1、胞杆菌,发酵葡萄糖产酸氧化分制法将结晶紫完全溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。革兰氏碘液成分制法将碘和碘化钾先行混合,加入少许蒸馏水充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至。沙黄复染液成分制法将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。染色方法将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染,水洗。滴加革兰氏碘液,作用,水洗。显微镜倍倍。均质器。振荡器。无菌吸管或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶或等效容器容量。无菌培养检验。缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤成分磷酸氢钠无水制法,加热煮沸至完全溶解,加热不宜超过,迅速冷却培养基,于调,分装于灭菌的试管中,每管,不需高压灭菌,可存放个月。结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂成分酒精溶液水溶液制法,加热煮。

2、结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂成分酒精溶液水溶液制法,加热煮沸至完全溶解,.食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验.加入两个无菌平皿内作为空白对照。将冷却至的可放置于恒温水浴箱中保温倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,使样品匀液与培养基充分混匀。待琼脂凝固后,倾注薄层同样的培养基覆盖平板表层。防止蔓延生长并使菌落特征更为明显。待平板上层琼脂凝固后翻转平板,培养。典型菌落计数和确认肠杆菌科典型菌落为有或无沉淀环的粉红色至红色或紫色菌落。选取典型菌落数在可存放两周。营养琼脂成分制法,加热煮沸,,高压灭菌。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板于可存放两周。葡萄糖琼脂成分制法,加热煮沸,,分装于试管,每管约,高压灭菌后,。

3、分别将所挑选的每个菌落匀液。,依次制成倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释次,换用支无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过。倾注平板和培养根据对样品污染状况的估计及相关限量要求,选择个个适宜的连续稀释度的样品匀液液体样品可以选择原液,每个稀释度接种个无菌平皿。同时,分别吸取加入两个无菌平皿内作为空白对照。将冷却至的可放置于恒温水浴箱中保温倾注于每个平皿择个适宜连续稀释度的样品匀液,每个稀释度管,共管于培养。选择性增菌从各培养管中,分别移取培养物,接种于的肉汤中,培养。分离用接种环从各肉汤管中分别取培养物环,划线接种于平板,培养,观察平板上有无典型菌落。典型菌落的确认。报告肠杆菌科为革兰氏阴性无。

4、高倍,其余类的氧气,使用前可将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中,然后迅速冷却,备用。革兰氏染色液结晶紫染色液成分制法将结晶紫完全溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。革兰氏碘液成分制法将碘和碘化钾先行混合,加入少许蒸馏水充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至。沙黄复染液成分制法将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。染色方法将涂片在火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染,水洗。滴加革兰氏碘液,作用,水洗。滴加乙醇皿直径。无菌试管。计或比色管或精密试纸。培养基和试剂缓冲蛋白胨水。缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤成分磷酸氢钠无水制法,加热煮沸至完全溶解,加热不宜超过,迅速冷却培养基,于调,分装于灭菌的试管中,每管,不需高压灭菌,可存放个月。。

5、宜超过,迅速冷却培养基,于调,分装于灭菌的试管中,每管,不需高压灭菌,可存放个月。结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂成分酒精溶液水溶液制法,加热煮沸至完全溶解,,分装于灭菌的锥形烧瓶中,不需高压灭菌,用前制备。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板其中个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数若片状菌落不到平板的半,而其余半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以,代表个平板菌落数。当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为个菌落计数。从每个平板上至少挑取个小于个全选典型菌落进行确认如果有不同形态的典型菌落,则每种形态分别至少挑取个菌落进行确认。典型菌落的确认。

6、沸至完全溶解,,分装于灭菌的锥形烧瓶中,不需高压灭菌,用前制备。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板加入两个无菌平皿内作为空白对照。将冷却至的可放置于恒温水浴箱中保温倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,使样品匀液与培养基充分混匀。待琼脂凝固后,倾注薄层同样的培养基覆盖平板表层。防止蔓延生长并使菌落特征更为明显。待平板上层琼脂凝固后翻转平板,培养。典型菌落计数和确认肠杆菌科典型菌落为有或无沉淀环的粉红色至红色或紫色菌落。选取典型菌落数在菌科平板计数法检验程序操作步骤样品的稀释固体和半固体样品称取样品放入盛有的无菌均质杯中,均质,或放入盛有的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打,制成∶的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取样品。

7、试管垂直放置。于可存放周。为去除培养基中的氧气,使用前可将葡萄糖琼脂试管置于沸水浴中,然后迅速冷却,备用。革兰氏染色液结晶紫染色液的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不应触及稀释液面,振摇试管或换用支无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成∶的样品匀液。,依次制成倍递增系列稀释样品匀液。每递增稀释次,换用支无菌吸管或吸头。从制备样品匀液至样品接种完毕,全过程不得超过。倾注平板和培养根据对样品污染状况的估计及相关限量要求,选择个个适宜的连续稀释度的样品匀液液体样品可以选择原液,每个稀释度接种个无菌平皿。同时,分别吸取菌。附录肠杆菌科最可能数检索表每克毫升检样中肠杆菌科最可能数。肠杆菌科最可能数的检索表阳性管数置信区间下限上限。

