1、系统转化法，以花粉卵细胞子房幼胚等以及细胞等自生的结构为媒介来进行目的基因的转化。载体系统转化法农杆菌介导法农杆菌分为两类，即根癌农杆菌含质粒和发根农杆菌含质粒。其中，根癌农杆菌的质粒被广泛研究与应用。根癌农杆菌属革兰氏阴性菌，根癌农杆菌感染植物伤口会产生冠瘿瘤，可为其生长提供所需碳源和氮源。质粒为瘤诱导质粒，根癌农杆菌侵染植物后，其质粒中段长度约的转移到植物细胞内，并插入寄主基因组中得以表达，这段被称之为转移，。利用这特性，对进行适当改造，插入外源基因，转化受体，外源基因即可整合到受体染色体的基因组中。农杆菌介导法因根癌农杆菌宿主范围较广成为应用最为广泛的转基因方法，已被成功应用到许多双子叶植物和少数单子叶植物中。该方法具有如下优点机理较为清楚，操作简单，成本低，能导入较大的片段，导入基。
2、此方法的转化率低，需要从大量的后代群体中筛选转化体，遗传稳定性较差。胚囊子房注射法胚囊子房注射法是利用显微注射器将外源溶液注入到植物子房或胚囊中，外源由于子房或胚囊所产生的压力及卵细胞的吸收作用进入受精的卵细胞万方数据花粉介导法获得转耐盐基因玉米植株及转化后代的耐盐性鉴定中，进而整合到核基因组中得到表达。该方法简单可行，尤其适合于子房大多胚珠的作物。据报道，胚囊子房注射法在大豆玉米的转化中已获得成功。但是子房经注射后容易受伤害导致败育，影响转化率和结实率，转化率较低。花粉介导法花粉介导法是以花粉为载体，将目的基因导入植物胚囊，并整合到植物基因组中的种非组培转化方法。该方法可以直接得到转基因种子，避免了组织培养及转化再生等过程，转化途径简单快捷。此外，花粉介导法还具有如下优点成本低，不需贵重。
3、和电子文档，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印缩印或扫描等手段保存汇编学位论文。同意山西大学可以用不同方式在不同媒体上发表传播论文的全部或部分内容。保密的学位论文在解密后遵守此协议。作者签名导师签名年月万方数据目录中文摘要第章文献综述玉米耐盐碱研究的紧迫性及意义植物耐盐机理的研究及其进展盐胁迫发生的机理盐胁迫对植物的影响植物耐盐机理甜菜碱及其相关合成酶基因的研究甜菜碱概述甜菜碱对盐胁迫下植物的保护作用甜菜碱醛脱氢酶研究进展逆向转运蛋白逆向转运蛋白的作用机制逆向转运蛋白基因研究进展植物遗传转化方法载体系统转化法直接遗传转化法种质系统转化法本研究的目的和意义第二章花粉介导法获得转基因玉米植株的研究材料与方法植物材料及供体质粒质粒的提取转化方法转基因玉米植株后代的卡那霉素筛选与分子检测代玉米植株。
4、化是抑制植株生长发育最重要最普遍的环境胁迫之，也成为许多地区农业发展的瓶颈，因此，培育抗旱耐盐碱的玉米新品种势在必行。近年来，已有许多育种学家采用常规育种技术选育出了些抗逆性较强高产稳产的玉米新品种，但其育种周期都比较长。玉米的抗旱耐盐性是由多个基因控制的复杂的数量遗传性状，而可利用的抗旱耐盐种质资源又匮乏，因此这领域常规育种研究进展缓慢。但随着对植物耐盐机理和分子生物学研究的不断深入，抗旱耐盐碱相关基因相继被定位和克隆，这就为玉米转抗旱耐盐基因的研究奠定了基础。在植物转基因研究中，转化方法是目的基因转化成功与否的关键因素。目前，可应用于玉米遗传转化方法有多种，如农杆菌介导法基因枪法花粉管通道法等，每种方法都各有优缺点。近年来，科学家不断寻找新的更为实用的转基因方法，希望不经过繁琐的组培过。
