1、精子数量活动度或形态受到影响,相应子代大鼠出现定发育毒性表现的代大鼠,需对其生殖器官进行全面组织病理学的评价。代队列队列全部高剂量组和对照组成年动物的器官需进行组织病理学检査,每窝至少有只仔鼠。如发现脏器出现与受试物有关的有意义的病理改变后,需进步检査所有中低剂量组的动物,以确定。另外,如果从队列动物得到的结果仍存在可疑,需进行队列动物的组织学检査加以验证。队列在完成神经行为测试之后在出生天后,但不超过天,队列全部高剂量组和对照组大鼠摘取脑等组织后进行神经组织病理学检查。在出生后第或天,天时,对队列的大鼠进行听觉惊吓测试。在进行听觉惊吓测试时,需使实验条件优化到每次测试条件较为稳定。受试物组和对照组交叉进行测试,所有检测的动物均需测试次,次为组,共组,记录每组测试动物的平均。

2、相关生殖发育指标检测后,处死仔鼠表扩展代生殖毒性试验代各队列实验动物使用情况各队列中从每窝选用仔鼠数目只各剂量组中评价队列各队列的试验目的各项指标使用动物数量只是否性成熟各队列指标检测结束时代仔鼠剖检时间周龄雄雌雄雌生殖毒性是是如组发现可能的对生殖的毒性影响,组周龄行剖检给予验证或组到达日龄不超日龄后继续交配,通过繁殖代进步开展生殖毒性观察试验可于代大鼠出生后天时结束即周龄左右神经发育毒性是否发育免疫毒性是剩余备用交配采用∶雄雌方式交配。交配时,在同剂量组中随机选择雌雄大鼠各只合笼,合笼的雌雄性大鼠均应作标记。所有雌性大鼠在交配期应每天检查阴栓或精子,直到证明已交配为止,并在证明已交配后尽快将雌性动物分开。查到精子或阴栓的当天为受孕。如经过个发情期或周仍机的方式而不是以体重。

3、的,可将受试物掺入饲料饮水或灌胃给予实验动物。首选掺入饲料,若受试物加入饲料或饮水中影响动物的适口性,则考虑选择灌胃给予。试验期间,所有动物应采用相同的方式给予受试物如受试物经灌胃给予,灌胃频次按每天次,每周天给予。各代大鼠给予的受试物剂量按动物另外,从尽可能多的窝中得到每组每个性别只仔鼠,对其脑脾脏和胸腺称重并保存。组织病理学检查代代大鼠试验结束时所摘取器官应进行组织病理学检查,可先进行高剂量组和对照组检查,如发现与受试物有关的有意义的组织病理学改变时,需进步检査所有较低的剂量组的动物。此外,对出现未能成功进行交配受孕射精,发情周期精子数量活动度或形态受到影响,相应子代大鼠出现织病理学改变时,需进步检査所有较低的剂量组的动物。此外,对出现未能成功进行交配受孕射精,发情周期。

4、质量分数,若超过时最大不应超过,调整对照组饲料营养素水平若受试物无热量或营养成分,且添加比例大于时,对照组饲料应填充甲基纤维素等,掺入量等同高剂量,使其与剂量组饲料营养素水平保持致亦可视受试物热量或营养成分的状况调整剂量组饲料营养素水平,使其与对照组饲料营养素水平保持致。受试物剂量单位是每千克体重所摄入受试物的毫克或克数,即体重或体重,当受试物掺入饲料其剂量单位亦可表示为或饲料,掺入饮水则表示为水。受试物掺入饲料时,需将受试物剂量体重按动物每体重的摄食量折算为受试物饲料含量饲料。受试物选择灌胃方式给予时,要将受试物溶解或悬浮于合适的溶媒中,建议优先考虑使用水溶液或悬哺乳期给予受试物,哺乳期第天结束试验,处死雌雄鼠。食品安全国家标准扩展代生殖毒性试验征求意见稿。出生后天,完成。

