1、培养基，从预变性的成年鼠坐骨神经中获得的许旺细胞。，等应用了内皮细胞培养基，发现许旺细胞在培养基中的生长速度比成纤维细胞快，避免使用抗有丝分裂剂，最终获得纯度的许旺细胞。此外，许旺细胞对培养基的碱化高度敏感，碱性条件下细胞存活率降低，优选在体积分数为中体积分数为，体积分数为孵育细胞以防止值变化，操作过程中应避免培养基过度暴露在空气中而碱化，可用含酚红的缓冲液来监控值。资料和方法文献检索以其髓鞘相关因子的表达显著增加。动物年龄动物取材年龄有胚胎期新生期成年期等。许旺细胞在生长发育的不同阶段及损伤修复过程中表达的标记不同，表明许旺细胞并不是个功能结构同质体，在不同阶段有不同的增殖能力，。新生动物神经易分离，且由。

2、性杀死成纤维细胞。新生鼠各文献的培养纯化方式见表。成年鼠使用成年动物作为许旺细胞来源更具挑战，是髓鞘分化完全，细胞较难分离是存在发育成熟的神经膜及结缔组织，阻碍酶解活性，且富含成纤维细胞是细胞处于静止期，酶解出的活性细胞产量低，增殖能力差。因此成年动物神经组织的消化和髓鞘的去除，往往需要更大程度的机械分离更高的酶浓度更长的消化时间和更多的髓鞘纯化步骤，而这些会影响细胞的增殖活性。已经证明，这些挑战可通过体内预变性的步骤来克服，神经发生华勒变性，许旺细胞进行去分化增殖和髓鞘降解，从而在后续培养中获得更高许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述神经内科论文龄大鼠的倍。这表明大鼠许旺细胞纯化方法可能不同于小鼠，如抗有丝。

3、高级，发育越成熟，许旺细胞培养难度越大。取材部位许旺细胞主要的取材部位是坐骨神经腓肠神经背根神经节及浅表神经。坐骨神经较易获取，但神经外膜完全剥离较困难，体外分离耗时较长而影响细胞活性背根神经节几乎无神经外膜，获得的许旺细胞的数量纯度及活性都优于坐骨神经。此外，有研究显示来源于感觉神经的许旺细胞的神经生长因子表达水平要优于运动神经。有学者用体外冲击波分别处理运动神经来源和感觉神经来源的许旺细胞，发现体外冲击波可诱导运动神经来源的许旺细胞增殖，但感觉神经来源的许旺细胞增殖能力较差，其髓鞘相关因子的表达显著增加。动物年龄动物取材年龄有胚胎期长培养基以防止成纤维细胞增殖。等认为可诱导成纤维细胞过度生长，而用代替作。

4、旺细胞，的自体静脉神经导管也能很好地再生神经。这说明种植在人工神经引导管上的许旺细胞可以显著促进神经再生，。但自体许旺细胞的增殖能力有限，不能在超过的管中构建条带。年，等利用人类自体神经断端培养的许旺细胞移植到大段损伤的坐骨神经处，术后个月的随访评估显示坐骨神经感觉和运动功能恢复，这代表了种治疗周围神经损伤的新策略，也是在人类周围神经损伤后使用自体许旺细胞的首次报道。总之，许旺细胞可作为组织工程化神经的种子细胞，在人体神经损伤的临床治疗中具有重要意义，其体外培养及纯化方法相结合，结合的细胞在外加磁场作用下被吸附，从而使细胞得以分离免疫选择法是利用成纤维细胞上表达抗原而许旺细胞不表达的原理，后期加入补体可选择。

5、可进行体外预变性，这避免了体内预变性的次手术步骤的繁杂及不利因素。但预变性延迟了许旺细胞的释放，且长期缺氧可能损害许旺细胞的活性和增殖能力。目前预变性时间并未统，等预变性获得高纯度许旺细胞。等等，等认为预变性周时获得的许旺细胞数量最多，活性也较好。等通过对比预变性周获得的许旺细胞数量及活性，认为预变性时间越长，许旺细胞就越活跃，成纤维细胞的增殖能力就越差。年，等首次联合酶解法及滴镀法进行原代细胞铺板，从而避免体内或体外预变性的复杂操作及不利因素，其具体步骤是在显微镜下用镊子将分离出的神经立即缓慢梳结果许旺细胞培养的影响因素细胞来源目前许旺细胞培养的宿主来源主要集中在小鼠大鼠鸡犬兔猴以及人本身。般来说，进化越。

6、于其许旺细胞髓鞘还未分化完全，具有较强的增殖能力，因此许旺细胞的分离多取材于胚胎及新生动物。成年动物的正常神经纤维中许旺细胞为终末期细胞，处于静止期，其贴壁及增殖能力很弱。但神经受损变性时许旺细胞开始去分化并大量增殖，产生各种神经生长因子以利于轴突再生，同时巨噬细胞参与许旺细胞有丝分裂因子的产生，进步加快许旺细胞的增殖。因此成年动物中许旺细胞的培养多应用体内或体外预变性方法，以使许旺细胞进入去分化增殖状态。酶种类及消化时间酶消化法包上的大规模应用免疫细胞分选法磁性细胞分选法是制备高纯度许旺细胞的好方法，磁性细胞分选法利用结合许旺细胞表面特有的抗原，在外加磁场的吸引下定向移动，从而达到分离提纯许旺细胞的目的，。