5、已经从多种植物中克隆得到，并被导入到盐敏感植物中，使其耐盐性得到了提高。逆向转运蛋白最先是在大麦的质膜中被发现的。年，拟南芥逆向转运蛋白基因被克隆出来，随后，水稻盐芥北滨藜玉米盐地碱蓬等多种植物的逆向转运蛋白基因也相继被克隆，。过量表达拟南芥基因能显著提高拟南芥的耐盐性，转基因拟南芥液泡内的交换率比对照高很多，在胁迫下，仍能够生长发育，比野生型植株的耐盐性明显提高。等研究发现，基因在小麦中过量表达可以增强转基因小麦的耐盐性，小麦产量也得到提高。等研究发现，盐胁迫下，转基因棉花的光合作用性能和氮同化率比对照有所提高，并且棉纤维的产量增加，品质提高。此外，逆向转运蛋白基因还被转入番茄油菜等作物中，这些作物抵御盐胁迫的能力都得到了不同程度的提高。以上结果表明，转逆向转运蛋白基因可以得到耐盐性提高。
6、器，重复性好，无物种及基因型依赖性即适用范围广，转化率高，并能够与常规育种方法有机结合。这种方法虽然起步晚，但使用规模和范围日益扩大，已在多种作物上转化成功，应用前景广阔。年，王景雪等利用此方法将几丁质酶基因导入玉米自交系中，证明了玉米花粉可以作为目的基因的转化载体。随后，王节之等利用花粉介导法获得了转几丁质酶基因的谷子梁雪莲等利用花粉介导法将抗虫基因基因导入花生杜春芳等利用花粉介导法获得油菜转基因植株。另外，该方法还被成功地应用到棉花高粱和野罂粟等作物，说明其对单子叶和双子叶植物均有普遍的应用价值。本研究的目的和意义随着玉米需求量的不断增加和种植面积的不断扩大，玉米在维护国家粮食安全，保证国民经济持续稳定健康发展中的作用极其重大。然而，玉米每年因土壤干旱和盐碱化而大量减产。土壤干旱和盐碱。
7、的拷贝数低，插入位点单，遗传稳定性好。缺点是需要经过冗长繁琐的组织培养过程，影响遗传转化效率，而且有较强的基因型依赖性。病毒介导法病毒在侵染细胞后，可将其导入宿主细胞，这些可在宿主细胞内进行自我复制和表达。因此，将目的基因插入到侵染植物细胞的病毒基因组中，可达到外源基因在受体细胞内遗传转化的目的。目前已知的植物病毒主要有三大类，分别是单链病毒双链病毒单链病毒。病毒由于操作困难不适合作克隆载体，目前应用最多的植物病毒载体是花椰菜花叶病毒。基因转化载体也存在容纳外源的能力有限，不能转化大的片段，寄主范围窄等缺点，目前这种基因转化方法还未得到广泛应用。直接遗传转化法基因枪法基因枪法是利用高压气体冲击波所产生的瞬时冲量，将携带有外源的钨万方数据第章文献综述金粉颗粒加速穿透受体细胞壁细胞膜，进入细胞。
8、核进而整合到基因组中的物理学方法。利用此项技术成功地获得了洋葱水稻大豆小麦玉米等作物的转基因植株，。该方法可转化的受体类型广泛，不仅适用于几乎所有植物材料，还适用于部分动物微生物细胞的转化。但是，这种方法也有局限性，如价格昂贵，外源整合机理尚不清楚，整合过程中易发生多拷贝多位点整合从而影响表达。电击法电击法是指借助高压电脉冲作用，在原生质体膜上形成瞬时可逆通道，促进外源进入受体细胞并整合到其基因组中，从而实现目的基因的遗传转化。电击法于年开始应用于植物的遗传转化，目前，该方法已在玉米花生水稻的转化中获得成功，。电击法的缺点是对实验设备的要求较高，容易损伤原生质体转化率较低。法即聚乙二醇，为外源基因导入植物原生质体的诱导剂，可将目的基因直接导入受体细胞。法对原生质体伤害较小，结果稳定，重复性。
