1、方法水生动物检疫实基因序列测定和同源性分析测定的基因序列与附录所列的基因序列进行比对,同源性达以上。综合判定符合以下所有特征者判定为鲟鱼海豚链球菌病临床症状与相符菌落形态和染色观察与和相符生理生化反应结果与相符基因序列测定和同源性分析结果与相符黑为阳性不变为阴性。氧化酶试验以毛细管吸取甲基对苯胺的水溶液滴在细菌的菌落上。菌落呈玫瑰红色深紫色为阳性不变色为阴性。马尿酸钠水解试验马尿酸钠水溶液混合后,培养振摇,观察颜色变化。出现紫色为阳性无颜色改变为阴性。过氧化氢酶试验按中表的规定执行。有气序及序列比对扩增产物纯化在长波紫外灯下用刀片切下含目的条带约的胶块,放入无菌离心管中称重按每琼脂糖凝胶加酚,将。
2、异戊醇,混匀,离心向收集的水溶液中加入体积的的乙酸钠和倍体积的无水乙醇,过夜或放置台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统等。临床检查临床症状病鱼摄食减少或停止摄食,体色发黑,游动缓慢,偶见间隙性的狂游或旋游。外部检查病鱼体表胸鳍基部口腔周围出血,肛门红肿,外突部分病鱼腹部膨大,体表出现溃疡,或无明显心浸粉氯化钠葡萄糖磷酸氢钠琼脂粉加热搅拌溶解于蒸馏水中,灭菌,倒平板。精氨酸双水解酶培养基蛋白胨酚红琼脂精氨酸盐蒸馏水,分装试管,灭菌。鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程。扩增产物纯化测疡,或无明显外部病变。表鲟鱼海豚链球菌的生理生化反应结果反应项目结果反应项目结果反应。
3、基因乳酸氧化酶基因。试剂和材料试剂染色液与培养基按规定执行。酶缓冲液无分子量标准参照物与核酸提取试剂盒等选用专业试剂公司提供的商品化试剂,上述未提及的见附录外部病变。食品卫生微生物学检测染色法培养基和试剂分析实验室用水规格和实验方法致病性嗜水气单胞菌检测方法水生动物检疫实验技术规范水生动物产地检疫采样技术规范鱼类细菌病检疫技术规程第部分通用技术术语和定义下列术语和定义适用于此文件。鲟鱼海泡产生为阳性无气泡产生为阴性。乙酰甲基甲醇试验按表的乙酰甲基甲醇试验的规定执行。培养基下层出现红色为阳性,不出现红色为阴性。食品卫生微生物学检测染色法培养基和试剂分析实验室用水规格和实验方法致病性嗜水气单胞菌检测。
4、。生理生化试验生理生化反应试验结果见表。川省地方标准鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程发布实施川省质量技术监督局发布目次前言范围规范性引用文件术语和定义试剂和材料设备和器械临床检查实验室样品采集细菌分离与纯化细菌鉴定结果判定综合判定附录规范性附鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程.外部病变。食品卫生微生物学检测染色法培养基和试剂分析实验室用水规格和实验方法致病性嗜水气单胞菌检测方法水生动物检疫实验技术规范水生动物产地检疫采样技术规范鱼类细菌病检疫技术规程第部分通用技术术语和定义下列术语和定义适用于此文件。鲟鱼海离心,取上层水相转入另个离心管中,加入等体积的酚﹕氯仿﹕异戊醇,混匀,离心取上清液加入等体积的氯仿﹕。
5、块,放入无菌离心管中称重按每琼脂糖凝胶加酚,将酚加入含有目的条带胶块的离心管中,漩涡震荡仪震荡,将离心管在放置,使凝胶完全冻结水浴将冻结的凝胶融化后,在漩涡震荡仪上震荡外部病变。食品卫生微生物学检测染色法培养基和试剂分析实验室用水规格和实验方法致病性嗜水气单胞菌检测方法水生动物检疫实验技术规范水生动物产地检疫采样技术规范鱼类细菌病检疫技术规程第部分通用技术术语和定义下列术语和定义适用于此文件。鲟鱼海中级水的规定。引物基因序列扩增引物保存。设备和器械主要设备与器械如下解剖盘剪刀镊子手术刀培养皿铂耳酒精灯普通光学显微镜电子天平高压灭菌锅恒温培养箱超净工鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程.脑心浸液琼脂培养基。
6、酚加入含有目的条带胶块的离心管中,漩涡震荡仪震荡,将离心管在放置,使凝胶完全冻结水浴将冻结的凝胶融化后,在漩涡震荡仪上震荡豚链球菌病指由海豚链球菌感染引起的鲟鱼发病或死亡的种细菌性疾病。脑心浸液琼脂培养基。基因乳酸氧化酶基因。试剂和材料试剂染色液与培养基按台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统等。临床检查临床症状病鱼摄食减少或停止摄食,体色发黑,游动缓慢,偶见间隙性的狂游或旋游。外部检查病鱼体表胸鳍基部口腔周围出血,肛门红肿,外突部分病鱼腹部膨大,体表出现溃疡,或无明显养箱超净工作台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统等。
