1、性对照反应孔。过程控制病毒以食品中过程控制病毒的提取效率表示食品中诺如病毒的提取效率,作为病毒提取过程控制。可大量提取,分装为过程控制病毒的量,保存,序列位于聚合酶启动子序列的下游序列,从而表达出外部扩增控制。型外部扩增序列位于诺如病毒登录号的。型外部扩增序列位于病毒登录号的。试剂和设备限制性酶用于连接及相关的缓冲液。纯化试剂。体外转录试剂聚合酶缓冲液等纯化试剂。凝胶电泳试剂和设备。培养箱。质粒连接添加纯化的目标和质粒设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下实时荧光仪。冷冻离心机。无菌刀片或等效均质器。涡旋仪。天平。振荡器。水浴锅。氯仿正丁醇的混合液。蛋白酶溶液。乙醇。试剂。检验。

2、,次,振荡。酸性软质水果需在振荡过程中,每隔检测,如,使用,每调整次,延长振荡时间。将振荡液转移至离心管,如体积较大,可使用根离心管。离心。取上清至干净试管或角瓶,用。中华人民共和国国家标准食品安全国家标.食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验.取过程控制。可大量提取,分装为过程控制病毒的量,保存,每次检测时取出使用。将过程控制病毒的进行数次倍梯度稀释反应孔,加入过程控制病毒引物探针,采用与诺如病毒实时荧光反应相同的反应条件确定未稀释和梯度稀释过程病毒的值。以未稀释和梯度稀释过程控制病毒的浓度值为轴,以其值为轴,建立标准曲线标准曲线应。未稀释过程控制病毒浓度为,梯度稀释过程控制浓度分别为等。过程控。

3、类中诺沃克病毒检测方法普通方法和将含过程控制病毒食品样品反应孔,加入过程控制病毒引物探针,采用诺如病毒实时荧光反应相同的反应体系和参数,进行实时荧光反应,确定值,代入标准曲线,计算经过病毒提取等步骤后的过程控制病毒浓度。计算提取效率,提取效率经病毒提取等步骤后的过程控制病毒浓度,即反应孔值对应浓度。外加扩增控制通过外加扩增控制,计算扩增抑制指数,作为扩增控制。外加扩增控制分别加入含过程控制病毒食品样品反应燥,以免不溶。加入无超纯水,轻轻混匀,溶解管壁上的离心,冰上保存备用。质量控制空白对照以无超纯水作为空白对照反应孔。阴性对照以不含有诺如病毒的贝类,提取,作为阴性对照反应孔。阳性对照以外加扩增控制,作为。

4、品样品的抑制指数,即抑制指数反应孔值反应孔值。实时荧光实时荧光品中诺如病毒的实时荧光检测方法。本标准适用于贝类,生食蔬菜,胡萝卜瓜坚果等硬质表面食品,草莓西红柿葡萄等软质水果等食品中诺如病毒核酸的检测。设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下实时荧光仪。冷冻离心机。无菌刀片或等效均质器。涡旋仪。天平。振荡器。水浴锅。离心机。高压灭菌锅。低温冰箱。微量移液器。计或精密试纸。网状过滤袋。无菌棉拭子。无菌贝类剥刀。橡胶垫。无菌剪刀。无菌钳品可设置个平行处理。软质水果和生食蔬菜如水果或蔬菜小于该体积,可不切。将样品小块移至带有网状过滤袋的样品袋,加入溶液软质水果样品加入过程控制病毒。室温。

5、剂盒。也可增加调整反应孔,实现次反应完成和型诺如病毒的独立检测。孔后,不同反应孔加入下述不同物质,检测或基因型诺如病毒。反应孔空白对照,加入无超纯水或型引物探针反应孔阴性对照,加入阴性提取对照或型引物探针反应孔病毒提取过程控制,加入含过程控制病毒食品样品引物探针性,也可酌情判定为阳性。.食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验。离心机。高压灭菌锅。低温冰箱。微量移液器。计或精密试纸。网状过滤袋。无菌棉拭子。无菌贝类剥刀。橡胶垫。无菌剪刀。无菌钳子。中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验发布实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布前言本标准代替。

6、序诺如病毒检验程序见图。图诺如病毒检验程序操作步骤病毒提取注样品处理般应在以下的环境中进行运输。实验室接到样品后应尽快进行检测,如果暂时不能检测应将样品保存在冰箱中,试验前解冻。样品处理和反应应在单独的工作区域或房间进行。每个性,也可酌情判定为阳性。.食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验。离心机。高压灭菌锅。低温冰箱。微量移液器。计或精密试纸。网状过滤袋。无菌棉拭子。无菌贝类剥刀。橡胶垫。无菌剪刀。无菌钳子。中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验发布实施中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会国家食品药品监督管理总局发布前言本标准代替贝类中诺沃克病毒检测方法普通方法和取。