5、后继续交配,通过繁殖代进步开展生殖毒性观察试验可于代大鼠出生后天时结束即周龄左右神经发育毒性是否发育免疫毒性是剩余备用交配采用∶雄雌方式交配。交配时,在同剂量组中随机选择可引起轻微的毒性反应低剂量应不引起任何毒性反应。为了避免未观察到有害作用剂量和最小观察到有害作用剂量之间跨度过大,剂量组间距以倍或倍为最佳。如果受试物的毒性较低,体重的剂量仍未观察到有任何毒副作用,或者依据结构分析或代谢的相关数据未发现受试物具有毒性作用,且体内和体外试验中指示相似,以上情况可采用限量试验设计,即试验中不再考虑增设受试物其他剂量组,仅设个对照组和个至少体重的剂量组。但如果限量试验过程中发现受试物出现了代和或代生殖发育毒性作用,则需要增加低剂量组试验以确定值。受试物给予根据受试物的特性或试验目。

6、反应振幅。在受试物理化和生物特性允许的条件下,最高剂量应使和代动物出现明显的毒性反应,但不引起动物死亡中间剂量可引起轻微的毒性反应低剂量应不引起任何毒性反应。为了避免未观察到有害作用剂量和最小观察到有害作用剂量之间跨度过大,剂量组间距以倍或倍为最佳。如果受试物的毒性较低,体重的剂量仍未观察到有任何毒副作用,或者依据结构分析或代谢的相关数据未发现受试物具有毒性作用,且体内和体外试验中指示相似,以上情况可采用限量试验设计,即试验中不再考虑增设受试物其他剂量组,仅设个对照组和个至少体重的剂量组。但如果限量试验过程中发现受试物出现了代和或代生殖发育毒性作用,则需要增的评价阴道细胞学检査,可持续到确认交配成功或周的交配期结束。如果代雌性大鼠在开始给予受试物后出现些与生殖毒性无关的效应。

7、为依据将每窝子代大鼠数目进行调整,剔除多余的动物,达到每窝性别和数目的统。每窝尽可能选只雌性大鼠和只雄性大鼠,也可根据实际情况进行调整如雄雌,但每窝仔鼠数应不少于只。观察指标临床观察对于代和选定的代动物,试验期间般每天在相同时间进行般临床观察次,如出现相关的动物毒性反应发病死亡以及行为变化如中毒难产或延期分娩等症状需记录。此外,所有的代和代动物断乳后每周需进行次详细观察并记录,观察的症状应包括皮肤被毛眼睛黏膜分泌物和排泄物的产生和植物神经活动的变化如流泪毛发直立瞳孔大小不寻常的呼吸模式等,以及步态姿势的变化,对触摸的反应另外,如发现阵挛或强直动作,机械性重复行为如过度理毛重复转圈或怪异行为如自残倒退等也需要记录。体重和进食量代和代大鼠体重称量的频次和相关要求见表。在受试物理。

8、给予受试物,哺乳结束后,如无需其他处理,可处死雌鼠雄鼠给予受试物满足不少于周,可处死出生后天,每窝调整为只仔鼠食品安全国家标准扩展代生殖毒性试验征求意见稿.未交配成功,可终止合笼,并尽快对上述雌雄大鼠进行相应检查以分析原因,并在必要时进行生殖器官的病理组织学发情周期的检查。另外,也可将未成功交配的动物与证实过生育功能正常的动物重新配对,并在需要时进行生殖器官的病理组织学发情周期的检查。代大鼠不推荐进行第次交配,因为这样会失去如着床点数目等重要生殖毒性信息,建议可以通过代的继续交配来观察受试物对雌性动物产生的影响。尽管如此,如果已在代第次交配中发现受试物对生殖产生影响或存在可疑结果时,仍可通过选择将代大鼠进行第次交配加以证实。第次交配时,推荐使用未交配的雌雄性动物与已交配过的。

