1、列上的个独立区域,利用犅狊狋酶启动循环链置换反应,在狋狅狓犛基因序列启动互补链合成,在同链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环混合物从析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的结合,产生副产物焦磷酸镁形成乳白色沉淀,加入显色液,即可通过颜色变化观察判定结上述条件不符,则本次检测结果无效,应更换试剂按本方法重新检测。犛犖犜附录犃资料性附录副溶血性弧菌狋狅狓犛基因序列犃副溶血性弧菌狋狅狓犛基因序列犪犮犮犲狊狊犻狅狀狀狅犔增菌培养按照标准方法进行样品制备和增菌。细菌模板犇犖犃的制备增菌液模板犇。
2、应后可不必开盖即可观察结果。犛犖犜结果判定和报告在空白对照和阴性对照反应管液体为橙色,阳性对照反应管液体呈绿色的条件下待检样品反应管液体呈绿色,该样品结果为副溶血性弧菌初筛阳性,对样品的增菌液或可疑纯菌落进步按中操作步骤进行确认后报告结果待检样品反应管液体呈橙色则可报告副溶血性弧菌检验结果为阴性。若以待检测。采用以下方法,也可使用副溶血性弧菌检测试剂盒按照说明书操作。采用下述方法,也可使用等效的商品化的提取试剂盒并按其说明提取制备模板。犛犖犜环介导恒温核酸扩增反应体系副溶血性弧菌反应体系见表。
3、,。阳性对照副溶血性弧菌标准菌株,或含目的片段的亦可。本部分起草单位中华人民共和国珠海出入境检验检疫局中华人民共和国北京出入境检验检疫局中华人民共和国广东出入境检验检疫局中华人民共和国湖北出入境检验检疫局广州华峰生物科技有限公司上海交通大学。本部分主要起草人冯家望成晓维李丹琳曾静李志勇曾宪东易敏英曹以诚杜正平王志强凌莉史贤明张建华王大鹏。犛犖犜出口食品中致病菌环介导恒温扩增聚乙醇辛基苯基醚技术概要根据副溶血性弧菌特有的靶序列狋狅狓犛基因参见附录设计的两对特殊的内外引物,特异性识犛犖犜别靶序。
4、.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分副溶血性弧菌.甜菜碱硫酸镁犅狊狋聚合酶模板去离子水反应过程按表所述配制反应体系。食品微生物学检验副溶血性弧菌检验分析实验室用水规格和试验方法实验室生物安全通用要求实验室质量控制规范食品分子生物学检测生物安全措施为了保护实验室人员的安全,应由具备资格的工作人员检测副溶血性弧菌,所有培养物和废弃物应按照中的有关规定执行。防污染措施防止污染措在上述反应管中加入显色液,轻轻混匀并在黑色背景下观察。建议使用试剂盒专用反应管,将反应液和显色液次性加入,扩增反。
5、后沸水浴,置冰上犵离心,上清液即为模板取上清液置可保存个月备用。.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分副溶血性弧菌。结果观食品微生物学检验副溶血性弧菌检验分析实验室用水规格和试验方法实验室生物安全通用要求实验室质量控制规范食品分子生物学检测生物安全措施为了保护实验室人员的安全,应由具备资格的工作人员检测副溶血性弧菌,所有培养物和废弃物应按照中的有关规定执行。防污染措施防止污染措施应符合的规定。缩略语下列缩略语适用于本文件。甜菜碱犅狊狋酶犅狊狋犅狊狋。犅狊狋聚合酶酶浓度。显色液荧光染料。
6、犖犃的制备对于获得的增菌液,采用如下方法制备模板直接取该增菌液加到无菌离心管中,犵离心,尽量吸弃上清液加入提取液,混匀后沸水浴,置冰上犵离心,上清液即为模板取上清液置可保存个月备用。.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分副溶血性弧菌。结果观甜菜碱硫酸镁犅狊狋聚合酶模板去离子水反应过程按表所述配制反应体系。食品微生物学检验副溶血性弧菌检验分析实验室用水规格和试验方法实验室生物安全通用要求实验室质量控制规范食品分子生物学检测生物安全措施为了保护实验室人员的安全,应由具备资格的工作人员检测。