9、地，本课题围绕三个方面开展了研究，研究内容及结果如下采用超声波辅助花粉介导植物转基因方法，将甜菜碱醛脱氢酶基因导入玉米自交系郑，收获代种子粒，代植株经卡那霉素抗性筛选及检测获得株阳性植株，转化率为以收获的代种子为基数。代阳性植株检出率达，代阳性植株杂交分析发现，基因已经整合到部分玉米植株的染色体基因组上，并能遗传给后代。研究还证明，超声波辅助花粉介导法是种经济高效实用的植物基因转化方法。用不同浓度的溶液对代转基因玉米植株与对照进行盐胁迫处理，结果表明转基因玉米植株表现出定的抗逆性，生长状况明显优于对照根据非转化苗对的反应以及生长状况，确定溶液为玉米幼苗耐盐性筛选的最适浓度在此临界浓度下，玉米形态指标和生理生化指标的测定结果表明，与对照相比，转逆向转运蛋白基因研究进展近年来，逆向转运蛋白基因。
10、作物新品种。植物遗传转化方法随着分子生物学和生物技术的发展，植物基因工程已成为植物育种的重要途径。基因工程能够使优良基因跨物种交流，可以在基因水平上改造植物的遗传物质，进而改造植物的遗传性状，克服了育种的盲目性，种间隔离被打破，育种的范围扩大，周期缩短，基因资源与生物品种变得丰富。植物遗传转化方法的选择是目的基因转化成功与否的关键环节。目前，研究者已发明和应用了多种不同的植物转基因方法，万方数据花粉介导法获得转耐盐基因玉米植株及转化后代的耐盐性鉴定它们根据转化机理的不同可分为三大类类是载体系统转化法，即转移的不是裸露的，而是以农杆菌的质粒或病毒的为载体，随着载体的转移导入到受体基因组中第二类为直接遗传转化法，利用物理或化学方法将裸露的直接导入植物细胞或原生质体中，如基因枪法法等第三类为种质。
11、，操作简单易行成本低转化率高而且没有基因型依赖万方数据山西大学届硕士学位论文花粉介导法获得转耐盐基因玉米植株及转化后代的耐盐性鉴定作者姓名王小丽指导教师孙毅研究员学科专业作物遗传育种研究方向种质资源创新与利用培养单位生物工程学院学习年限年月至年月二〇四年六月万方数据，万方数据承诺书承诺书本人郑重声明所呈交的学位论文，是在导师指导下独立完成的，学位论文的知识产权属于山西大学。如果今后以其他单位名义发表与在读期间学位论文相关的内容，将承担法律责任。除文中已经注明引用的文献资料外，本学位论文不包括任何其他个人或集体已经发表或撰写过的成果。作者签名年月万方数据学位论文使用授权声明学位论文使用授权声明本人完全了解山西大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留并向国家有关机关或机构送交论文的复印件。
12、好，不产生嵌合体。其局限性在于原生质体培养困难，须建立高效的再生系统，转化率非常低。法至今尚未加以推广。种质系统转化法花粉管通道法花粉管通道法是植物授粉后，花粉在柱头上萌发形成花粉管，外源经过珠心通道进入胚囊，此时的胚囊是天然的原生质体，尚不具备正常细胞壁，因而可以成功地进行遗传转化。这转化方法可以转化尚不具备正常细胞壁的卵细胞受精卵或早期胚胎细胞，其转化机理与原生质体转化相似。该方法是由我国的周光宇在世纪年代末首创，之后广泛应用于农作物的种质创新及新品种选育。目前，该方法已被成功地应用到棉花小麦玉米水稻高粱等作物上。花粉管通道法可用于任何开花植物，用于转化的目的基因可以是总或片段，也可以是裸露的或重组在质粒上的。此外，花粉管通道法还具有操作简单方便成本低育种时间短转化速度快等优点。但是，。
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