1、疫技术可分为酶免疫组织化学技术和酶免疫测定两大类,后者根据抗原抗体反应后是否需要分离结合与游离的酶标记物而分为均相和非均相两种类型。•均相酶免疫测定主要用于小分子激素和半抗原的测定，非均相酶免疫测定根据是否使用固相支持物，又可分为液相和固相酶免疫测定两种类型。最常用的是以聚苯乙烯等材料作为固相载体的酶联免疫吸附试验,其原理可以有夹心法竞争法间接法和捕获法等。小结第九章酶免疫技术第节酶免疫技术。
2、酶标记试剂能够较长时间保持稳定操作简便对环境没有污染。易与其它技术偶联衍生出适用范围更广的新方法。原理酶标抗体抗原与抗原抗体的特异性反应酶对底物的显色反应对抗原或抗体进行定位定性或定量的测定分析原理及特点标记酶的要求活性高性质稳定专性强酶催化底物的显色信号易于判断和测量方法敏感，重复性好，简单易行酶的底物易于配制保存，酶及底物价廉酶和酶作用底物辣根过氧化物酶来自植物辣根中糖蛋白主。
3、不能与非特异性结合加酶标抗体无抗原结合，加底物不显色第四节酶免疫测定的应用均相酶免疫测定主要用于药物和小分子物质的检测。非均相免疫测定中的应用更为广泛，广泛用于传染病的诊断，病毒如病毒性肝炎甲肝抗体“乙肝三对”丙肝抗体丁肝抗体戊肝抗体风疹病毒疱疹病毒轮状病毒等细菌如结核杆菌幽门螺杆菌等。也用于些蛋白质检测，如各种免疫球蛋白补体肿瘤标志物甲胎蛋白癌胚抗原前列腺特异性抗原等。酶免疫技术的要点酶联。
4、的特点酶和酶作用底物二酶标记抗体或抗原三固相载体第二节酶免疫技术的分类均相酶免疫测定二非均相酶免疫测定第三节酶联免疫吸附试验基本原理二方法类型及反应原理思考题小结放射免疫技术发光免疫技术酶免疫技术三大经典标记技术三大经典标记技术第节酶免疫技术的特点•主要试剂酶标记的抗体或抗原•酶标物特点免疫学活性酶对底物的催化活性抗原抗体反应的特异性酶高效催化反应的专性原理及特点特点灵敏度高特异性强准确性。
5、，酶活性单位比值更为重要中应用最为广泛的标记用酶常用酶酶和酶作用底物碱性磷酸酶菌源性肠粘膜半乳糖苷酶用于均相酶免疫测定常用酶酶和酶作用底物的底物供氢体习惯上被称为底物，底物有多种为受氢体，对受氢体的专性很高常用底物酶和酶作用底物的常见底物邻苯二胺四甲基联苯胺氨基水杨酸,氨基二乙基苯并噻唑啉磺酸铵盐常用底物酶和酶作用底物邻苯二胺反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长。不稳定，致癌性。。
6、部分酶结合物酶标记物通过化学反应或免疫学反应，让酶与抗体或抗原形成的结合物二酶标记抗体或抗原抗原要求纯度高，抗原性完整抗体需要特异性好效价高亲合力强以及比活性较高，能批量生产，易纯化。制备方法要求酶标记抗体或抗原制备方法要求技术方法简单产率高，重复性好标记反应不影响酶和抗原或抗体的活性酶标记物稳定，不形成聚合物酶标记抗体或抗原制备方法改良过碘酸钠法直接法常用于标记抗体或抗原过碘酸钠将酶的。
7、酶标抗原与抗体结合间接法与双抗体夹心区别方法用已知抗原包被，加入待测血清未知抗体，再加酶标的抗人抗抗体或二抗孵育，洗板后加底物显色。优点种酶标抗抗体检测各种与抗原相应的抗体应用常用于抗体抗体和梅毒螺旋体抗体等的测定检测抗体的方法间接法测抗体双抗原夹心法原理类似双抗体夹心法操作步骤类似应用乙型肝炎表面抗体检测抗体的方法竞争法原理类似检测抗原的竞争法应用乙型肝炎病毒核心抗体和乙型。
8、酶和酶作用底物邻苯二胺反应后显橙黄色，加酸终止反应后呈棕黄色，测定波长。不稳定，致癌性。四甲基联苯胺反应后显蓝色，加酸终止反应后变为黄色,测定波长，稳定，无致癌性，中应用最广泛的底物。的常见底物酶和酶作用底物的底物半乳糖苷酶的底物对硝基苯磷酸酯甲基伞酮基半乳糖苷经作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为。酶作用后，生成高强度荧光物，用荧光计测量。常用底物酶和酶作用底物酶免疫技术的核心组成。
9、四甲基联苯胺反应后显蓝色，加酸终止反应后变为黄色,测定波长，稳定，无致癌性，中应用最广泛的底物。的常见底物酶和酶作用底物的底物半乳糖苷酶的底物对硝基苯磷酸酯甲基伞酮基半乳糖苷经作用后的产物为黄色对硝基酚，最大吸收峰波长为。酶作用后，生成高强度荧光物，用荧光计测量。常用底物酶和酶作用底物酶免疫技术的核心组成部分酶结合物酶标记物通过化学反应包被于载体表面已知抗体包被于载体表面加待测物和酶标抗原，。
10、疫吸附试验的原理竞争法在酶联免疫检测应用中的原理和应用常用的底物有哪几类特点常用的酶有哪几类特点何谓包被与封闭其作用常用固相载体的种类和特点举例固相酶免疫测定应用的原理及影响因素。的非特异性干扰有哪些，其机制对酶免疫技术的应用评价如何思考题•酶免疫技术是标记免疫技术的种，它是以酶标记的抗原或抗体作为主要试剂的免疫检测方法，在抗原与抗体的特异性反应完成后，通过酶对底物的作用进步提高敏感性。酶免。
11、炎病毒抗体的检测检测抗体的方法捕获法应用病原体急性感染诊断中的型抗体甲型肝炎抗体乙型肝炎病毒核心抗体检测抗体的方法捕获法反向间接法原理抗人链抗体包被捕获待测标本中类抗体加入特异性抗原和酶标记特异性抗原的抗体底物显色正比捕获法原理固相化抗人固相化抗人加待测物特异性与非特异性和抗人结合加特异性抗原，与特异性抗体结合加酶标抗体与特异性抗原结合，加底物显色加待测物只有非特异性和抗人结合加特异性抗原，。
12、酶亚铁血红素辅基主酶与酶活性无关辅基是酶的活性中心值辅基与主酶值之比，应大于值与酶活性无关，酶活性单位比值更为重要中应用最为广泛的标记用酶常用酶酶和酶作用底物碱性磷酸酶菌源性肠粘膜半乳糖苷酶用于均相酶免疫测定常用酶酶和酶作用底物的底物供氢体习惯上被称为底物，底物有多种为受氢体，对受氢体的专性很高常用底物酶和酶作用底物的常见底物邻苯二胺四甲基联苯胺氨基水杨酸,氨基二乙基苯并噻唑啉磺酸铵盐常用底。
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酶免疫技术【48页PPT课件】