1、对的内参照蛋白条带的积分光密度值比值，即蛋白相对量表示。肿瘤组织微血管密度的检测小鼠肿瘤组织的检测采用组织化学发进行组织切片，方法染色。抗为大鼠抗小鼠单克隆抗体，将抗体稀释为∶，二抗为兔抗大鼠多克隆抗体，抗体稀释为∶。小鼠肿瘤组织计数原则与邻近的微血管，或肿瘤细胞及其他结缔组织成分不相连的染成棕黄色的内皮细胞作为个可计数的微血管。肿瘤硬化区，肿瘤细胞稀少及邻近良性组织区域的微血管不进行计数。可能源于同血管，但是位置不同的血管内皮细胞可视为独立的微血管。血管腔及红细胞不能作为确定微血管的依据。肌层较厚的血管不计数。官腔面积大于个红细胞直径的血管不计数。小鼠肿瘤组织内的计算在倍的光镜下扫视整个组织切片观察并找到内皮细胞及肿瘤细胞染色清晰，背景对照良好，肿瘤细胞分布较多，微血管数量较为密集的。

2、增宫颈癌病例占全球发病数量的，约为万，是仅次于智利的宫颈癌高发国家，并且其严重影响了女性的健康且使早期宫颈癌患者手术后生活质量的严重下降。目前子宫颈癌治疗通常仅限于手术，放疗和或化疗。但宫颈癌放疗后仍易短期内复发或转移，且对化疗又不敏感，故预后不良。化疗和放疗在治疗的同时亦带来严重的副作用。寻找新的药物靶向治疗宫颈癌是必要的。然而，近年来，研究其他类型的癌症已显示出使用抗血管生成的化合物来治疗宫颈癌是大有希望的。宫颈癌的发生发展机制十分复杂，受到多种癌基液冲洗次每次每张切片滴加生物素标记的羊抗小鼠多聚体，室温下放置液冲洗次每次每张切片上滴加试剂合物辅助剂，室温下放置液冲洗次每次每张切片上滴加新鲜配制的显色剂，观察显色结果，显色明显时用自来水冲洗终止反应，每张切片在显微镜下观察再用苏木素。

3、床上清洗，重复次取出缓冲液中的膜，将其转移至预先稀释至适当浓度的二抗液中，室温条件下孵育将二抗液中的膜转移至缓冲液中，置于脱色摇床上清洗，重复次。显影万方数据三峡大学硕士学位论文将反应液等体积混匀后滴到膜的蛋白面，接触充分反应后，吸尽残液将其放进光片夹在暗室内，红灯下将适当大小的光片覆盖在膜上，合上光片夹，适当的曝光时间后打开夹子，将光片放入盛有显影液的器皿中，显影后光片上出现明显的条带，然后将光片迅速转移至定影液中，定影后光片则变得透明，随即用清水冲洗光片，待残留的定影液冲洗干净后，于室温下晾干。分析将晾干的光片用扫描仪进行扫描后，用图像分析软件对光片上的目的条件的光密度值进行统计分析，测定目的蛋白及与之配对的内参照蛋白条带的积分光密度值，并采用目的条带积分光密度值蛋白相对量同与之配。

4、白表达的影响第五部分检测肿瘤组织中微血管密度讨论小结参考文献综述后记Ⅳ万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称色素上皮衍生因子信使核糖核酸人乳头瘤病毒视网膜母细胞瘤蛋白血管内皮细胞生长因子脱氧核糖核酸凋亡抑制蛋白细胞周期依赖性蛋白激酶宫颈上皮内瘤样病变高危型人类乳头瘤状病毒磷酸盐缓冲液乙二胺四乙酸三羟甲基氨基甲烷十二烷基磺酸钠四甲基乙二胺焦碳酸二乙酯吸光度苯甲基磺醯化氟万方数据三峡大学硕士学位论文聚偏二氟乙烯社会科学统计软件包万方数据三峡大学硕士学位论文引言宫颈癌在女性生殖道恶性肿瘤中的发病率位居第位。全球每年宫颈癌新发病例中，绝大多数在发展中国家，据国际癌症研究所的统计。绝大多数发展中国家的每年宫颈癌新发病例居高不下。全球每年约有万宫颈癌新增病例，而我国每年新。

