1、均符合脂肪肝改变，成模率。组及合并组自注射链脲佐菌素后开始出现尿量及饮食量明显增加，约为注射前的倍，其毛发较对照组粗糙无光泽，精神萎靡。表各组模型情况数量只死亡只脂肪肝只成模只成模率组组组组注组为正常对照组，组为组，组为组，组为合并组。各组大鼠不同时期体重变化比较实验过程中，各组大鼠体重均逐渐增加，与对照组相比，各模型组体重明显增加，均有统计学差异。表各组大鼠不同时期体重变化比较数量只组组组组注组为正常对照组，组为组，组为组，组为合并组。与组相比，表示，表示。与组相比，表示，表示。万方数据分类号免疫学密级公开硕士学位论文ε在型糖尿病合并非酒精性脂肪肝中的表达和意义学位申请人王薇学科专业免疫学指导教师邹秀兰教授二四年五月万方数据ε，万方数据三峡。

2、实验所需塑料用品管均需浸泡于水中过夜，高压次后烤箱中烘干备用。乙醇按分子生物学超纯水无水乙醇的比例配置。实验方法总的提取称取肝脏组织置于液中，用匀浆器研磨室温静置分钟，转分离心分钟取上清置入新的管中，加入氯仿，用力摇匀秒，室温静置分钟，转分离心分钟万方数据三峡大学硕士学位论文取上清置入新的管中，加入等量异丙醇，混匀后室温静置分钟，转分离心分钟弃上清，加入乙醇，转分离心分钟弃上清，沥干管中液体，加入分子生物学超纯水，震荡摇匀，直至沉淀溶解用微量核酸蛋白检测仪检测浓度，用分子生物学超纯水稀释至浓度为。反转录基因组的除去反应，反应条件为分钟步骤的反应液用于下述反应，条件为分钟，秒步骤的反应液将制备好的进行扩增，扩增体系如下上游引物下游引物水模板进行如。

3、出膜，漂洗遍，各分钟。法显色将显色液的液和液混匀后避光保存备用在暗房中取出膜置于暗盒中，滴上显色液，待有荧光条带显示后，将与膜大小相同的胶片压在膜上，关闭暗盒进行曝光。将曝光好的胶片进行显影定影，观察结果。凝胶成像分析将胶片扫描后存档，测定灰度值进行数据分析。万方数据三峡大学硕士学位论文结果模型般情况正常对照组组大鼠全部成活，光镜下染色观察肝脏组织为正常肝脏组织，无脂肪变性及肝炎表现。组大鼠成活只，注射后死亡只，成活大鼠小时后随机血糖均大于，光镜下染色观察肝脏组织，有只有脂肪肝改变，成模率。组大鼠全部成活，光镜下染色观察肝脏组织，均符合脂肪肝改变，成模率。合并组大鼠成活只，第周时死亡只，注射后死亡只，小时后随机血糖均大于，光镜下染色观察肝脏组织。

4、可能延缓病变进展。关键词型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病εκ炎症Ⅱ万方数据三峡大学硕士学位论文ε，ε，εκ，ε色，背景无棕黄色。不加抗体的阴性对照，结果为阴性。每张玻片在倍高倍镜下随机观察个视野，每视野计数个细胞，万方数据三峡大学硕士学位论文细胞阳性率为，为，为为。反转录法检测大鼠肝脏ε表达实验材料分子生物学超纯水武汉科瑞公司氯仿武汉科瑞公司异丙醇武汉科瑞公司无水乙醇武汉科瑞公司公司试剂盒公司扩增试剂盒公司大鼠ε引物上海邦奕商贸有限公司大鼠引物上海邦奕商贸有限公司低温高速离心机型德国公司仪型新加坡公司微量核酸蛋白检测仪公司实时定量仪美国公司实验用具准备及试剂配制玻璃匀浆器需先泡酸过夜，洗净后烘干小时备用。实验所用金属制品剪刀镊子等均需烘干小时备用。。