7、。表副溶血性弧菌犔犃犕犘反应体系组分工作液浓度加样量反应体系终浓度缓冲液甜菜碱硫酸镁犅狊狋聚合酶模板去离子水反应过程按表所述配制反应体系。计时器。检测程序食品中副溶血性弧菌检测程序见图。由广州华峰生物科技有限公司提供,给出这信息是为了方便本标准的使用者,并不表示对该产品的认可。如果其他等效产品具有相同的效果,则可使用这些等效产品。犛犖犜图食品中副溶血性弧菌犔犃犕犘检测程序操作步骤样品制备犛犖犜别靶序列上的个独立区域,利用犅狊狋酶启动循环链置换反应,在狋狅狓犛基因序列启动互补链合成,在同链上互。
8、格和试验方法实验室生物安全通用要求实验室质量控制规范食品分子生物学检测生物安全措施为了保护实验室人员的安全,应由具备资格的工作人员检测副溶血性弧菌,所有培养物和废弃物应按照中的有关规定执行。防污染措施防止污染措范围的本部分规定了检测出口食品中副溶血性弧菌的环介导恒温核酸扩增法。本部分适用于出口食品中副溶血性弧菌的筛选检测。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。.出口。
9、补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构的茎环混合物从析出的焦磷酸根离子与反应溶液中的结合,产生副产物焦磷酸镁形成乳白色沉淀,加入显色液,即可通过颜色变化观察判定结果。试剂和材料除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯实验用水符合中级水的要求。可疑菌落模板犇犖犃的制备对于分离到的可疑菌落,可直接挑取可疑菌增菌培养按照标准方法进行样品制备和增菌。细菌模板犇犖犃的制备增菌液模板犇犖犃的制备对于获得的增菌液,采用如下方法制备模板直接取该增菌液加到无菌离心管中,犵离心,尽量吸弃上清液加入提取液,混匀。
10、介导恒温扩增犔犃犕犘检测方法第部分副溶血性弧菌范围的本部分规定了检测出口食品中副溶血性弧菌的环介导恒温核酸扩增法。本部分适用于出口食品中副溶血性弧菌的筛选检测。规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件,仅注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件,其最新版本包括所有的修改单适用于本文件。.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分副溶血性弧甜菜碱硫酸镁犅狊狋聚合酶模板去离子水反应过程按表所述配制反应体系。食品微生物学检验副溶血性弧菌检验分析实验室用水规。
11、食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分副溶血性弧菌。甜菜碱浓度。硫酸镁浓度注阴影所示部分为狋狅狓犛基因序列。犛犖犜犃组成引物中碱基构成注为连接序列。犛犖犜书书书犛犖犜附录犅资料性附录副溶血性弧菌犔犃犕犘检测试剂盒犅试剂盒组成每个试剂盒,每个反应体系体积为包括以下成分提取液果。试剂和材料除有特殊说明外,所有实验用试剂均为分析纯实验用水符合中级水的要求。本部分起草单位中华人民共和国珠海出入境检验检疫局中华人民共和国北京出入境检验检疫局中华人民共和国广东出入境检验检疫局中华人民共和国湖北出入境检。
12、副溶血性弧菌,所有培养物和废弃物应按照中的有关规定执行。防污染措施防止污染措测程序操作步骤样品制备增菌培养按照标准方法进行样品制备和增菌。细菌模板犇犖犃的制备增菌液模板犇犖犃的制备对于获得的增菌液,采用如下方法制备模板直接取该增菌液加到无菌离心管中,犵离心,尽量吸弃上清液加入提取液,混匀后沸水浴,置冰上犵离心,上清液即为模板取上清液置可保存个月备用。可疑菌落模板犇犖犃的制备对于分离到的可疑菌落,可直接挑取可疑菌落,再按照步骤制备模板.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分副溶血性弧菌.。
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SNT 2754.5-2011 出口食品中致病菌环介导恒温扩增(LAMP)检测方法 第5部分：副溶血性弧菌
