带,同时阳性质控也无可见扩增条带,则可能为样品增菌液的为模板进行两个独立的多重扩增。扩增产物与固定有种目标致病菌特异性探针的基因芯片进行杂交,用芯片扫描仪对杂交芯片进行扫描并判定结果。阳性结果用传统方法确证。设备和材料高压灭菌锅。恒温培养箱。微需氧培养装置。高速离心机犵以上。水浴锅。超净工作台。仪。水平式电泳仪。凝胶成像分析系统。水浴摇床基因芯片扫描仪。肉及肉制品中常见致病菌检测方法基因芯片法。组成参见附录。组成参见附录。犜犪狇酶。阳性质控基因组载样液。清洗仪清洗按需要量配制好芯片洗液和洗液。按仪器操作说明书要求。

7、冰浴。杂交将杂交盒平放在桌面上,在杂交盒的两边凹槽内加入约灭细菌基因组通过琼脂糖凝胶电泳,出现的电泳条带位置在以上,且清晰可见。犘犆犚扩增将提取的细菌基因组同时用两个反应体系进行扩增,电泳检测扩增产物。反应体系的配制如表。表犘犆犚反应体系单位为微升反应液组成检测反应阳性质控阴性质控犜犪狇细菌基因组犛犖犜表续单位为微升反应液组成检测反应阳性质控阴性质控阳性质控基因组无核酸酶灭菌水反应体系的配制如表。表犘犆犚反应体系单位为微升反应液组成检测反应阳性质控阴性质控犜犪狇细菌基因组阳性质控基因组无核酸酶灭菌水反应的循环参数预变性物。细菌基因组通过琼脂糖。

8、的中间部位悬空滴加经水浴预热的洗脱缓冲液,室温放置,离心。再次向吸附膜的中间部位悬空滴加经水浴预热的洗脱缓冲液,室温放置,离心。回收得到的产物于冰箱保存备用。结果检测。用的琼脂糖凝胶电泳检测提取物进入循环共个循环最后延伸。扩增结果检测反应结束后取扩增产物加入载样液,用的琼脂糖凝胶电泳检测扩增结果。若在之间出现明显的扩增条带,即可进行芯片杂交实验。注如果在此片段范围内无可见扩增条带,同时阳性质控也无可见扩增条带,则可能为扩增失败,建议更换另批次的扩增试剂,重新扩增。芯片杂交杂交体系配制将杂交液置水浴预热,按表配制。表杂交体系组分体积杂交液种扩增。

9、胶电泳,出现的电泳条带位置在以上,且清晰可见。犘犆犚扩增将提取的细菌基因组同时用两个反应体系进行扩增,电泳检测扩增产物。反应体系的配制如表。表犘犆犚反应体系单位为微升反应液组成检测反应阳性质控阴性质控犜犪狇细菌基因组犛犖犜表续单位为微升反应液组成检测反应阳性质控阴性质控阳性质控基因组无核酸酶灭菌水反应体系的配制如表。表犘犆犚反应体系单位为微升反应液组成检测反应阳性质控阴性质控犜犪狇细菌基因组阳性质控基因组无核酸酶灭菌水反应的循环参数预变性基的配制犃缓冲胨水增菌液犅犘蛋白胨氯化钠磷酸氢钠含个结晶水磷酸氢钾蒸馏水将各成分加入蒸馏水中,搅混均匀,静。

10、氯化钠胰蛋白胨大豆肉汤胰蛋白胨植物蛋白胨氯化钠磷酸氢钾葡萄糖蒸馏水将各成分完全溶于蒸馏水中,分装于试管或玻璃瓶,高压灭菌,最终。犃弯曲杆菌增菌肉汤犃基础液布氏肉汤胰蛋白胨蛋白胨葡萄糖酵母浸膏氯化钠亚硫酸氢钠蒸馏水将各成分溶于蒸馏水中,高压灭菌,最终,分装于规格适宜的烧瓶。犛犖犜犃犉犅犘浓原液硫酸亚铁焦亚硫酸钠丙酮酸钠将各成分溶于。倒掉废液,吸附柱放入收集管中。向吸附柱加入漂洗液,离心,倒掉废液。吸附柱放回收集管中,离心,去除吸附柱中残余的漂洗液。将吸附柱置于室温或温箱放置,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱转入个干净的离心管中,向吸附。

11、产物各总体积变性将杂交体系变性,冰浴。杂交将杂交盒平放在桌面上,在杂交盒的两边凹槽内加入约灭离心。倒掉废液,吸附柱放入收集管中。向吸附柱加入漂洗液,离心,倒掉废液。吸附柱放回收集管中,离心,去除吸附柱中残余的漂洗液。将吸附柱置于室温或温箱放置,以彻底晾干吸附材料中残余的漂洗液。将吸附柱转入个干净的离心管中,向吸附膜的中间部位悬空滴加经水浴预热的洗脱缓冲液,室温放置,离心。再次向吸附膜的中间部位悬空滴加经水浴预热的洗脱缓冲液,室温放置,离心。回收得到的产物于冰箱保存备用。结果检测。用的琼脂糖凝胶电泳检测提肉及肉制品中常见致病菌检测方法基因芯片法。

12、芯片清洗仪开机预热,待预热完成后将芯片放入清洗槽中开始清洗,清洗完成后,将芯片放入清洗仪器的离心腔中离心甩干。芯片扫描及结果判读芯片杂交结果扫描使用微阵列芯片扫描仪对洗净杂交后的芯片进行扫描分析。结果的判定标准信号值背景信号平均值背景信号值标准差,且信号值阴性对照信号平均值阴性对照信号值标准差,探针杂交结果为阳性背景信号平均值背景信号值标准差信号值背景信号平均值背景信号值标准差,且阴性对照信号平均值阴性对照信号值标准差信号值阴性对照信号平均值阴性对照信号值标准差,探针杂交结进入循环共个循环最后延伸。肉及肉制品中常见致病菌检测方法基因芯片法。犃。

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