5、玻板洗净，吹风吹干，装入制胶架中备用制作分离胶，加入乙醇封胶倒出乙醇，用水冲洗后，用滤纸吸干水分，制作浓缩胶待胶干后将玻板固定于垂直电泳槽中，倒入电泳缓冲液加样，电泳分钟后，电泳分钟转膜切割目的蛋白胶带置于转移缓冲液中剪张滤纸张海绵在转移缓冲液中浸泡分钟备用，将膜剪成目的胶带相同大小在甲醇中浸泡秒备用转膜打开转膜夹，按照从下至上的顺序依次放置白色夹板海绵张滤纸膜目的胶带张滤纸海绵黑色夹板，注意避免气泡。将转膜夹固定于转膜槽中，转膜槽置于碎冰中，电压电泳分钟。封闭及抗体孵育取出膜置于封闭液中，室温振荡分钟漂洗遍，各分钟，然后置于已稀释好的抗液中水平振荡过夜取出膜，漂洗遍，各分钟，然后置于已稀释好的二抗液中室温振荡分钟万方数据三峡大学硕士学位论文取。

6、大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文进行成果鉴定或申报奖励，。

7、下反应↑循环次↑数据分析用的计算方法计算各组ε的相对表达量实验组ε实验组对照组ε对照组万方数据三峡大学硕士学位论文免疫印迹法检测大鼠肝脏ε的表达实验材料型垂直板电泳系统美国公司水平摇床型北京六公司低温高速离心机型公司多功能酶标仪型公司彩虹蛋白公司ε抗体公司标记的羊抗鼠武汉科瑞公司蛋白浓度测定试剂盒武汉科瑞公司酶标包被板武汉科瑞公司显色液碧云天生物技术研究所制胶试剂盒武汉博士德公司脱脂奶粉伊利牌显影粉定影粉武汉科瑞公司光胶片柯达上样缓冲液武汉科瑞公司组织裂解液普利莱基因技术有限公司膜公司粉液均购于武汉科瑞公司实验试剂配制分离胶双蒸水，。浓缩胶双蒸水，。电泳缓冲液，甘氨酸，双蒸水定容至后再加入。转移缓冲液，甘氨酸，双蒸水定容至后再加入，使用前再加入。

8、眼观，型糖尿病组肝脏稍饱满，边缘稍圆钝，质地稍脆。光镜下，肝小叶结构基本完整清晰，肝细胞浊肿明显，部分肝细胞体积增大。组合并组肉眼观，肝脏增大明显，边缘钝，质软脆，色发黄，部分肝脏表面呈花斑状改变，触之有油腻感。光镜下，可见弥漫性肝细胞脂肪空泡变性，肝细胞肿胀明显，细胞核被挤到侧。电镜检查对照组肝细胞胞核呈圆形，胞浆内无明显脂滴形成，胞浆内线粒体丰富。组肝细胞内线粒体数量减少，胞浆内偶见脂滴形成。组合并组肝细胞内出现大量脂滴聚集，有互相融合现象，线粒体体积增大，出现多形性线粒体。炎性因子检测与对照组比较各模型组血清含量均降低，及含量均显万方数据三峡大学硕士学位论文著升高。模型组之间相比较，合并组的表达均高于组及组。免疫组化检测ε和κ在对照组中几。

9、甲醇。牛奶封闭液脱脂奶粉溶于中。实验方法提取组织蛋白万方数据三峡大学硕士学位论文称取肝脏组织，置于已加入预冷液的管中，将肝脏组织剪碎转分离心，弃上清，再加入液吹打混匀转分离心，弃上清，加入裂解液，用匀浆器磨匀冰置分钟，转分离心，取上清。法测定蛋白浓度标准曲线孔在酶标包被板上设标准品孔孔，第孔加入液，后面六个孔加入液。在第孔中加入标准蛋白，混匀后从第孔中吸出加入下孔中，混匀后再吸出加入下孔中，依次类推，直至在第六孔中吸出后丢弃，第七孔不加入标准蛋白。最后各孔均加入工作液样品孔先在样品孔中加入液，再加入样本蛋白，最后再加入工作液温箱孵育分钟以空白孔调零，测定值，制作标准曲线后计算样品蛋白浓度。按样品蛋白上样缓冲液的比例混匀待测样品，煮沸分钟。电泳将。

