1、下式推出对于实验对于实验这个融合频率高于用同样方法测定灰盖鬼伞营养缺陷型融合子形成频率即融合频率。在四种交配型单核菌丝各自个经过原生质体融合处理再生菌中，只有个准状联合被检测到，这个例外可能是由于融合处理引起交配型突变从而形成同宗双核菌丝结果，这有待进步研究。本实验初步表明经过融合处理，交配型保存概率很高，对菌株，保存率为，对于和菌株，保存概率高达。讨论目前在日本，传统香菇育种手段例如筛选和杂交还必须得到广泛深入应用，而原生质体应用看来将成为另种实用香菇育种方法。这不仅是因为经过原生质体融合可以使种间杂交和使不产子实体亲合配对变为产生子实体配对，而且能够克服种内不亲合性障碍据报导已经通过原生质体融合使不亲合配对菌株形成菌落而且还因为，些据报道表明不。

2、交配型通过在琼脂培养基平板上双配对培养确定，由≠≠亲合配对形成双核菌丝锁状联合和由≠配对形成假锁状联合通过显微镜检查确定，由≠配对，将两个单核菌丝微量尖端菌丝混合接种到液体培养基内培养以进步确证其假锁状联合是否存在。融合处理聚乙二醇诱导原生质体融合方法同前所述，溶于氯亿钙马来酸钠缓冲液中，。子实体形成小规模术屑栽培方法基本上同前所述。以量添加到培养料内，经过培养，用毫升无菌水倾注到烧杯中，保持过夜，然后将水倾析出来，然后培养仍保持在条件下。华中农业大学本科毕业论文外文翻译结果单核菌株分离从香菇和分离列多个单核菌株。根据双配对测验时其锁状联合有无，这些分离单核菌株交配型可划分为四群。其中担孢予四种交配型比率测定为，这与预计理论值相比，其偏差并不特别显。

3、。原生质体化以及融合处理后交配型保存为了检查经过原生质体化过程以后交配型稳定性，菌株个单核菌丝再生菌落被挑拣出来，并与或,进行两两配对培养，结果可见，所有个单核菌落只能在与配对时才形成锁状联合，而从原生质体再生四种单核菌株各个菌落在与初定亲合菌株配对培养时，个配合全都产生双核菌丝。这些结果表明用本实验方法制备原生质休具有细胞壁再生能力，并保持了其交配型稳定性。经过原生质体融合处理，交配型也令人满意地保持了其原来特性。结果可见亲合菌株间原生质体融合处理后，其双核菌丝在再生菌落中出现频率实验和远远大于单核菌丝本身实验，和或亲合菌株混合培养原生质体实验和再生菌落中锁状联合出现频率。因此，以再生菌落为指标融合频率即双核菌丝在原生质体融合处理后再生子中频率可。

4、崩解酶。在用上述酶做组合华中农业大学本科毕业论文外文翻译中，以几丁质酶，和纤维素酶组合效果最好。酶反应混合液中渗透压稳定剂在几种测试渗透压稳定剂中，对于香菇原生质体释放，甘露醇和硫酸镁是优秀，并且是理想浓度。酶液值在丁二酸缓冲液中，纤维素酶和几丁质酶最适酶解反应值在左右。远低于其它担子菌原生质体制备时常常使用值。酶解反应其它条件与前文报导基本致。原生质体再生菌龄有个趋势菌龄越短，再生率越高。在材料和方法中叙述培养条件下，日龄菌丝或以前，都有较高再生率，日龄菌丝以后，其原生质体再生率明显下降。酶解时律条件下培养。天以后以培养皿中菌落数量来计算再生率，出现在不含渗透压稳定剂培养皿上，不是从原生质体再生出来菌落数量作为对照从中扣除。交配型检验每个单核菌丝。

5、上述酶做组合华中农业大学本科毕业论文外文翻译中，以几丁质酶，和纤维素酶组合效果最好。酶反应混合液中渗透压稳定剂在几种测试渗透压稳定剂中，对于香菇原生质体释放，甘露醇和硫酸镁是优秀，并且是理想浓度。酶液值在丁二酸缓冲液中，纤维素酶和几丁质酶最适酶解反应值在左右。远低于其它担子菌原生质体制备时常常使用值。酶解反应其它条件与前文报导基本致。原生质体再生菌龄有个趋势菌龄越短，再生率越高。在材料和方法中叙述培养条件下，日龄菌丝或以前，都有较高再生率，日龄菌丝以后，其原生质体再生率明显下降。酶解时养形成双核菌株需用天才能形成子实体同时有些双核菌株没有看到出菇迹象这种实验室培育子实体能够产生足够量有萌发和华中农业大学本科毕业论文外文翻译交配能力担孢子子实体照片略。

6、经过融合单单经过原生质体化过程就能产生不同类型胞质变异菌株。影响原生质体产量因子之是在短期内获得足够量均匀致幼龄菌丝。在灰盖华中农业大学本科毕业论文外文翻译鬼伞和平菇中使用尼龙网收集粉孢子和菌丝小片断接种方法非常实用和有效，而在香菇中单用尼龙网效果欠佳。本实验先用剃刀片将菌丝切碎，然后用尼龙网收集方法不仅对香菇，而且对其他难以在液体培养基内稳定快速生长而又不产孢子担子菌类都很有效有意义。其它各种测试如使用搅拌器匀浆器或玻璃球都不够理想。培养基中添加亚硫酸盐类纸浆废液组分等，或术质素前身物质如阿魏酸芥子酸等，促进担子菌菌丝生长及其子实体形成研究，前人已做了许多工作并在平菇原生质体制备和再生中得到了应用。本实验证明对香菇菌丝同样是有效，少量术质素对香菇。

