1、犛犖犜缓冲液孔和阴性对照孔的值,当阴性对照孔的值时,按计算阳性对照值阴性对照值同样品的重复性基本致。犅在满足了质量要求后,结果原则上可判断如下样品值阴性对照值,判为阳性样品值阴性对照值接近阈值,判为可疑样品,需重新做次,料的检疫与鉴定。犅加酶标抗体用酶标抗体稀释缓冲液按说明将酶标抗体稀释至工作浓度,并加入到酶联板中,孔,加盖,孵育,酶联板用自来水彻底冲洗,再用蒸馏水洗涤次,洗涤次,每次。犅加底物将底物加入到底物缓冲液中使终浓度为现配现用,按孔,加入到酶联板中沉淀犵离心,弃乙醇沉淀于室温下充分干燥后,溶于处理中,保存备用。也可采用其他有效的提取方法。犆犚犜犘犆犚反应检。

2、见附录。样品制备种子抽样按照的规定执行。将种子重点挑取畸形不成熟的种子播于灭菌土中,于生长并进行症状观察。待长出片片叶后将表现症状的植株编号,未表现症状的植株分组株为组并编号。苗木按规次,每次。犅加底物将底物加入到底物缓冲液中使终浓度为现配现用,按孔,加入到酶联板中,室温避光孵育。犅读数在不同的时间内如,或更长时间,用酶联仪在处读值,或用肉服观察显色情况。犅结果判断犅对照孔的值缓冲液孔阴性对照及阳性对照孔,应该在质量控和的用量需要依据反转录酶的品牌进行调整。检测方法酶联免疫吸附测定见附录。犚犜犘犆犚检测见附录。免疫电镜检测按照的规定执行。生物学测定参见附录。结果判定和。

3、要求后,结果原则上可判断如下样品值阴性对照值,判为阳性样品值阴性对照值接近阈值,判为可疑样品,需重新做次,合成。和的用量需要依据反转录酶的品牌进行调整。犅加酶标抗体用酶标抗体稀释缓冲液按说明将酶标抗体稀释至工作浓度,并加入到酶联板中,孔,加盖,孵育,酶联板用自来水彻底冲洗,再用蒸馏水洗涤次,洗涤番茄环斑病毒检疫鉴定方法.值同样品的重复性基本致。犅在满足了质量要求后,结果原则上可判断如下样品值阴性对照值,判为阳性样品值阴性对照值接近阈值,判为可疑样品,需重新做次,或者任选和中的种方法加以验证样品值阴性对照值明显,判为阴性。犅若满足不了质量要求,则不能进行结果判制范围内,即。

4、行。生物学测定参见附录。结果判定和中的两种方法检测结果为阳性,即可判定。犅底物对硝基苯磷酸钠。犅样品抽提缓冲液狆犎亚硫酸钠叠氮钠储存。犅包被缓冲液狆犎碳酸钠碳酸氢钠叠氮钠蒸馏水定容至,储存。用具微量移液器酶联板研钵等。犛犖犜试剂酶联免疫吸附测定试剂番茄环斑病毒检疫鉴定方法.制范围内,即犛犖犜缓冲液孔和阴性对照孔的值,当阴性对照孔的值时,按计算阳性对照值阴性对照值同样品的重复性基本致。犅在满足了质量要求后,结果原则上可判断如下样品值阴性对照值,判为阳性样品值阴性对照值接近阈值,判为可疑样品,需重新做次,等。犛犖犜试剂酶联免疫吸附测定试剂见附录反转录聚合酶链式反应检测试剂。

5、的分组检测,分组方法同。犛犖犜附录犅规范性附录双抗体夹心酶联免疫吸附测定犅试材犅酶联板的要求使用质量有保证厂商生产的酶联板。犅包被抗体特异性的番茄环斑病毒抗体。犅酶标抗体碱性磷酸酯酶标记的番茄环斑病毒抗体定为阳性后,或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生物学测定,并进行复验。样品保存样品保存经检验确定携带番茄环斑病毒的样品应在合适的条件下保存,种子保存在,病株在或者冰箱中保存,做好标记和登记工作。用具微量移液器酶联板研钵制范围内,即犛犖犜缓冲液孔和阴性对照孔的值,当阴性对照孔的值时,按计算阳性对照值阴性对照值同样品的重复性基本致。犅在满足了质量。

6、测引物见表。的合成在反应管中,加入总,下游引物中国检验检疫科学研究院中华人民共和国厦门出入境检验检疫局中华人民共和国北京出入境检验检疫局。本标准主要起草人陈红运邓丛良陈青赵文军黄文胜廖富荣林石明朱水芳。犛犖犜番茄环斑病毒检疫鉴定方法范围本标准规定了番茄环斑病毒检疫鉴定方法。本标准适用于可能携带番茄环斑病毒的进境种子苗木组培苗等繁殖材定为阳性后,或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生物学测定,并进行复验。样品保存样品保存经检验确定携带番茄环斑病毒的样品应在合适的条件下保存,种子保存在,病株在或者冰箱中保存,做好标记和登记工作。用具微量移液器酶联板。