5、迁移到分离胶底部处即终止电泳。转膜用甲醇浸泡膜数分钟后转移至转移缓冲液中，并放入海绵垫张滤纸夹子打开夹子，将黑色面朝上，垫个海绵垫和张滤纸，并擀尽气泡将电泳玻璃板撬开，小心剥掉中间的胶并刮去浓缩胶，将余下的分离胶盖在滤纸上，然后在胶上盖张滤纸，最后垫上海绵垫，在此过程中需擀尽所有的气泡合上夹子放入转移槽内，夹子的黑色面朝向槽的黑色面，夹子的白色面则朝向槽的红色面往转移槽内倒入转移缓冲液，盖上盖子并将整个转移槽埋在冰中，接通电源，调节电压为，后转膜完毕。封闭将转膜后的膜用缓冲液浸湿后转移至装有脱脂奶粉的平皿中，室温条件下置于摇床内封闭取出封闭液中的膜，并用滤纸沾去膜上残留的封闭液，将其转移至预先稀释至适当浓度的抗液中，置于条件下过夜或者室温条件下孵育将抗液中的膜转移至缓冲液中，置于脱色摇。

6、视野在倍的视野范围内按照上述原则任选个不重复的视野每个高倍镜视野下的阳性血管数的平均值作为微血管的密度每组计数张以上组织切片。实验数据的统计学分析本实验实施过程中获得的实验数据均应用统计分析软件进行处理，其中万方数据三峡大学硕士学位论文计数资料均采用卡方检验即χ检验的方法进行统计分析计量资料则均采用单因素方差分析的方法进行数据统计分析，并用法进行组间的两两比较，数据用均数标准差即的方式加以表示。检验水准，若，差异不具有统计学意义，则差异具有统计学意义，时则差异显著。万方数据三峡大学硕士学位论文结果第部分模型小鼠成瘤及给药情况图所示为模型小鼠皮下接种后移植瘤的生长情况。只小鼠皮下接种鼠宫颈癌细胞后第三天于接种处皮下可见肿瘤形成，成瘤率为。用药干预期间，各组小鼠在实验过程中均无死亡。图模型。

7、复染切片，充分水洗返蓝，再放入不同浓度的酒精中脱水干燥，二甲苯透明，最后以中性树胶进行封片用表达阳性的已知抗体组织切片作为阳性对照，作为阴性对照代替抗光镜下观察并分析结果。免疫印迹法检测蛋白表达水平组织总蛋白的提取称取宫颈癌模型小鼠的肿瘤组织块，用消毒后的剪刀充分剪碎并将其置于匀浆器的球部往匀浆器中加入的组织裂解液，后将匀浆器插入冰盒中进行充分匀浆，尽量使组织块碾碎匀浆后将匀浆器置于冰盒中裂解，在此过程中每轻轻振荡匀浆器使组织充分裂解，用移液器将匀浆器中的裂解液转移至干净的离心管中，随即在条件下离心，离心后所得的上清液即为提取的总蛋白样品万方数据三峡大学硕士学位论文取得的上清液按管进行分装，置于短期保存，长期保存。组织总蛋白浓度的测定蛋白浓度测定试剂盒用将蛋白标准品溶液进行倍稀释，其终。

8、论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。

9、浓度则为将未稀释的蛋白标准品溶液加至孔板的个标准品孔中，体积分别为并加入标准品稀释液将体积均补至将等体积的蛋白样品溶液加至孔板的个样品孔中，并加入标准品稀释液将体积均补至各孔均加入染液，于室温下静置将孔板用酶标仪检测根据测定的标准品绘制标准曲线并计算各样品的蛋白浓度。聚丙烯酰氨凝胶垂直电泳准备两块洗净晾干的玻璃板，对齐放入胶板夹中卡紧根据蛋白分子量大小选择分离胶蛋白分子量分离胶按分离胶配方进行配胶，亚甲叉双丙稀酰胺按浓缩胶配方进行配胶，亚甲万方数据三峡大学硕士学位论文叉双丙稀酰胺分别依次灌入分离胶浓缩胶，将梳子插入浓缩胶，待胶充分凝固后拔出按比例混合加样缓冲液与各蛋白样品并将其煮沸，待充分冷却后沿孔壁加入等体积的液体接通电源，调节电压进行垂直电泳，当样品进入分离胶中，调节电压为，待溴酚。