8、别将所挑选的每个菌落,划线于营养琼脂平板,培养,挑取平板上的菌落进行革兰氏染色镜检氧化酶试验及葡萄糖发酵试验。革兰氏染色镜检肠杆菌科为革兰氏阴性杆菌,无芽孢,大小为。氧化酶试验用铂铱接种环或玻璃棒不要用镍铬接种环挑取单个菌落涂于浸湿氧化酶试剂的滤纸上,滤纸的颜色在内变成蓝紫色,判为阳性反应。葡萄糖发酵试验用阴性。只要有个菌落确认为肠杆菌科,其所代表的管即为肠杆菌科阳性,依据阳性管数查表见附录,报告每克毫升样品中肠杆菌科的值。称重取样以为单位报告,体积取样以为单位报告。.食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验。图肠杆菌科平板计数法检验程序操作步骤样品的稀释固体和半固体样品称取样品放入盛有的无菌均质杯中,检验。。

9、性管数置信区间下限上限注本表采用个稀释度,每个稀释度接种管。注表内所列检样量如改用时,表内数字应相应降低倍时,则表内数字应相应增高倍,其余类推。.食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌,若试管内的内容物变为黄色,判为阳性反应。结果的计算般原则若有两个连续稀释度的平板典型菌落数在适宜计数范围内,按式计算,。式中样品中肠杆菌科菌落数确证的肠杆菌科菌落数之和第稀释度低稀释倍数平板个数含确证的肠杆菌科菌落第稀释度高稀释倍数平板个数含确证的肠杆菌科菌落稀释因子第稀释度。滴加乙醇脱色,直至染色液被洗掉,但不要过分脱色水洗。加沙黄复染液,复染,水洗检验。缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤成分磷酸氢钠无水制法,加热煮沸至完全溶解,加热不。

10、基充分混匀。待琼脂凝固后,倾注薄层同样的培养基覆盖平板表层。防止蔓延生长并使菌落特征更为明显。待平板上层琼脂凝固后翻转平板,培养。典型菌落计数和确认肠杆菌科典型菌落为有或无沉淀环的粉红色至红色或紫色菌落。选取典型菌落数在均质,或放入盛有的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打,制成∶的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取样品放入盛有的无菌锥形瓶瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠中,充分混匀,制成∶的样品匀液。用无菌吸管或微量移液器吸取∶样品匀液,沿管壁缓缓注入盛有的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不应触及稀释液面,振摇试管或换用支无菌吸管反复吹打,使其混合均匀,制成∶的样型菌落,则每种形态分别至少挑取个菌落进行确认。典型菌落的确认分。

11、缓冲葡萄糖煌绿胆盐肉汤肉汤成分磷酸氢钠无水制法,加热煮沸至完全溶解,加热不宜超过,迅速冷却培养基,于调,分装于灭菌的试管中,每管,不需高压灭菌,可存放个月。结晶紫中性红胆盐葡萄糖琼脂成分酒精溶液水溶液制法,加热煮沸至完全溶解,,分装于灭菌的锥形烧瓶中,不需高压灭菌,用前制备。倾注平板,使用前干燥平板。未干燥的平板之间无蔓延菌落生长的平板,只计数典型菌落数。菌落计数以菌落形成单位,表示。若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。称重取样以为单位报告,体积取样以为单位报告。第法肠杆菌科计数法检验程序肠杆菌科计数法检验程序见图。图肠杆菌科计数法检验程序操作步骤样品的稀释。接种和培养非选择性前增菌根据对样品污染状况的估。

12、放入盛有的无菌锥形瓶瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠中,充分混匀,制成∶的样品匀液。用无菌吸管或微量移液器吸取∶样品匀液,沿管壁缓缓注入盛有.食品安全国家标准食品微生物学检验肠杆菌科检验.中。小心旋转平皿,使样品匀液与培养基充分混匀。待琼脂凝固后,倾注薄层同样的培养基覆盖平板表层。防止蔓延生长并使菌落特征更为明显。待平板上层琼脂凝固后翻转平板,培养。典型菌落计数和确认肠杆菌科典型菌落为有或无沉淀环的粉红色至红色或紫色菌落。选取典型菌落数在之间无蔓延菌落生长的平板,只计数典型菌落数。菌落计数以菌落形成单位,表加入两个无菌平皿内作为空白对照。将冷却至的可放置于恒温水浴箱中保温倾注于每个平皿中。小心旋转平皿,使样品匀液与培。

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