9、化和生物特性允许的条件下,最高剂量应使和代动物出现明显的毒性反应,但不引起动物死亡中间剂量与对照组动物观察指标和病理学检查结果是否有显著性差异及剂量反应关系,以评定受试物有无生殖发育毒性,进而确定其生殖发育毒性作用的和。同时还可根据出现统计学差异的指标如体重生理发育指标神经功能观察神经发育毒性发育免疫毒性大体解剖和病理组织学检查结果等,进步估计生殖发育毒性的作用特点。出生后天,完成相关生殖发育指标检测后,处死仔鼠表扩展代生殖毒性试验代各队列实验动物使用情况各队列中从每窝选用仔鼠数目只各剂量组中评价队列各队列的试验目的各项指标使用动物数量只是否性成熟各队列指标检测结束时代仔鼠剖检时间周龄雄雌雄雌生殖毒性是是如组发现可能的对生殖的毒性影响,组周龄行剖检给予验证或组到达日龄不超日。

10、外部可见的畸形不对母鼠进行灌胃或其他处理措施。试验方法选用周龄左右的雌雄性大鼠作为代,适应至少后开始给予受试物。各组代雌雄性大鼠采用的处理方式均应相同,每天给予受试物,期限从交配前周开始并涵盖交配期妊娠期直到代断乳的整个试验期间。代断乳后,可对代雌雄性大鼠进行大体解剖和生殖指标等检测,但需要保证代雄鼠解剖前受试物暴露给予时间应不少于周至少个完整的生精过程。各组断乳后的代雌雄仔鼠,根据检测目的随机分配至该组各评价队列中,并给予受试物直到相应队列指标完成检测。各评价队列的测定指标的检测时间使用动物的数量及检测内容等见表和。表扩展代生殖毒性试验程序试验周期亲代子代子代必要时试验开始前天环境适应和检疫观察第第周末给予受试物第第周末交配给予受试物第第周末妊娠期给予受试物第第周末哺乳期。

11、雄雌性动物进行,般在第次交配所产子代动物断乳后周进行。每窝仔鼠数量的标准化代动物在出生后第天时,采用随机的方式而不是以体重为依据将每窝子代大鼠数目进行调整,剔除多余的动物,达到每窝性别和数目的统。每窝尽可能选只雌性大鼠和只雄性大鼠,也可根据实际情况进行调整如雄雌,但每窝仔鼠数应不少于只。观察指标体重给予,体重或体重饲料和饮水相同。受试物掺入饲料或饮水给予,要将受试物与饲料或饮水充分混匀并保证该受试物配制的稳定性和均性,以不影响动物摄食营养平衡和饮水量为原则,受试物掺入饲料比例般小于把责任考核落实到人,实现考评的公平公正,促进岗位风险防范的推进。各科室分局负责人与局党组签订年度岗位风险防范管理目标责任书,进步明确责任单位责任人和风险防范工作目标,权有效制约强化管理政务公开述职。

12、摄食量明显减少等,那么可以考虑将交配前受试物给予时间延长周即交配前给予受试物周,以便雌性大鼠更好的适应受试物,同时对应的代雄性大鼠交配前受试物给予时间也做相应的延长但代雄鼠处死前受试物给予总的时间不变,仍为不少于周即可。代发情周期的评价主要通过队列的检查完成。组的雌性大鼠,首先可在确定阴道开放日期后,每天对其进行阴道涂片检查,记录第次发现典型角质化上皮细胞的时间,进而获得相应的间隔日期其后,自出生后天左右开始,还可以再次对其进行发情周期的检査和记录,检查为期周。另外,如果组大鼠需要继续进行交配以获得代,对其发情周期也需进行检查,时间从配对开始到确认交配成功即可。子代发育毒性指标检测分娩后出生后第或天应该尽快地检査每窝仔鼠,以记录仔鼠的数量性别死胎数活胎数,以及出现的外观异常。

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