7、中的两种方法检测结果为阳性,即可判定检出番茄环斑病毒。酶联弃乙醇沉淀于室温下充分干燥后,溶于处理中,保存备用。也可采用其他有效的提取方法。犆犚犜犘犆犚反应检测引物见表。的合成在反应管中,加入总,下游引物,水浴,取出后定为阳性后,或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生物学测定,并进行复验。样品保存样品保存经检验确定携带番茄环斑病毒的样品应在合适的条件下保存,种子保存在,病株在或者冰箱中保存,做好标记和登记工作。用具微量移液器酶联板研钵犛犖犜附录犆规范性附录犚犜犘犆犚检测犆试剂犆裂解液。犆冰乙酸加去离子水定容至。用时加水稀释至。犆加样缓冲液溴。

8、犵离心,弃上清液加的乙醇洗次,每次。犅加底物将底物加入到底物缓冲液中使终浓度为现配现用,按孔,加入到酶联板中,室温避光孵育。犅读数在不同的时间内如,或更长时间,用酶联仪在处读值,或用肉服观察显色情况。犅结果判断犅对照孔的值缓冲液孔阴性对照及阳性对照孔,应该在质量控检出番茄环斑病毒。酶联测定为阳性后,或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生物学测定,并进行复验。样品保存样品保存经检验确定携带番茄环斑病毒的样品应在合适的条件下保存,种子保存在,病株在或者冰箱中保存,做好标记和登记工作。见附录反转录聚合酶链式反应检测试剂见附录。样品制备种子抽样按照的。

9、酚蓝质量浓度蔗糖水溶液犆实验步骤犆总犚犖犃提取称取植物组织加液氮研磨成粉末状,迅速将其移入灭菌的离心管中,加入室温避光孵育。犅读数在不同的时间内如,或更长时间,用酶联仪在处读值,或用肉服观察显色情况。犅结果判断犅对照孔的值缓冲液孔阴性对照及阳性对照孔,应该在质量控制范围内,即犛犖犜缓冲液孔和阴性对照孔的值,当阴性对照孔的值时,按计算阳性对照值阴性对照发布实施中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局发布书书书前言本标准按照给出的规则起草。本标准由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本标准起草单抽样。将苗木种植于隔离温室中,于生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症。

10、体积的异丙醇,颠倒混匀,犵离心,弃上清液加的乙醇洗涤沉淀犵离心水浴,取出后立即放在冰上,加入,水浴,然后再加入,混匀后水浴,水浴番茄环斑病毒检疫鉴定方法.制范围内,即犛犖犜缓冲液孔和阴性对照孔的值,当阴性对照孔的值时,按计算阳性对照值阴性对照值同样品的重复性基本致。犅在满足了质量要求后,结果原则上可判断如下样品值阴性对照值,判为阳性样品值阴性对照值接近阈值,判为可疑样品,需重新做次,移入灭菌的离心管中,加入的试剂,剧烈振荡摇匀,犵离心,取上清液加入饱和苯酚氯甲烷异戊醇∶∶上下颠倒混匀,犵离心,取上清液重复饱和苯酚氯甲烷异戊醇抽提步骤次加倍体积的异丙醇,颠倒混匀,。

11、规定执行。将种子重点挑取畸形不成熟的种子播于灭菌土中,于生长并进行症状观察。待长出片片叶后将表现症状的植株编号,未表现症状的植株分组株为组并编号。苗木按规定抽样。将苗木种植于隔离温室中,于抽样。将苗木种植于隔离温室中,于生长并进行症状观察。有症状的苗木单独检测。没有症状的分组检测,分组方法同。犛犖犜附录犅规范性附录双抗体夹心酶联免疫吸附测定犅试材犅酶联板的要求使用质量有保证厂商生产的酶联板。犅包被抗体特异性的番茄环斑病毒抗体。犅酶标抗体碱性磷酸酯酶标记的番茄环斑病毒抗体定为阳性后,或免疫电镜检测结果为阳性可判定检出番茄环斑病毒。必要时可进行生物学测定,并进行复验。样品。

12、钵者任选和中的种方法加以验证样品值阴性对照值明显,判为阴性。犅若满足不了质量要求,则不能进行结果判断。番茄环斑病毒检疫鉴定方法。书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准番茄环斑病毒检疫鉴定方法次,每次。犅加底物将底物加入到底物缓冲液中使终浓度为现配现用,按孔,加入到酶联板中,室温避光孵育。犅读数在不同的时间内如,或更长时间,用酶联仪在处读值,或用肉服观察显色情况。犅结果判断犅对照孔的值缓冲液孔阴性对照及阳性对照孔,应该在质量控入的试剂,剧烈振荡摇匀,犵离心,取上清液加入饱和苯酚氯甲烷异戊醇∶∶上下颠倒混匀,犵离心,取上清液重复饱和苯酚氯甲烷异戊醇抽提步骤次加倍。

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