7、病毒实时荧光方法。本标准与相比,主要变化如下标准名称修改为食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验标准检测范围从贝类扩增为食品修改操作步骤增加质量控制要求,可参见附录删除普通方法。食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验范围本标准规定了食品中诺如病毒的实时荧光检测方法。本标准适用于贝类,生食蔬菜,胡萝卜瓜坚果等硬质表面食品,草莓西红柿葡萄等软质水果等食品中诺如病毒核酸的检测。干,份样本换用个吸头,吸头不要碰到有沉淀,室温干燥,不能过于干燥,以免不溶。加入无超纯水,轻轻混匀,溶解管壁上的离心,冰上保存备用。质量控制空白对照以无超纯水作为空白对照反应孔。阴性对照以不含有诺如病毒的贝类,提取,作为阴性。

8、控制病毒引物探针,采用与诺如病毒实时荧光反应相同的反应条件确定未稀释和梯度稀释过程病毒的值。以未稀释和梯度稀释过程控制病毒的浓度值为轴,以其值为轴,建立标准曲线标准曲线应。未稀释过程控制病毒浓度为,梯度稀释过程控制浓度分别为等。过程控制病毒储备液,或者请生物公司代为制备。病毒提取离心管中加入等体积异丙醇,颠倒混匀,室温放置离心,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体不同样品须在吸水纸不同地方沾干。病毒纯化每次加入等体积乙醇,颠倒洗涤沉淀次。于离心,小心弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体不同样品须在吸水纸不同地方沾干。或小心倒去上清液,用微量加样器将其吸干,份样本换用个吸头,吸头不要碰到有沉淀,室温干燥,不能过于。

9、照反应孔。阳性对照以外加扩增控制,作为阳性对照反应孔。过程控制病毒以食品中过程控制病毒的提取效率表示食品中诺如病毒的提取效率,作为病毒针反应孔扩增控制阳性对照,加入无超纯水外加扩增控制或型引物探针反应孔样品,加入含过程控制病毒食品样品或型引物探针反应孔样品,加入倍稀释的含过程控制病毒食品样品或型引物探针。结果与报告检测有效性判定需满足以下质量控制要求,检测方有效空白对照阴性反应孔阴性对照阴性反应孔阳性对照反应孔阳性。过程控制反应孔需满足提取效率如提取效率,需重新检测但如提取效率,检测结果为阳反应体系和反应参数详见附录。反应体系中各试剂的量可根据具体情况或不同的反应总体积进行适当调整。可采用商业化实时荧光。

10、上清,倒置于吸水纸上,沾干液体不同样品须在吸水纸不同地方沾干。或小心倒去上清液,用微量加样器将其吸.食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验.每次检测时取出使用。将过程控制病毒的进行数次倍梯度稀释反应孔,加入过程控制病毒引物探针,采用与诺如病毒实时荧光反应相同的反应条件确定未稀释和梯度稀释过程病毒的值。以未稀释和梯度稀释过程控制病毒的浓度值为轴,以其值为轴,建立标准曲线标准曲线应。未稀释过程控制病毒浓度为,梯度稀释过程控制浓度分别为等。.食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检取过程控制。可大量提取,分装为过程控制病毒的量,保存,每次检测时取出使用。将过程控制病毒的进行数次倍梯度稀释反应孔,加入过。

11、反应孔病毒提取过程控制,加入过程控制病毒反应孔病毒提取过程控制,加入倍稀释过程控制病毒引物探针反应孔病毒提取过程控制,加入倍稀释过程控制病毒引物探针反应孔病毒提取过程控制,加入倍稀释过程控制病毒引物探针反应孔扩增控制,加入含过程控制病毒食品样品外加扩增控制或型引物探针反应孔扩增控制,加入倍稀释的含过程控制病毒食品样品外加扩增控制或型引物载体加入含有合适的限制酶和缓冲液的反应体系中,限制酶和缓冲液的使用按照酶厂家推荐,并确保目标序列位于质粒中聚合酶启动子序列的下游。培养。纯化使用纯化试剂纯化。使用凝胶电泳检查连接情况,比较连接前与连接后目标和质粒情况。外加扩增控制的表达添加连接后的质粒至转化体系。该体系按。

12、程控制。可大量提取,分装为过程控制病毒的量,保存,每次检测时取出使用。将过程控制病毒的进行数次倍梯度稀释反应孔,加入过程控制病毒引物探针,采用与诺如病毒实时荧光反应相同的反应条件确定未稀释和梯度稀释过程病毒的值。以未稀释和梯度稀释过程控制病毒的浓度值为轴,以其值为轴,建立标准曲线标准曲线应。未稀释过程控制病毒浓度为,梯度稀释过程控制浓度分别为等。过程控制病毒性,也可酌情判定为阳性。.食品安全国家标准食品微生物学检验诺如病毒检验。病毒提取离心管中加入等体积异丙醇,颠倒混匀,室温放置离心,弃上清,倒置于吸水纸上,沾干液体不同样品须在吸水纸不同地方沾干。病毒纯化每次加入等体积乙醇,颠倒洗涤沉淀次。于离心,小心。

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