7、著。而有些品系如，其担孢子只可获得个交配型菌落。本研究选用担孢子初步确定为，，和四种交配型单核菌株做进步实验。因在≠配对反应中只有极少数锁状联合出现，故而因子或因子相同交配反应有待将来使用适当标准菌株进步精确测定其交配型。原生质体释放材料培养快速生长均匀致幼龄茵丝看来是制备原生质体最合适材料。因为香菇菌丝般生长不快，固而我们在菌丝接种方法和培养基方面进行了卓有成效改进，即液体培养菌丝剃刀切碎进而经过尼龙网过滤菌丝接种方法。在平菇中，亚硫酸盐娄纸浆废液组分证明能够刺激菌丝生长进而改善了原生质体产量和再生率。为了促进生长，本实验对亚硫酸盐类纸浆废液组分作为香菇培养基类掭加剂进行了检验，期望获得与在平菇中相似促进效果。结果表明三种亚硫酸盐娄纸浆废液组分和。

8、同前所述。以量添加到培养料内，经过培养，用毫升无菌水倾注到烧杯中，保持过夜，然后将水倾析出来，然后培养仍保持在条件下。华中农业大学本科毕业论文外文翻译结果单核菌株分离从香菇和分离列多个中文字外文翻译拥有再生能力和交配型稳定性香菇原生质体高收益制备拥有再生能力和交配型稳定性香菇原生质体高收益制备原文来源，摘要香菇原生质体释放和再生种有效方法被开发，利用纤维素酶和几丁质酶酶混合物，值。小均匀菌丝体原生质体材料被迅速培养在用菌丝片段接种后木质部液体培养基中。他超过原生质体制备和超过再生被实现。通过原生质体来源单核菌株交配形成了双核体可能发展成为完整子实体在小规模木屑栽培克介质中〜天。原生质体或聚乙二醇融合处理后，交配型得到了充分完好保存。在包括原生厦体融。

9、木质索，以作为添加剂时改善香菇菌丝生长效果最佳。然而如表所示，对于原生质体释放。单独添加效果并不十分显著，而木质素效果最好。实验还发现，菌丝由于些不定物质在表面上附着而变黑。因而必须洗涤除去这些物质，在用其它亚硫酸盐纸浆废液组分作为添加剂时，也同样可见少量褐色物质在菌丝表面附着，而为最少。因此和木质素混合添加到培养基中是比较理想。在改进菌丝切割接种方法和添加特殊物质封培养基中条件下，稳定而足够量香菇菌丝在培养天时就可以很容易地得到毫克毫升培养基毫升三角瓶。对于原生质体产生最佳时期为天菌龄见表，实验酶对于多种酶组台在不同浓度和值情况下进行了检查。测试过酶有纤维素酶和，纤维素酶崩溃酶，几丁质酶葡萄糖昔醛酸酶乙酰舱壁酶半纤维素酶蜗牛酶果胶酶和崩解酶。在用。

10、前，交配型稳定性必须严格地确定。本实验结果表明原生质体化过程及聚乙二醇融合处理都不会导致交配型变化，可靠度大于，这种小于交配型可能突变觋象无疑是今后原生质体融合分析大有利条件。律条件下培养。天以后以培养皿中菌落数量来计算再生率，出现在不含渗透压稳定剂培养皿上，不是从原生质体再生出来菌落数量作为对照从中扣除。交配型检验每个单核菌丝交配型通过在琼脂培养基平板上双配对培养确定，由≠≠亲合配对形成双核菌丝锁状联合和由≠配对形成假锁状联合通过显微镜检查确定，由≠配对，将两个单核菌丝微量尖端菌丝混合接种到液体培养基内培养以进步确证其假锁状联合是否存在。融合处理聚乙二醇诱导原生质体融合方法同前所述，溶于氯亿钙马来酸钠缓冲液中，。子实体形成小规模术屑栽培方法基本上。

11、台和核酸注入诸多基础科学和应用科学研究中，原生质体应用龅潜力正在不断得到发掘，在包括多种食用菌担子萤研究领域也有这样势头。香菇是日本最重要食用菌，占商品食用菌以上，寻找种制备供育种用香菇原生质体好方法是人们强烈愿望。然而目前只有很少几篇涉及香菇原生质体文章发表，并且在这几篇文章中，香菇原生质体产量和再生率与裂褶菌鬼伞平菇相比非常低。因此，与其它菌尧衽比，例如荻益鬼伞不能自然结台种内子实体形成和在遗传上不亲合菌落形成，平菇种内子实休和种间菌落形成，以及在裂褶苗原生质体中整个注几脱氧核糖核酸成功等，原生质体融合技术在香菇这种重要食用菌育种上应用就相对进展缓慢。本文叙述了种有效原生质体形成和再生方法，这种方法制备原生质体足够用于原生质体融合实验，并对经过。

12、菌丝培养特异效果尤其令人感兴趣。像在其它真菌中样，黑褐色物质在香菇菌丝表面附着面引起菌丝纤维状形态变化，其详细机理有待进步探讨。香菇对细胞壁消化酶液和再生培养基中值严格要求是香菇不同于其它担子菌通常值另特征香菇需要值为左右。本实验未能为香菇找到个比其它担子菌常用有效组合纤维素酶加几丁质酶更为有效酶组合。然而本工作中香菇原生质体产量可达个毫升小时，尽管只有灰盖鬼伞和糙皮侧耳产量半，但远远高于以前文献报导香菇原生质体产量。因为经过原生质体化以及融合处理后许多生理变化被人们发觋，因此这些处理是否对担子菌交配型有影响曾被讨论过。尽管有报导说与营养缺陷型或药物抗性相比，交配型基因非常稳定，但本实验发现担子菌交配型突变还是可以诱发产生。因此在应用原生质体技术之。

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