1、录洗涤次。加酶将切片放入含有碱性磷酸酶标记的抗兔,室温作用。洗涤用含吐温的洗涤次。染色用染色液见附录染色后用自来水洗,再用苏木素染色液复染。结果判定阳性结果为在血管或心内膜的内皮细胞内,可清晰地看到染成红色的细胞质和细胞核,而阴性结果则没看到任何颜色。检测样品切片如果在内皮细胞内清晰地看到染成红色的细胞核,就可认为阳性。犛犖犜通常在心脏和肾脏内皮细胞内的染色反应最强烈。而具有广泛性出血性损害的内皮细胞内,其染色反应比较轻微,甚至没有反应,可能由于感染的内皮细胞正在康复。逆转录聚合酶链式反应犚犜犘犆犚样品处理称取匀浆成糊状后的组织样品件下。

2、毒。传染性鲑鱼贫血病病毒是种直径的正粘病毒,病毒的形态理化性质和基因组特征与正粘病毒致。的基因组是由条长度分布从到的单股负链组成,具有血凝性受体破坏和融合活性,总分子量为。的储藏也会出现黑肝,但它与的区别是会出现心脏组织的损伤。此外,在感染和所谓冬季溃疡症中能观察到肝发白以及无出血性坏死。其他资料参见附录。病理组织学变化感染的鱼可能表现为系列病理变化,根据感染剂量毒株温度年龄及免疫情况,可以表现为从没有病理症状到急性病理变化。外表损伤不能确诊为,但是常出现贫血及循环紊乱。主要出现以下典型的组织病理变化肝脏弥漫性的出血坏死,最后融合成带状,只。

3、血肿大腹膜上出现瘀斑,有时可见到眼睛出血。肝细胞变性坏死及肾小管坏死出血是疾病暴发时常见的组织病理学特征。黑肝是该病最基本的症状,也是最特别的症状。心肌病综合症也会出现黑肝,但它与的区别是会出现心脏组织的损伤。此外,在感染和所谓冬季溃疡症中能观察到肝发白以及无出血性坏死。这种传染病主要在海水鱼或接触到海水的鱼中发现,但也有在淡水鱼中暴发该病的报道。传染速度很慢,因而虽然该或细胞由国家质量监督检验检疫总局指定实验室提供。水试剂配制见附录用水应符合中级水的规格。加抗体将上述切片加入用含脱脂奶的见附录稀释兔抗抗体,作用过夜,然后用含吐温的见附。

4、后再加斑鳟虹鳟和大西洋鲱鱼中存活和增殖,它们是该病原的无症状带毒者。发病初期出现致死性全身临床症状贫血腹水肝脾肿大变黑脾充血肿大腹膜上出现瘀斑,有时可见到眼睛出血。肝细胞变性坏死及肾小管坏死出血是疾病暴发时常见的组织病理学特征。黑肝是该病最基本的症状,也是最特别的症状。心肌病综合症也会出现黑肝,但它与的区别是会出现心脏组织的损伤。此外,在感染和所谓冬季溃疡症中能观察到肝发白以及无出血性坏死。这种传染病主要在海水鱼或接触到海水的鱼中发现,但也有在淡水鱼中暴发该病的报道。传染速度很慢,因而虽然该病在有些地方引起很高的死亡率,但仍认为是低毒力的病。

5、不能太干,因不易溶解,加无水见附录溶解,用作模板。逆转录制备犮犇犖犃反应体系中,逆转录酶浓缩缓冲液下游引物,提取的核酸模板,加水,混匀后置反应病毒引起的大西洋鲑鱼传染性疾病。世纪年代中期首先在挪威报道,最近在加拿大新布鲁氏威克和新斯科舍法罗群岛在大西洋东部美国缅因州和英国苏格兰和设得兰群岛报道此病。该病毒已经从来自智利的银大麻哈鱼和来自爱尔兰的虹鳟鱼中分离得到。大西洋鲑鱼是该病的唯易感种,但人工感染实验表明,该病毒能在海鳟斑鳟虹鳟和大西洋鲱鱼中存活和增殖,它们是该病原的无症状带毒者。发病初期出现致死性全身临床症状贫血腹水肝脾肿大变黑脾充。

6、列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。分析实验室用水规格和试验方法缩略语下列缩略语适用于本文件。大西洋鲑肾细胞系大鳞大麻哈鱼鱼胚细胞系细胞病理变化,亚乙基胺,又名,氮杂环辛烷焦碳酸乙酯溴化乙锭异硫氰酸荧光素间接荧光抗体试验性对照和阴性对照的模板同时取等体积的水作为空白对照的模板。犘犆犚反应在反应体系中,犜犪狇酶用浓缩缓冲液,氯化镁上游引物和下游引物各,反转录产物,犜犪狇酶,加水。将此混合物混匀后低速离心,再将反应管置于扩增仪。

