1、，而转基因技术则未去除或替换固有基因。目前，基因打靶已成为研究基因功能最直接和最有效的方法之。目录二用功能失活策略鉴定基因功能基因功能失活策略的本质是将细胞或个体的基因功能部分或全部失活后，通过观察细胞生物学行为或个体遗传性状表型的变化来鉴定基因的功能。方法基因敲除基因沉默目录基因敲除属于基因打靶技术的种，其利用同源重组的原理，在细胞中定点破坏内源基因，然后利用细胞发育的全能性，获得带有预定基因缺陷的杂合子，通过遗传育种最终获得目的基因缺陷的纯合个体。用基因敲除技术使基因功能完全缺失条件性基因敲除可以更加明确地在时间和空间上操作基因靶位，敲除效果更加精确可靠，理论上可达到对任何基因在不同发育阶段和不同器官组织的选择性敲除。目录目录二用基因沉默技术可使基因功能部分缺失用干扰技术。
2、章基因结构与功能分析技术目录人类的多种疾病都与基因的结构或功能异常有关，因此，要阐明疾病发生的分子机制和进行有效的诊断与防治，均需首先揭示基因的结构与功能。序列测定基因转录起点及其启动子的分析基因编码序列的分析基因拷贝数及其表达产物的分析基因功能获得和或缺失策略随机突变筛选策略目录第节基因结构分析技术目录基因级结构解析技术基因的级结构是指脱氧核苷酸的排列顺序，解析级结构最精确的技术就是测序。目录双脱氧法和化学降解法是两种常规的测序方法双脱氧测序法目录化学降解测序法目录二全自动激光荧光测序技术的原理基于双脱氧法四色荧光法采用四种不同的荧光染料标记同引物或种不同的终止底物，最终结果均相当于赋予片段种不同的颜色。因此，个样品的个反应产物可在同个泳道内电泳。单色荧光法采用单荧光染料。
3、作用。目录蛋白质芯片可用于检测组织∕细胞来源的样品中蛋白质的表达谱其精确程度信息范畴取决于芯片上已知多肽的信息多寡。用双向电泳分析蛋白质多肽表达谱双向电泳可同时分离成百上千的蛋白质，对差异表达的蛋白质进行鉴定。目录第三节基因的生物学功能鉴定技术目录用功能获得策略鉴定基因功能基因功能获得策略的本质是将目的基因直接导入细胞或个体中，使其获得新的或更高水平的表达，通过细胞或个体生物性状的变化来研究基因功能。方法转基因技术基因敲入技术目录用转基因技术获得基因功能转基因技术是指将外源基因导入受精卵或胚胎干细胞，即细胞，通过随机重组使外源基因插入细胞染色体，随后将受精卵或细胞植入假孕受体动物的子宫，使得外源基因能够随细胞分裂遗传给后代。转基因动物是指应用转基因技术培育出的携带外源基因，并。
4、研究基因功能用技术研究基因功能用反义技术研究基因功能核酶技术利用能在短时间内高效特异地抑制靶基因表达的特点，可以很方便地研究基因的功能。通过与不完全互补配对结合而抑制翻译，种可沉默多个靶基因。通过反义与细胞中的特异性结合，从而抑制相应的翻译。核酶通过剪切靶分子而抑制基因的表达。目录三用随机突变筛选策略鉴定基因功能随机突变筛选策略的第步是通过物理诱变化学诱变或生物技术产生大量的基因组突变。乙基亚硝基脲是种化学诱变剂，它通过对基因组碱基的烷基化修饰，诱导在复制时发生错配而产生突变。它主要诱发单碱基突变，造成单个基因发生突变。的突变效率非常高。基因捕获技术也是种产生大规模随机插入突变的便利手段，对于揭示基因序列所对应的基因功能具有重要的应用价值。目录生物化学与分子生物学目录第二十二。
