1、原因分析见下表。只造模成功的大鼠中评分分者只，分者只，分者只。造模清醒后的只假手术组大鼠未见明显神经功能缺损表现，术后进食及活动恢复良好。组及组大鼠于术后左右清醒，醒后表现为精神不振，活动减少，反应迟钝，食欲减退或拒食等基础情况较差的症状，并出现评分为分的神经功能缺损症状及体征，包括左侧前爪不能完全伸展垂直提尾时左前肢屈曲内收，爬行时出现向左侧转圈站立不稳，行走时向偏瘫侧倾倒等。图所示为术后神经症状评分分时的大鼠反应即当将缺血大鼠提尾于平面上方时，大鼠会全身扭曲头朝向损伤对侧，屈曲损伤对侧前肢。表大鼠造模失败原因分析表被剔除原因大鼠数量只蛛网膜下腔出血侧脑室穿刺未成功插线未成功造模后评分分造模后评分分渔线全部拔出失血过多麻醉过深。
2、相应缺血再灌注组比较，图脑缺血再灌注损伤后大鼠脑梗死体积变化正常组组组组图注红色箭头所示为正常脑组织，黑色箭头所示为白色缺血梗死灶万方数据分类号密级编号硕士学位论文雷帕霉素对大鼠脑缺血再灌注损伤后表达的研究研究生姓名谢婷指导教师姓名职称张智博教授学科专业名称神经病学研究方向脑血管病年月万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的。
3、免假阳性。甩去多余液体，不洗。分别滴加抗抗体稀释液兔抗鼠多克隆抗体，万方数据孵育过夜，洗次。此外，用取代抗作空白对照。滴加生物素化山羊抗兔抗体，常温，洗次。滴加链霉亲和素生物素过氧化物酶复合物，孵育，洗次。显色使用显色试剂盒。取出蒸馏水，加试剂盒中试剂各滴，混匀后加至切片。室温显色，显微镜下控制显色程度，当出现背景色较强，为避免出现非特异性染色干扰结果，立即加入液终止反应。因此显色时需要根据结果不断调整的显色时间以及切片的封闭时间，般分钟之间。苏木素轻度复染或不复染，脱水，透明，封片。显微镜观察，照相及图像处理分析在生物光学显微镜下观察脑缺血周围区的的阳性神经元，并用数码相机拍照，采用高清晰彩色病理图像分析系统对切片进行图像分析。
4、，呼吸抑制不明原因的死亡比较模型组组组各时间点动物模型神经功能缺损评分发现组神经功能缺损评分较组均有明显改善，说明具有较好的神经保护作用，能减轻缺血再灌注后存活大鼠瘫痪等神经功能缺损症状及体征。见表，图。万方数据图模型神经功能评分分表造模成功大鼠各时间点首次神经功能评分比较，分组组组值注与相应缺血再灌注组比较图各组不同时间点神经功能评分比较万方数据可明显减轻脑梗死体积染色可显示大鼠缺血再灌注后脑梗死面积，本实验染色结果显示脑缺血再灌注损伤小时后见白色缺血梗死灶主要累及脑组织皮层和基底节正常组及组无梗死灶组梗死灶明显，干预组与模型组相比较，脑组织梗死体积明显减少表，图表脑缺血再灌注损伤后大鼠脑梗死体积的变化，组别相对梗死体积组组注。
5、，使脑组织有了定硬度，便于操作。将固定好的脑片按切片顺序排列，自然光下数码拍照，应用软件计算出同侧未梗死脑体积和对侧脑体积，为排除脑水肿对梗死体积测算影响，计算公式为对侧半球体积同侧半球未梗死体积对侧半球体积。左心灌注制作成功的模型在行免疫组化原位凋亡检测前需先将标本灌注固定。具体方法如下水合氯醛深度麻醉造模成功大鼠，仰卧位固定，沿胸骨旁线剪开万方数据腹部皮肤肌肉和腹膜，进入腹腔，剪开膈肌，沿胸骨两侧剪开肋骨，充分暴露心脏肝脏及主动脉起始端钝头灌注针自心尖向右上快速进针经左心室至主动脉升部，钳夹固定针头和心肌，剪开右心耳，生理盐水以最快的速度冲洗至肺脏肝脏变白待右心耳流出的液体清亮后换多聚甲醛快速灌注，再匀速缓慢灌注约，滴速约为。
6、分别于缺血再灌注后及小时处死动物。染色法观察脑组织的病理学变化，末端标记法法原位检测神经细胞凋亡，免疫组织化学法分别检测缺血侧顶叶大脑皮层的蛋白表达变化。结果本实验造模成功率为，与组相比，组各时间点动物模型神经功能缺损评分均有明显改善。四正常组及组可以检测到蛋白的少量表达，组万方数据蛋白表达小时开始上升，达到高峰，仍保存高水平，与模型组比较，雷帕霉素干预组蛋白表达在各时间点均明显减弱，小时明显上升，小时达峰，小时有较高表达，差异有显著性。结论可能通过下调蛋白上调蛋白，减轻大鼠缺血再灌注损伤后大脑中动脉梗塞的面积及神经细胞凋亡，发挥其脑保护作用。关键词雷帕霉素脑缺血再灌注损伤细胞凋亡神经保护药溶酶体组织蛋白酶丝氨酸苏氨酸激酶万方数。