7、剩下大静脉周围的部分未受损害病程发展后期肝窦状小管扩张充血,甚至坏死早期阶段,窦状小管内皮破裂,并有红细胞浸润带有嗜伊红细胞脱落渗出和窦状小管从轻微多点出血到弥漫性广泛性出血并形成空隙的急性肾小管坏死和或细胞间隙出血为特征的肾损伤在脾中可以看到窦状小管中度到严重充血以及嗜红细胞现象,有吞噬红细胞作用。在疾病发展的早期阶段,红细胞比容值为,当红细胞比容值在以下时,就可看到序列犆犐犛犃犞犚犜犘犆犚扩增产物的基因序列犫狆犆犐犛犃犞荧光定量犚犜犘犆犚扩增产物的基因序列犫狆犛犖犜。冷冻切片机。高速冷冻离心机。电泳仪。扩增仪。荧光定量扩增仪。紫外观。

8、,而阴性结果则没看到任何颜色。检测样品切片如果在内皮细胞内清晰地看到染成红色的细胞核,就可认为阳性。犛犖犜通常在心脏和肾脏内皮细胞内的染色反应最强烈。而具有广泛性出血性损害的内皮细胞内,其染色反应比较轻微,甚至没有反应,可能由于感染的内皮细胞正在康复。逆转录聚合酶链式反应犚犜犘犆犚样品处理称取匀浆成糊状后的组织样品如脾心肝肾也可用病料的细胞分离培养物,放在的离心管中,先加入溶液见附录,混匀后再加判为荧光阴性反应。阳性反应结果判定检测结果呈现值且扩增曲线有明显的对数增长期,判为荧光阳性反应。对于值的样品,需重新取样进行重复检测。如果重复检测。

9、察灯或凝胶成像仪。以临床和病理变化为基础的诊断肉眼观察行为和病理变化肉眼观察行为和病理变化如下腮腮部血液瘀积传染性鲑鱼贫血病检疫技术规范.如脾心肝肾也可用病料的细胞分离培养物,放在的离心管中,先加入溶液见附录,混匀后再加溶液到,混匀后于作用。犚犖犃抽提在上述中再加入抽提液见附录,充分混匀犵离心,取上层水相约加抽提液见附录,用力混匀犵离心,取上层水相约加入倍体积预冷的异丙醇约,倒置数次混匀后,过夜或至少以上沉淀核酸在不能及时进行检测的情况下,可置于倍体积无水乙醇中,长期保存犵离心,小心弃上清液,倒置离心管,用滤纸吸干残余液体应尽量吸干,干燥约。

10、犅犈电泳缓冲液硼酸加水至用的盐酸调到。犛犖犜犃犈犅即溴化乙锭,核酸染色剂用水配制成的浓缩液。使用时,每电泳缓冲液或琼脂糖凝胶中加浓缩液。犃加样缓冲液溴酚蓝,蔗糖,加水至溶解。犛犖犜附录犅资料性附录传染性鲑鱼贫血病简介传染性鲑鱼贫血病,是由正加抗体将上述切片加入用含脱脂奶的见附录稀释兔抗抗体,作用过夜,然后用含吐温的见附录洗涤次。加酶将切片放入含有碱性磷酸酶标记的抗兔,室温作用。洗涤用含吐温的洗涤次。染色用染色液见附录染色后用自来水洗,再用苏木素染色液复染。结果判定阳性结果为在血管或心内膜的内皮细胞内,可清晰地看到染成红色的细胞质和细胞核。

11、的值,且曲线有明显的对数增长期,判为阳性反应。否则判为荧光阴性反应。必要时,对初次检测呈荧光阳性反应的样品进行重复检测。不同应用目的的方法评价目前进行的检测和诊断的方法,见表。表犐犛犃的检测和诊断方法方法幼年前期鱼幼年后期鱼壮年鱼成年鱼初诊确诊综合症状病理组织肾的印迹免疫组化病毒的细胞分离鉴定或荧光定量注表示此方法有效,诊断结果具有实用性特异性和敏感性,推荐使用表示此方法具有良好的特异性和敏感性,是种标准方法表示此方法已在些情况下采用,但由于费用准确性或其他因素,其应用受到严格限悬液倍倍比稀释,每个稀释度设两个平行样。同时设置阳性和阴。

12、。先,再经进行次循环,然后延伸,最后保温。琼脂糖电泳用电泳缓冲液见附录配制的琼脂糖平板含,见附录。将扩增产物和加样缓冲液见附录混匀后加入样品孔。电泳时设立标准分子量作对照,电泳约,当溴酚蓝到达底部时停止。传染性鲑鱼贫血病检疫技术规范。书书书中华人民共和国出入境检验检疫行业标准传染性鲑鱼贫血病检疫技术规范传染性鲑鱼贫血病逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠白血病病毒大西洋鲑前肾细胞系试剂和材料标准毒株单克隆抗体兔抗抗体荧光标记的羊抗鼠荧光标记的羊抗兔细胞系或细胞由国家质量监督检验检疫总局指定实验室提供。水试剂配制见附录用水应符合中级水的规格。犃犜。

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