10、肪空泡作为非酒精性脂肪肝成模标准。每周测量大鼠体重，实验结束时，测定空腹血糖主动脉取血，称量肝脏湿重，计算肝指数，肝脏取材行光镜电镜观察肝脏病理组织学改变。采用全自动生化分析仪检测谷丙转氨酶，谷草转氨酶，高敏反应蛋白，甘油三酯，以及总胆固醇，。采用双抗体放射免疫分析法测定血清空腹胰岛素，。酶联免疫，法测定血清脂联素，游离脂肪酸，水平的变化。采用免疫组化检测ε和κ在肝脏中的表达情况，逆转录聚合酶链反应法和法检测肝脏组织ε的表达。最后利用软件包对各组数据进行统计学分析被认为差异有统计学意义。结果肉眼观及光镜检查对照组肉眼观，正常对照组大鼠肝脏形态大小正常，边缘锐利。光镜下，肝细胞胞核大而圆，居中央，胞浆丰富，肝细胞以中央静脉为中心呈放射状排列。组肉。

11、乎不表达，在模型组中呈高表达，其表达阳性程度以组组合并组逐渐升高。ε主要定位于胞浆中，胞浆呈黄褐色。κ主要定位于胞浆和或胞核中，阳性表达呈黄褐色。各组之间表达差异有统计学意义。和检测各组肝脏组织ε的表达模型组表达量均高于正常对照组，模型组中，合并组ε的表达量最高，其次为组，组表达量最低。各组表达量有统计学差异。ε与κ的相关性分析经等级相关分析，ε与κ之间存在高度相关性，。结论在型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病的发生及发展过程中，血清的水平可以反映其进展。ε可能参与了型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病的发生发展过程。ε可能通过κ通路发挥作用，通过干预ε的作用发挥，可能延缓病变进展。关键词型糖尿病合并非酒精性脂肪肝病εκ炎症Ⅱ万方数据三峡大学硕士学位论文ε，。

12、均以三峡大学为第作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的切法津和经济后果。学位论文作者签名日期万方数据三峡大学硕士学位论文内容摘要目的研究型糖尿病，合并非酒精性脂肪肝病，个体的炎性因子及肝脏中ε的表达及意义，从而在分子水平上证实ε在合并中的表达，并进步推断其参与免疫炎症反应的机制，为今后研发肥胖糖尿病等方面的新药打下基础。方法只雄性大鼠随机分为对照组和模型组，模型组再分为组组合并组。用高糖高脂饮食诱导后腹腔注射链脲佐菌素，的方法复制型糖尿病模型。采用改良高糖高脂饮食喂养复制非酒精性脂肪肝模型。以注射链脲佐菌素小时后随机血糖大于并维持周作为型糖尿病成模标准。肝脏组织活检光镜下见大鼠肝细胞内弥漫大量的脂。

参考资料：

[1]绘本故事：秋秋找妈妈（优） 编号18060（第14页，发表于2022-06-24）

[2]绘本故事：秋秋找妈妈（优） 编号18060（第14页，发表于2022-06-24）

[3]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[4]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[5]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18042（第22页，发表于2022-06-24）

[6]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[7]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[8]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18054（第22页，发表于2022-06-24）

[9]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[10]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[11]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[12]绘本故事：是谁嗯嗯在我的头上（优） 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[13]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18060（第35页，发表于2022-06-24）

[14]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18060（第35页，发表于2022-06-24）

[15]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18078（第35页，发表于2022-06-24）

[16]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18060（第35页，发表于2022-06-24）

[17]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18060（第35页，发表于2022-06-24）

[18]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18060（第35页，发表于2022-06-24）

[19]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18060（第35页，发表于2022-06-24）

[20]绘本故事：我的名字克丽桑丝美美菊花（优） 编号18060（第35页，发表于2022-06-24）