1、皂苷Ⅴ组，然后把六孔板取出，弃上清，用预冷的洗两遍，然后加入，用细胞刮棒将细胞刮取离心，弃上清收集细胞。然后按照动物组织中方法提取细胞总蛋白和胞核蛋白，检测细胞κ和蛋白表达情况。检测细胞上游分子和表达细胞悬液接种孔板，细胞数为个，每孔，贴壁后加入不同浓度的竹节参皂苷Ⅴ浓度为，和作用细胞，设为调零孔正常组组竹节参皂苷Ⅴ组，然后取出孔板，弃上清，用预冷的洗两遍，每孔加入，冰上裂解，然后转移至管中。然后按照动物组织中方法将转为，并扩增，然后用琼脂糖凝胶电泳扩增产物检测各因子表达情况。数据分析炎性因子释放数据采用软件分析，与数据采用软件分析，所有数据都以均。

2、转录因子κκ小鼠核因子κ亚基亲和肽丝裂素原活化蛋白激酶细胞外信号调节激酶磷酸化氨基端激酶磷酸化分子量为的丝裂素原活化蛋白激酶磷酸化氧化氮诱导型氧化氮合酶白细胞介素肿瘤坏死因子改良培养基二甲基亚砜万方数据三峡大学硕士学位论文浸泡几秒。将转膜夹板置于托盘中，白色板在下，依次放置白色夹板海绵层滤纸膜胶层滤纸海绵黑色夹板。将夹板固定好后放入转膜槽中黑对黑白对红，接通电源，恒流转膜。注转膜过程在冰里操作。封闭将膜取出，在端剪个小角，与胶接触面标记为上，然后置于牛奶封闭液中，室温振荡摇匀。抗孵育按比例配制抗振荡摇匀过夜。洗膜洗膜三遍，每遍。二抗孵育按比例配制二。

3、胞，设为调零孔正常组组竹节参皂苷Ⅴ组，每组个复孔，然后取出孔板，用试剂盒检测上清和分泌情况。检测细胞，和表达细胞悬液接种孔板，细胞数为个，每孔，贴壁后加入不同浓度的竹节参皂苷Ⅴ浓度为，和万方数据三峡大学硕士学位论文作用细胞，设为调零孔正常组组竹节参皂苷Ⅴ组，然后取出孔板，弃上清，用预冷的洗两遍，每孔加入，冰上裂解，然后转移至管中。然后按照动物组织中方法将转为，并扩增，然后用琼脂糖凝胶电泳扩增产物检测各因子表达情况。细胞κ和蛋白表达量的检测细胞悬液接种孔板，细胞数为个，每孔，贴壁后加入不同浓度的竹节参皂苷Ⅴ浓度为，和作用细胞，设为调零孔正常组组竹节参。

4、κ,万方数据三峡大学硕士学位论文Ⅴ,磷酸化氨基端激酶磷酸化分子量为的丝裂素原活化蛋白激酶磷酸化氧化氮诱导型氧化氮合酶白细胞介素肿瘤坏死因子改良培养基ⅤⅤⅤ,ⅤⅤⅤⅤκⅤⅤⅤⅤⅤ,Ⅴ万方数据三峡大学硕士学位论文Ⅴκ,κ,ⅤκⅤ万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表引言材料与方法细胞株试剂及仪器实验方法数据分析实验结果竹节参皂苷Ⅴ对诱导小鼠肝脏炎症保护作用机制研究竹节参皂苷Ⅴ对诱导巨噬细胞系的保护作用机制研究讨论小结参考文献综述后记附录攻读硕士学位期间发表的学术论文万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英文全称中文全称脂多糖样受体样受体κ核。

5、震荡，使结晶充分溶解，在酶联免疫检测仪处测量各孔的值。致巨噬细胞系炎症损伤模型的建立细胞悬液接种孔板，细胞密度为个，每孔，贴壁后加入刺激，设置调零孔空白对照组组，刺激浓度为，每组个复孔。后用试剂盒检测细胞上清液中的含量，并在测量各孔的吸光度值。竹节参皂苷Ⅴ对致细胞炎症的影响细胞悬液接种孔板，细胞数为个，每孔，贴壁后加入不同浓度的竹节参皂苷Ⅴ浓度为，和作用细胞，设为调零孔正常组组竹节参皂苷Ⅴ组，每组个复孔，后用试剂盒检测上清释放量。细胞炎性因子表达的检测检测上清中和分泌细胞悬液接种孔板，细胞数为个，每孔，贴壁后加入不同浓度的竹节参皂苷Ⅴ浓度为，和作用。