5、和帽分析基因表达，技术。目录三用数据库搜索利用对寡核苷酸帽法构建的全长文库末端测序所得的数据信息建立了个数据库并在此基础上，通过将寡核苷酸帽法和大量平行测序技术相结合开发了种测序法，从而实现了次测试可产生个的数据。目录三基因启动子结构分析技术用结合测序技术分析启动子结构该方法最为简单和直接，即根据基因的启动子序列，设计对引物，然后以法扩增启动子，经测序分析启动子序列结构。目录二用核酸蛋白质相互作用技术分析启动子结构用足迹法分析启动子中潜在的调节蛋白结合位点足迹法是利用电泳条带连续性中断的图谱特点判断与蛋白质结合的区域，它是研究核酸蛋白质相互作用的方法，而不是专门用于研究启动子结构的方法。分类酶足迹法化学足迹法目录用核酸酶进行足迹分析酶足迹法是利用酶处理蛋白质复合物，然后通过。
6、列分析，和帽分析基因表达，技术。目录三用数据库搜索利用对寡核苷酸帽法构建的全长文库末端测序所得的数据信息建立了个数据库并在此基础上，通过将寡核苷酸帽法和大量平行测序技术相结合开发了种测序法，从而实现了次测试可产生个的数据。目录三基因启动子结构分析技术用结合测序技术分析启动子结构该方法最为简单和直接，即根据基因的启动子序列，设计对引物，然后以法扩增启动子，经测序分析启动子序列结构。目录二用核酸蛋白质相互作用技术分析启动子结构用足迹法分析启动子中潜在的调节蛋白结合位点足迹法是利用电泳条带连续性中断的图谱特点判断与蛋白质结合的区域，它是研究核酸蛋白质相互作用的方法，而不是专门用于研究启动子结构的方法。分类酶足迹法化学足迹法目录用核酸酶进行足迹分析酶足迹法是利用酶处理蛋白质复合。
7、件。目录预测启动子的其他结构特征启动子区域的其他结构特征包括含量比率转录因子结合位点碱基组成及核心启动子元件等。用于启动子预测的数据库数据库，主要预测真核聚合酶Ⅱ型启动子，数据库中的所有启动子数据信息都经过实验证实是个转录调控区数据库，数据来源于已发表的科学论文。目录四基因编码序列分析技术用文库法分析基因编码序列克隆测序或构建文库是最早分析基因编码序列的方法。全长文库可以通过的结构特征进行判断，的序列基本都由部分组成，即编码序列和。末端快速扩增技术是高效钓取未知基因编码序列的种方法。核酸杂交法可从文库中获得特定基因编码序列的克隆。目录二用剪接分析法确定基因编码序列高通量分析剪接的方法基于芯片的分析法交联免疫沉淀法体外报告基因测定法选择性剪接的转录产物可以通过包括免疫组织化。
8、芯片。针对芯片上的，利用聚合酶或连接酶进行系列循环反应，通过读取碱基连接到链过程中释放出的光学信号而间接确定碱基序列。目录五单分子测序技术被称为第三代测序技术主要策略通过掺入并检测荧光标记的核苷酸，来实现单分子测序，如单分子实时技术利用聚合酶在合成时的天然化学方式来实现单分子测序直接读取单分子序列信息。目录二基因转录起点分析技术转录起点，用克隆直接测序法鉴定以为模板，经逆转录合成第链，同时利用逆转录酶的末端转移酶活性，在第链的末端加上尾，并以此引导合成第二链。将双链克隆于适宜载体，通过对克隆的末端进行测序分析即可确定基因的序列。该方法比较简单，尤其适于对特定基因的分析。但可导致末端部分缺失，从而影响对的序列测定。目录二用末端快速扩增技术鉴定常用的技术包括末端基因表达系。