7、箱保存备用。用刀子修整包埋好的石蜡块边缘，蜡块四周留的蜡边，用石蜡切片机自大脑向后作冠状切片，每片厚约，收集含缺血区的脑片。细胞凋亡检测具体步骤如下将制备好的石蜡切片常规脱蜡脱水处理。玻片用液室温下孵育分钟，阻断内源性过氧化物万方数据酶活性洗分钟次。用溶于中，孵育分钟洗分钟次。标记玻片室温晾干后，每个样品滴加新配置的反应混合液配置时注意避光，于暗湿盒中孵育洗分钟次信号转化和分析样品玻片晾干后，加入，盖上盖玻片，在暗湿盒中孵育分钟，洗分钟次。加入适量显色液蓝色，室温孵育分钟洗分钟次。使用苏木素衬染，用双蒸水水洗蓝化，脱水，透明，用常规中性树脂封片封片，光学显微镜下观察。结果观察阳性细胞形态学上表现为胞体缩小，核固缩，染色质凝聚，呈。
8、信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名导师签名年月日年月日万方数据目录中文摘要二英文摘要三正文前言材料与方法结果讨论结论参考文献四附录五综述六成果七致谢万方数据雷帕霉素对大鼠脑缺血再灌注损伤后表达变化的研究中文摘要目的研究大鼠脑缺血再灌注损伤后溶酶体组织蛋白酶及表达的变化情况，并初步探讨雷帕霉素干预处理后的脑保护作用相关机制。方法选择清洁级周龄体重为的健康雄性大鼠只，随机分为正常组假手术对照组组，脑缺血再灌注模型组组，和雷帕霉素干预组组，。采用改良线栓法制备右侧大脑中动脉梗塞，模型，缺血小时后恢复脑组织灌注，干预组在侧脑室注射后行手术，组及组于相应时间点侧脑室注射等量的溶液，级标准评分法进行大鼠神经功能缺损评分。
9、每分钟滴，至大鼠四肢强直僵硬后停止灌注般约需小时，拔出穿刺针仔细剪开颅骨，充分暴露并剥离脑组织，置于含多聚甲醛固定小时。灌注成功标志开始灌注时，四肢剧烈抽动，四肢颈部及躯干僵硬，灌注后脑组织白而硬。组织切片的制备脱水取经灌注固定好的中脑至大脑之间距额极脑组织，放入铜条盒，依次浸泡在乙醇乙醇过夜乙醇乙醇Ⅰ乙醇Ⅱ乙醇乙醇能防止脱水跨度太大所致的组织细胞变形收缩，脱水过程中应遵循逐步进行的原则，在无水乙醇处理时最重要的是保证试剂的纯度透明二甲苯分钟二甲苯Ⅰ分钟二甲苯Ⅱ分钟，达到透明为止包埋依次将组织块浸蜡于熔点分钟熔点分钟免疫组化熔点分钟，最后于熔点石蜡进行包埋，将液态石蜡缓慢倒入纸盒中，冷却为固态即包埋完毕最后将制备的脑组织蜡块置于。
10、测定免疫组化染色的细胞计数。主要在脑缺血半暗带区做比较，细胞膜及浆内及出现棕黄色颗粒为染色阳性。胞浆表达，染色越深，阳性反应产物表达越高，反之越弱。每张切片测定个视野，取平均值作为测定值。照片放大倍数表示相机目镜放大倍数物镜放大倍数。统计学分析所有数据用软件统计学处理，所有数据均用均数标准差表示，随机成组设计多个样本均数比较用方差分析组间比较采用检验。值小于认为有统计学意义。万方数据第三章实验结果动物模型的成功率和神经功能评分的评估实验总共使用大鼠只，正常组只，只死于麻醉过深，假手术组只，因侧脑室穿刺和麻醉过深所致呼吸抑制各死亡只，用于脑缺血再灌注模型动物只，造模成功动物只，成功率为。剩余只大鼠在造模过程中由于各种原因被剔除，具。
11、褐色。在高倍镜下随机观察每个标本梗死灶周边区域顶叶缺血区周围个不相重叠的视野区，计算不同时间点高倍镜下视野的平均凋亡阳性细胞数。假手术组及药物组观察部位与脑缺血组相同。免疫组织化学染色法分别用多克隆抗体进行免疫组织化学染色，采用捞片法，每只实验动物每个脑区取四张切片张备用。烤片载玻片用多聚赖氨酸防脱片处理，捞片后置烤箱烘烤过夜，次日将烤箱温度调至烘烤分钟，以使切片紧密粘附。冷却后常规二甲苯脱蜡，梯度酒精脱水二甲苯次无水乙醇次乙醇次酒精酒精进行脱水。脱蜡脱水定要完全，否则很容易影响片子的质量。阻断灭活内源性过氧化物酶，孵育，冲洗。热修复抗原将切片浸入枸橼酸盐缓冲液，。水浴箱内加热后取出自然冷却，冲洗。滴加正常山羊血清封闭液，室温避。
12、律结果由本人承担。作者签名年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕博硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印缩印或其它手段保留学位论文学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供。
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绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060