6、数标准差来表示，组间采用单因素方差分析则说明差异具有统计学意义。实验结果竹节参皂苷Ⅴ对诱导小鼠肝脏炎症保护作用机制研究竹节参皂苷Ⅴ对小鼠肝脏指数及肝功能影响组小鼠肝脏重量，血清中和含量显著高于正常组，竹节参皂苷Ⅴ高剂量可降低小鼠的肝脏指数，竹节参皂苷Ⅴ各用药组均可显著抑制血清中和释放或。结果见表万方数据三峡大学硕士学位论文表小鼠肝脏指数和肝功能指标，组别肝脏质量肝脏指数倍正常组组Ⅴ组Ⅴ组Ⅴ组Ⅴ组注与正常组相比较，与组比较竹节参皂苷Ⅴ对小鼠肝脏形态学影响由图所示，正常组小鼠肝细胞完整，肝索排列整齐组炎性病变严重，主要表现为肝索排列紊乱，肝窦受到严重挤。

7、抗，室温振荡摇匀。洗膜洗膜三遍，每遍。显色取液与液各即为显色液，混匀备用。然后在化学发光成像系统中成像，最后用软件分析。竹节参皂苷Ⅴ对诱导巨噬细胞系的保护作用机制研究细胞培养细胞株的复苏用酒精擦拭超净工作台，紫外线照射超净工作台，从液氮罐中取出冻存管并迅速将其放到已经预热的水浴锅中解冻至完全溶解，取出用酒精棉球擦拭冻存管外壁，再拿入超净台内，将冻存管内的液体转入离心管，加入倍体积含胎牛血清的培养基，离心，弃去上清液，重悬细胞，接种到培养瓶中条件下培养。传代待细胞长至后，从培养箱内取出细胞，小心吸出旧培养液，用清洗，加入胎牛血清的培养基，用细胞刮棒沿。

8、学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部分研究成。

9、方向轻轻将细胞刮下来，将细胞悬液转移到离心管中，万方数据三峡大学硕士学位论文离心，弃去上清液，加入培养液，用滴管轻轻吹打细胞制成细胞悬液，分装入培养瓶后，放入培养箱条件下培养。冻存当细胞长至时，将细胞收集起来，将胎牛血清与二甲基亚砜按照∶的比列配制好冻存液。然后每管中加入冻存液转移至冻存管中，依次放在中中中过夜，第日转移至液氮灌中保存。竹节参皂苷Ⅴ的毒性试验细胞悬液接种孔板，细胞数为个，每孔，设置调零孔正常组细胞培养基竹节参皂苷Ⅴ组，给药浓度为，每组个复孔，后吸取上清液，在每孔中加入终浓度为的培养基，继续培养，然后将上清去掉，每孔加入，置摇床上低速。

10、参皂苷Ⅴ各用药组可显著降低模型小鼠血清中和表达。结果见图图竹节参皂苷Ⅴ对小鼠血清中和分泌的影响注与正常组相比较，与组比较纯度检查及降解情况琼脂糖凝胶电泳后可见三条带，若条带清晰可见，的条带比较模糊则表明抽提出来的完整，并没有降解，结果见图图组织完整性竹节参皂苷Ⅴ对小鼠肝脏组织内和表达的影响组小鼠肝脏内和表达显著升高，竹节参皂苷Ⅴ各用药组可显著降低模型小鼠肝脏组织内和或。结果见图万方数据分类号密级公开硕士学位论文竹节参皂苷Ⅴ对诱导小鼠肝脏及巨噬细胞系炎症的保护作用机制研究学位申请人代艳文学科专业药理学指导教师袁丁教授二四年五月万方数据Ⅴ,万方数据三峡。

11、果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的切法津和经济后果。学位论文作者签名日期万方数据三峡大学硕士学位论文内容摘要目的利用建立小鼠肝脏炎症和巨噬细胞系炎症模型，研究竹节参皂苷Ⅴ的保护作用并探索其抗炎作用机制。方法摸索刺激小鼠炎症模型用药剂量及时间，采用竹节参皂苷Ⅴ保护小鼠后，检测小鼠肝脏指数及小鼠肝脏功能指标。小鼠肝脏染色观察小鼠肝脏形态学变化。采用比色法，观察竹节参皂苷Ⅴ对细胞的有效浓度范围。

12、，肝细胞水肿严重，体积变大，肝细胞胞浆颜色变浅，细胞核固缩，有的肝细胞甚至发生气球样变和坏死Ⅴ低剂量组肝索排列紊乱，肝细胞水肿减轻，气球样变及坏死病变减轻Ⅴ中剂量组肝索排列较组整齐，肝细胞出现轻微水肿Ⅴ高剂量组肝索排列整齐，几乎无水肿现象Ⅴ高剂量组肝索排列整齐，干细胞完整，提示Ⅴ在此范围内用药对肝细胞形态学影响较小或无损伤。图竹节参皂苷Ⅴ对小鼠肝脏组织形态学的影响，标示水肿气球样变坏死细胞正常对照组组Ⅴ组Ⅴ组万方数据三峡大学硕士学位论文Ⅴ组Ⅴ组竹节参皂苷Ⅴ对小鼠肝脏炎性因子表达影响竹节参皂苷Ⅴ对小鼠血清中和分泌的影响组小鼠血清中和表达显著升高，竹节。

参考资料：

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