9、电泳分析蛋白质结合序列。常用的酶有酶和核酸外切酶。目录用化学试剂进行足迹分析化学足迹法是利用能切断骨架的化学试剂处理蛋白质复合物，由于化学试剂无法接近结合了蛋白质的区域，因此在电泳上形成空白区域的位置就是结合蛋白的结合位点。最常用的化学足迹法是羟自由基足迹法。目录用电泳迁移率变动分析和染色质免疫沉淀技术鉴定启动子电泳迁移率变动分析和染色质免疫沉淀只能确定序列中含有核蛋白结合位点，故尚需结合足迹实验和测序等技术来确定具体结合序列。目录三用生物信息学预测启动子用启动子数据库和启动子预测算法定义启动子在定义启动子或预测分析启动子结构时应包括启动子区域的个部分核心启动子近端启动子含有几个调控元件的区域，其范围般涉及上游几百个碱基远端启动子范围涉及上游几千个碱基，含有增强子和沉默子等元。
10、能稳定遗传的动物，其制备步骤主要包括转基因表达载体的构建外源基因的导入和鉴定转基因动物的获得和鉴定转基因动物品系的繁育等。转基因小鼠最为常见。目录目录二用基因敲入技术获得基因的功能基因敲入是通过同源重组的方法，用基因替换另基因，或将个设计好的基因片段插入到基因组的特定位点，使之表达并发挥作用。通过基因敲入可以研究特定基因在体内的功能也可以与之前的基因的功能进行比较或将正常基因引入基因组中置换突变基因以达到靶向基因治疗的目的。目录基因敲入是基因打靶技术的种。基因打靶是种按预期方式准确改造生物遗传信息的实验手段。除基因敲入外，基因打靶还包括基因敲除点突变缺失突变染色体大片段删除等。基因打靶与转基因技术均可用于基因功能研究，但二者的最大区别就是基因打靶能去除和或替换生物体内的固有基。
11、学和免疫细胞化学实验，二者原理相同，都是用标记的抗体在组织细胞原位对目标抗原目标蛋白质多肽进行定性定量定位检测。四用流式细胞术分析表达特异蛋白质的阳性细胞流式细胞术通常利用荧光标记抗体与抗原的特异性结合，经流式细胞仪分析荧光信号，根据细胞表达特定蛋白质的水平对种蛋白质阳性细胞做出判断。目录五用蛋白质芯片和双向电泳高通量分析蛋白质多肽表达水平用蛋白质芯片分析蛋白质多肽的表达谱根据制作方法和用途不同，可将其分为蛋白质检测和功能芯片两大类。蛋白质检测芯片包括抗体芯片抗原芯片配体芯片等，它是将具有高亲和力的特异性探针分子固定在基片上，用以识别生物样品溶液中的目标多肽蛋白质功能芯片可用来研究蛋白质修饰蛋白质蛋白质∕蛋白质∕蛋白质，以及蛋白质与脂质蛋白质与药物酶与底物蛋白质小分子等的相互。
12、标记引物端或，所有产物的末端均带上了同种荧光标记，个样品的四个反应必须分别进行，相应产物也必须在四个不同的泳道内电泳目录三焦磷酸测序是种基于发光法测定焦磷酸的测序技术焦磷酸测序技术操作简单，结果准确可靠，可应用于单核苷酸多态性位点分析等位基因频率测定细菌和病毒等微生物的分型鉴定甲基化分析扫描与疾病相关基因序列中的突变点等领域。该方法的测序长度般短于法。目录四循环芯片测序被称为第二代测序技术循环芯片测序可实现大规模并行化分析不需电泳，设备易于微型化样本和试剂的消耗量降低，降低了测序成本优势技术平台测序测序测序测序等。目录基本流程将基因组随机切割成为小片段在所获小片段分子的末端连上接头，然后变性得到单链模板文库将带接头的单链小片段文库固定于固体表面对固定片段进行克隆扩增，从而制成。
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【医学PPT课件】基因结构与功能分析技术 生物化学与分子生物学