7、项目结果精氨酸过氧化氢酶核糖叶苷乳糖氧化酶阿拉伯糖甘露醇马尿酸钠菊糖山梨醇注为阳性,为阴性。基因序列测定和同源性分析测定的基因序列与附录所列的基序及序列比对扩增产物纯化在长波紫外灯下用刀片切下含目的条带约的胶块,放入无菌离心管中称重按每琼脂糖凝胶加酚,将酚加入含有目的条带胶块的离心管中,漩涡震荡仪震荡,将离心管在放置,使凝胶完全冻结水浴将冻结的凝胶融化后,在漩涡震荡仪上震荡水应符合中级水的规定。引物基因序列扩增引物保存。设备和器械主要设备与器械如下解剖盘剪刀镊子手术刀培养皿铂耳酒精灯普通光学显微镜电子天平高压灭菌锅恒温培养验技术规范水生动物产地检疫采样技术规范鱼类细菌病检疫技术规程第部分通用技术。
8、﹕异戊醇,混匀,离心向收集的水溶液中加入体积的的乙酸钠和倍体积的无水乙醇,过夜或放置离心试剂配方附录资料性附录海豚链球菌基因参考序列前言本标准依据给出的规定进行编写。本标准中附录为规范性附录附录为资料性附录。本标准由川省农业厅提出并归口。本标准由川省质量技术监督局批准。本标准起草单位川农业大学。扩增产物纯化测序及序离心,弃上清,将沉淀的溶于适当体积的缓冲液中,置保存,待测。扩增产物测序与同源性分析,并与参考序列附录进行比对分析。结果判定菌落形态培养,形成表面光滑微隆起针尖大小边缘整齐的淡黄色菌落。细菌染色革兰氏染色为阳性,成双或链状排列的球状细菌序及序列比对扩增产物纯化在长波紫外灯下用刀片切下含。
9、语和定义下列术语和定义适用于此文件。鲟鱼海豚链球菌病指由海豚链球菌感染引起的鲟鱼发病或死亡的种细菌性疾病。规定执行。酶缓冲液无分子量标准参照物与核酸提取试剂盒等选用专业试剂公司提供的商品化试剂,上述未提及的见附录。鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程。叶苷水解试验将待检菌接种于叶苷培养基平板上,培养。培养基变离心,弃上清,将沉淀的溶于适当体积的缓冲液中,置保存,待测。扩增产物测序与同源性分析,并与参考序列附录进行比对分析。结果判定菌落形态培养,形成表面光滑微隆起针尖大小边缘整齐的淡黄色菌落。细菌染色革兰氏染色为阳性,成双或链状排列的球状细菌序及序列比对扩增产物纯化在长波紫外灯下用刀片切下含目的条带约的胶。
10、列术语和定义适用于此文件。鲟鱼海生化试验生理生化反应试验结果见表。鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程。表鲟鱼海豚链球菌的生理生化反应结果反应项目结果反应项目结果反应项目结果精氨酸过氧化氢酶核糖叶苷乳糖氧化酶阿拉伯糖甘露醇马尿酸钠菊糖山梨醇注为阳性,为阴性。台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统等。临床检查临床症状病鱼摄食减少或停止摄食,体色发黑,游动缓慢,偶见间隙性的狂游或旋游。外部检查病鱼体表胸鳍基部口腔周围出血,肛门红肿,外突部分病鱼腹部膨大,体表出现溃疡,或无明显离心,取上层水相转入另个离心管中,加入等体积的酚﹕氯仿﹕异戊醇,混匀,离心取上清液加入等体积的氯。
11、目的条带约的胶块,放入无菌离心管中称重按每琼脂糖凝胶加酚,将酚加入含有目的条带胶块的离心管中,漩涡震荡仪震荡,将离心管在放置,使凝胶完全冻结水浴将冻结的凝胶融化后,在漩涡震荡仪上震荡因序列进行比对,同源性达以上。综合判定符合以下所有特征者判定为鲟鱼海豚链球菌病临床症状与相符菌落形态和染色观察与和相符生理生化反应结果与相符基因序列测定和同源性分析结果与相符。附录规范性附录试剂配方脑心浸液琼脂蛋白胨脱水小牛脑浸粉脱水牛列比对扩增产物纯化在长波紫外灯下用刀片切下含目的条带约的胶块,放入无菌离心管中称重按每琼脂糖凝胶加酚,将酚加入含有目的条带胶块的离心管中,漩涡震荡仪震荡,将离心管在放置,使凝胶完全冻结。
12、临床检查临床症状病鱼摄食减少或停止摄食,体色发黑,游动缓慢,偶见间隙性的狂游或旋游。外部检查病鱼体表胸鳍基部口腔周围出血,肛门红肿,外突部分病鱼腹部膨大,体表出现溃。附录规范性附录试剂配方脑心浸液琼脂蛋白胨脱水小牛脑浸粉脱水牛心浸粉氯化钠葡萄糖磷酸氢钠琼脂粉加热搅拌溶解于蒸馏水中,灭菌,倒平板。精氨酸双水解酶培养基蛋白胨酚红琼脂精氨酸盐蒸馏水,分装试管,灭菌。水应符合鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程.外部病变。食品卫生微生物学检测染色法培养基和试剂分析实验室用水规格和实验方法致病性嗜水气单胞菌检测方法水生动物检疫实验技术规范水生动物产地检疫采样技术规范鱼类细菌病检疫技术规程第部分通用技术术语和定义下。
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DB51T 2469-2018 鲟鱼海豚链球菌病诊断技术规程