7、分裂剂不适用于具有更高增殖特性的小鼠许旺细胞的纯化，因为它会同时损害高度增殖的许旺细胞和成纤维细胞。尽管有研究显示新生小鼠来源的许旺细胞增殖能力更强，但由于其神经细小，剥离困难，去除外膜耗费时间长，且后期的抗有丝分裂法对其活性损害更大，大部分文献中采用新生大鼠作为许旺细胞培养来源。分离培养方面，新生鼠多采用酶解法，但酶的浓度酶解时间及离心步骤多样，该综述纳入文献涉及的酶种类及浓度有胰酶胰酶型胶原酶型胶原酶胶原酶胶原酶胶原酶型中性酶等，酶解时间从到不等。酶解时间过短，组织消化不完全，不利于细胞分散，消化时间过长则会损害细胞增殖活去除那些生长在许旺细胞层下的成纤维细胞，且有报道显示这些抗有丝分裂剂缺乏特异性，会。

8、准涉及许旺细胞体外培养的相关研究，以及纳入文献中的引用文献。排除标准与研究目的不相关的文献内容重复或观点陈旧性文献。文献选取对资料进行初审，并查看每篇文献后的引文，重点选择介绍鼠来源许旺细胞培养与纯化的文献，共收集到篇相关文献，篇文献符合纳入标准，排除的篇文献多数为内容陈旧或重复，少数为综述或摘要。符合纳入标准的篇文献中，涉及许旺细胞的来源取材部位及其影响因素培养方法纯化鉴定等内容，选择其中的篇作为文章文献。许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述神经内科论文要。符合纳入标准的篇文献中，涉及许旺细胞的来源取材部位及其影响因素培养方法纯化鉴定等内容，选择其中的篇作为文章文献。许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述神经内。

9、许旺细胞产生定的毒性，可阻断神经生长因子转导，影响神经的再生，因此不适合在临床上推广免疫选择法中，利用抗体与补体介导的细胞溶解可以去除成纤维细胞，但对于大规模的制备来说成本太高，从而限制了其在临床上的大规模应用免疫细胞分选法磁性细胞分选法是制备高纯度许旺细胞的好方法，磁性细胞分选法利用结合许旺细胞表面特有的抗原，在外加磁场的吸引下定向移动，从而达到分离提纯许旺细胞的目的，但需要昂贵的抗体和特殊的设备磁性离心器免疫磁珠免疫抗体包被筛选法是年实验室提出用来分离星形胶质细胞的方法，需要约的手动操作时间，该方法得到的细胞可立即使用，纯度很高，但产的步骤。近年来，成年鼠的体外培养方法有了很大进展，分离的神经即时酶解后。

10、越差。年，等首次联合酶解法及滴镀法进行原代细胞铺板，从而避免体内或体外预变性的复杂操作及不利因素，其具体步骤是在显微镜下用镊子将分离出的神经立即缓慢梳理为单纤维，再用胶原酶及中性酶将神经单纤维消化为细胞悬浮液，最后将获得的细胞悬浮液行滴镀法铺板，即以定密度逐滴滴在提前包被的培养皿中。滴镀法可将神经分离成单纤维，促进酶消化完全，以确保高度活性的单个细胞释放，在防止髓鞘碎屑附着的同时，提高了单位表面积的细胞密度，有助于贴壁细胞的存活，。成许旺细胞体外培养及纯化的系统性综述神经内科论文为关键词在和等数据库进行检索，以许旺细胞，分离，培养，纯化为关键词在万方维普等数据库进行检索，检索时间为至年。纳入与排除标准纳入标。

11、科论文。以上文献显示，低体积分数的胎牛血清可在定程度上抑制成纤维细胞增殖，进而促进许旺细胞生长，但高德坤等发现在纯血清中许旺细胞能很快从植块中爬出，而成纤维细胞的数量极少，可能的原因是纯血清中含有足量的细胞因子及特殊血清成分，这些成分可增加许旺细胞的贴壁能力，抑制成纤维细胞的长出。培养基等采用了最初用于培养少突胶质细胞的培养基，并证明该培养基即使在较低的胎牛血清体积分数下也能促进许旺细胞的增殖。等等应用了黑素细胞，多在培养基中加入刺激因子如胰岛素毛喉素调节蛋白神经调节蛋白等，纯度基本相同。除了在培养基中添加化学物质之外，些文献利用了特殊仪器或技术进步纯化，如荧光激活细胞分选法是将细胞经免疫荧光染色后放入流式。

12、但需要昂贵的抗体和特殊的设备磁性离心器免疫磁珠免疫抗体包被筛选法是年实验室提出用来分离星形胶质细胞的方法，需要约的手动操作时间，该方法得到的细胞可立即使用，纯度很高，但产量较低，也更昂贵抗体及生长因子，还需要特殊仪器流式细胞仪反复植块法体内或体外预变性差异性黏附需要相对复杂或耗时的操作，可能会导致许旺细胞丢失，无法在定的时间达到理想的细胞产量冷喷射和差速贴壁技术是培养许旺细胞的相对简单的方法，但在短时间内对许旺细胞进行频繁的操作可能会导致许旺细胞的产等等，等认为预变性周时获得的许旺细胞数量最多，活性也较好。等通过对比预变性周获得的许旺细胞数量及活性，认为预变性时间越长，许旺细胞就越活跃，成纤维细胞的增殖能力。

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