1、,则本次检测结果无效,应更换试剂按本方法重新检测。犛犖犜附录犃资料性附录志贺氏菌靶基因序列犃志贺氏菌靶基因序列犪犮犮犲狊狊犻狅狀狀狅犕硫酸镁甜菜碱犅狊狋聚合酶模板去离子水反应过程按表所述配制反应体系。扩增。空白对照阴性对照阳性对照设置每次反应应设置阴性对照空白对照和阳性对照。空白对照设为以水替代模板。阴性对照以缓冲液代替模板。阳性对照制备将志贺氏菌标准菌株接种于营养肉汤中.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部。

2、检测方法第部分志贺氏菌.进步按中操作步骤进行确认后报告结果待检样品反应管液体呈橙色则可报告志贺氏菌检验结果为阴性。若与上述条件不符,则本次检测结果无效,应更换试剂按本方法重新检测。犛犖犜附录犃资料性附录志贺氏菌靶基因序列犃志贺氏菌靶基因序列犪犮犮犲狊狊犻狅狀狀狅犕内引物,犅狊狋聚合酶提取试剂细菌基因组提取试剂盒。.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分志贺氏菌。缩略语下列培养过夜,用无菌生理盐水稀释至约约麦。

3、犘检测程序操作步骤样品制备及增菌培养按照的方法进行样品制备和增菌。采用下述方法,也可使用等效的商品化的提取略语适用于本文件。甘氨酸甲内盐犅狊狋酶犅狊狋犅狊狋聚合酶大片段脱氧核糖核酸脱氧核苷磷酸乙胺乙酸注阴影所示部分为志贺氏菌靶基因序列。犃组成引物中碱基构成犛犖犜。外引物扩增片段长度。外引物,外引物,内引物,进步按中操作步骤进行确认后报告结果待检样品反应管液体呈橙色则可报告志贺氏菌检验结果为阴性。若与上述条件不。

4、程量程量程。.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检测方法第部分志贺氏菌。缩略语下列缩略语适用于本文件。甘氨酸甲内盐犅狊狋酶犅狊狋环介导恒温核酸扩增聚乙醇辛基苯基醚技术概要根据志贺氏菌属犻狆犪犎基因序列参见附录设计的两对特殊的内外引物,特异性识别靶序列上犛犖犜的个独立区域,利用犅狊狋酶启动循环链置换反应,在犻狆犪犎基因序列启动互补链合成,在同链上互补序列周而复始形成有很多环的花椰菜结构.出口食品中致病菌环介导恒温扩增。

5、引物硫酸镁诚高东微。犛犖犜出口食品中致病菌环介导恒温扩增犔犃犕犘检测方法第部分志贺氏菌范围的本部分规定了检测出口食品中志贺氏菌的环介导恒温核酸扩增法。犛犖犜图食品中志贺氏菌犔犃犕犘检测程序操作步骤样品制备及增菌培养按照的方法进行样品制备和增菌。采用下述方法,也可使用等效的商品化的提取试剂盒并按其说明提取制备模板。模板犇犖犃提注阴影所示部分为志贺氏菌靶基因序列。犃组成引物中碱基构成犛犖犜。犛犖犜图食品中志贺氏菌犔犃犕。

6、志贺氏菌.取增菌液模板犇犖犃的制备对于获得的增菌液,采用如下方法制备模板直接取该增菌液加到无菌离心管中,犵离心,尽量吸弃上清液加入,混匀后沸水浴,置冰上犵离心,上清液即为模板取上清液置可保存个月备用。可疑菌落模板犇犖犃的制备对于分离到的可疑菌落,可直接挑取可疑菌落,再按照步骤制备模板以待检进步按中操作步骤进行确认后报告结果待检样品反应管液体呈橙色则可报告志贺氏菌检验结果为阴性。若与上述条件不符,则本次检测结果无效,。

7、浊度,按提取模板作为反应的模板。结果观察在上述反应管中加入显色液,轻轻混匀并在黑色背景下观察。结果判定和报告在空白对照和阴性对照反应管液体为橙色,阳性对照反应管液体呈绿色的条件下待检样品反应管液体呈绿色,该样品结果为志贺氏菌初筛阳性,对样品的增菌液或可疑纯菌落无菌生理盐水稀释至约约麦氏浊度,按提取模板作为反应的模板。结果观察在上述反应管中加入显色液,轻轻混匀并在黑色背景下观察。结果判定和报告在空白对照和阴性对照反应。

8、示部分为志贺氏菌靶基因序列。犃组成引物中碱基构成犛犖犜。外引物扩增片段长度。外引物,外引物,内引物,培养过夜,用无菌生理盐水稀释至约约麦氏浊度,按提取模板作为反应的模板。结果观察在上述反应管中加入显色液,轻轻混匀并在黑色背景下观察。结果判定和报告在空白对照和阴性对照反应管液体为橙色,阳性对照反应管液体呈绿色的条件下待检样品反应管液体呈绿色,该样品结果为志贺氏菌初筛阳性,对样品的增菌液或可疑纯菌落甜菜碱犅狊狋聚。

9、液体为橙色,阳性对照反应管液体呈绿色的条件下待检样品反应管液体呈绿色,该样品结果为志贺氏菌初筛阳性,对样品的增菌液或可疑纯菌落进步按中操作步骤注阴影所示部分为志贺氏菌靶基因序列。犃组成引物中碱基构成犛犖犜。外引物扩增片段长度。外引物,外引物,内引物,犛犖犜环介导恒温核酸扩增反应体系志贺氏菌反应体系见表。表志贺氏菌犔犃犕犘反应体系组分工作液浓度加样量反应体系终浓度缓冲液外侧上游引物外侧下游引物内侧上游引物内侧下。

10、海英蔡国瑞侯丽萍李志勇曾静孙慈惠凌莉曹以,内引物,犅狊狋聚合酶提取试剂细菌基因组提取试剂盒。.出口食品中致病菌环介导恒温扩增检试剂盒并按其说明提取制备模板。模板犇犖犃提取增菌液模板犇犖犃的制备对于获得的增菌液,采用如下方法制备模板直接取该增菌液加到无菌离心管中,犵离心,尽量吸弃上清液加入,混匀后沸水浴,置冰上犵离心,上清液即为模板取上清液置可保存个月备用。可疑菌落模板犇犖犃的制备对于分离到的可疑菌落,可直注阴影。

11、酶模板去离子水反应过程按表所述配制反应体系。扩增。空白对照阴性对照阳性对照设置每次反应应设置阴性对照空白对照和阳性对照。空白对照设为以水替代模板。阴性对照以缓冲液代替模板。阳性对照制备将志贺氏菌标准菌株接种于营养肉汤中培养过夜,用测方法第部分志贺氏菌。犛犖犜环介导恒温核酸扩增反应体系志贺氏菌反应体系见表。表志贺氏菌犔犃犕犘反应体系组分工作液浓度加样量反应体系终浓度缓冲液外侧上游引物外侧下游引物内侧上游引物内侧下游引。

12、更换试剂按本方法重新检测。犛犖犜附录犃资料性附录志贺氏菌靶基因序列犃志贺氏菌靶基因序列犪犮犮犲狊狊犻狅狀狀狅犕挑取可疑菌落,再按照步骤制备模板以待检测。本部分由国家认证认可监督管理委员会提出并归口。本部分起草单位中华人民共和国天津出入境检验检疫局中华人民共和国北京出入境检验检疫局中华人民共和国广东出入境检验检疫局中华人民共和国江门出入境检验检疫局广州华峰生物科技有限公司。本部分主要起草人郑文杰刘伟张宏伟张霞王志强张。

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