10、达的影响万方数据三峡大学硕士学位论文图所示为检测不同给药组对荷瘤鼠肿瘤组织中蛋白表达的影响。空白组与组比较，宫颈癌小鼠肿瘤组织中蛋白的相对表达量无明显差异，而注射了基因组的蛋白的相对表达量也随之下降，且显著低于空白组与组。图不同给药组对荷瘤鼠肿瘤组织中蛋白表达的影响第五部分检测肿瘤组织中微血管密度对肿瘤血管增生的作用是通过对小鼠肿瘤组织内免疫组织化学呈棕黄色的微血管的密度进行评价。图，图，图和表的结果显示处理组肿瘤组织中微血管密度明显低于组和空白对照组。由此可见，可抑制肿瘤组织中新生血管的生长。图组万方数据分类号密级公开硕士学位论文色素上皮衍生因子对宫颈癌模型小鼠的作用及机制研究学位申请人刘程程学科专业妇产科学指导教师叶红教授二四年五月万方数据，万方数据三峡大学硕士学位论文三峡大学学位。

11、。我愿承担因违背上述承诺而引起的切法津和经济后果。学位论文作者签名日期万方数据三峡大学硕士学位论文内容摘要目的通过研究色素上皮衍生因子，对小鼠宫颈癌模型的肿瘤生长的影响，并探讨其可能的分子机制。方法观察色素上皮衍生因子是否能有效的抑制肿瘤的生长，为临床治疗宫颈癌寻找高效抗宫颈癌靶向治疗药物，并且减轻患者使用化疗药物不良反应以及提高患者的生活质量提供有力的实验参考。建立小鼠宫颈癌模型并分别给以不同的处理，判断不同的处理组肿瘤生长的抑制率，并通过处理后各组肿瘤体积的改变计算出肿瘤的抑瘤率以此来识别的不同处理组的疗效。治疗结束后，脱臼处死各组小鼠并取出肿瘤组织，采用免疫印迹法检测不同给药组对宫颈癌组织中蛋白表达水平的影响。结果不同的处理组治疗后，对照组组，组的肿瘤生长抑瘤率分别为，组与对照组。

12、鼠皮下移植瘤的生长情况第二部分染色结果图所示为皮下移植瘤染色的结果。对皮下移植瘤进行切片染色，镜下见癌细胞浸润性生长呈弥散性分布，其中部分呈条索状排列，癌细胞异型性显著，可见病理性核分裂像，说明皮下种植瘤造模成功。图皮下移植瘤染色第三部分不同给药组对荷瘤鼠肿瘤生长抑瘤率的影响表与图所示为不同给药组对荷瘤鼠肿瘤生长抑瘤率的影响。末次给药后万方数据三峡大学硕士学位论文内测得不同给药组荷瘤鼠瘤体平均体积，计算各组生长抑瘤率并进行比较。对照组组，组的肿瘤生长抑瘤率分别为与对照组比较，组的肿瘤生长抑瘤率与对照组无差异，治疗组的肿瘤生长抑瘤率均显著高于对照组。表是各肿瘤组的肿瘤重量表不同给药组肿瘤生长抑瘤率组别组空病毒组组例数抑瘤率表三各组肿瘤体积大小第四部分检测不同给药组对荷瘤鼠肿瘤组织中蛋白表。

参考资料：

[1]坚持总体国家安全观做好新时代国家安全工作通用PPT课件 编号18060（第31页，发表于2022-06-24）

[2]坚持总体国家安全观做好新时代国家安全工作通用PPT课件 编号18060（第31页，发表于2022-06-24）

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[4]坚持总体国家安全观做好新时代国家安全工作通用PPT课件 编号18060（第31页，发表于2022-06-24）

[5]卡通风幼儿园户外活动的组织与实施通用PPT 编号18060（第31页，发表于2022-06-24）

[6]卡通风幼儿园户外活动的组织与实施通用PPT 编号18060（第31页，发表于2022-06-24）

[7]卡通风幼儿园户外活动的组织与实施通用PPT 编号18060（第31页，发表于2022-06-24）

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[9]卡通风幼儿园户外活动的组织与实施通用PPT 编号18060（第31页，发表于2022-06-24）

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