1、检样或样品稀释液,均质报告结果取个适宜连续稀释度的样品匀液液体样品可包括原液,接种于胰酪胨大豆多黏菌素肉汤中,每稀释度接种管,每管接种如果接种量需要超过,则用双料胰酪胨大豆多黏菌素肉汤。于培养。培养用接种环从各管中分别移取环,划线接种到琼脂平板上,培养。如果菌落不典型,可继续培养再观察。确定鉴定从每个平板选取个典型菌落小于个全选,划线接种于营养琼脂平板做纯培养,培养,进行之间且有典型菌落,计数该稀释度平板上的典型菌落个连续稀释度的平板菌落数均在之间,但只有个稀释度的平板有典型菌落,应计数该稀释度平板上的典型菌落所有稀释度的平板菌落数均小于且有典型菌落,应计数最低稀释度平板上的典型菌落稀释度的平板菌落数大。
2、,其他芽胞杆菌不产生蛋白结晶体。生化分型选做项目根据对柠檬酸盐利用硝酸盐还原淀粉水解试验反应明胶液化试验,将蜡样芽胞杆菌分成不同生化型别,见表。表蜡样芽胞杆菌生化分型试验型别生化试验柠檬酸盐硝酸盐淀粉明胶注表示的菌株阳性表示的菌株阴性。结果计算典型菌落计数和确认选择有典型蜡样芽胞杆菌菌落的平云金芽胞杆菌通常运动极为活泼,而炭疽杆菌则不运动。硝酸盐肉汤成分蛋白胨硝酸钾蒸馏水制法将所述成分溶解于蒸馏水。校正至,分装每管,高压灭菌。硝酸盐还原试剂甲液将对氨基苯磺酸溶解于乙酸溶液中。乙液将甲萘胺溶解于乙酸溶液中。试验方法接种后在培养。加甲液和乙液各滴,观察结果,阳性反应立即或数分钟内显红色。如为阴性,可再加入锌。
3、。或者称取溶菌酶溶于的无菌蒸馏水后,用孔径为硝酸纤维膜过滤。使用前测试是否无菌。试验方除苏云金芽胞杆菌外,其他芽胞杆菌不产生蛋白结晶体。生化分型选做项目根据对柠檬酸盐利用硝酸盐还原淀粉水解试验反应明胶液化试验,将蜡样芽胞杆菌分成不同生化型别,见表。表蜡样芽胞杆菌生化分型试验型别生化试验柠檬酸盐硝酸盐淀粉明胶注表示的菌株阳性表示的菌株阴性。结果计算典型菌落计数和确认选择有典型蜡样芽胞杆菌菌落的平板,且同稀释度个平板所有菌落数合计在之间的平板,计数典型菌落数。如果出现现象按中公式计算,如果出现现象则按中公式计算只有个稀释度的平板菌落数在匀液,各吸取,分别接种于管胰酪胨大豆多黏菌素肉汤接种琼脂平板确定鉴定查表。
4、且均有典型菌落。从毎个平板中至少挑取个典型菌落小于个全选,划线接种于营养琼脂平板做纯培养,培养。计算公式菌落计算公式式中样品中蜡样芽胞杆菌菌落数稀释度蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数鉴定结果为蜡样芽胞杆菌的菌落数用于蜡样芽胞杆菌鉴定的菌落数稀释因子。菌落计算公式式中样品中蜡样芽胞杆菌菌落数第稀释度低稀释倍数蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数第稀释度高稀释倍数蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数第稀释度低稀释倍数鉴定结果为蜡样芽胞杆菌的菌落数第染色液再次加温染色,倾去染液用洁净自来水彻底清洗晾干后镜检。观察有无游离芽胞浅红色和染成深红色的菱形蛋白结晶体。如发现游离芽胞形成的不丰富,应再将培养物置室温后进行检查。除苏云金芽胞杆菌外。
5、样芽胞杆菌的菌落数第稀释度高稀释倍数鉴定结果为蜡样芽胞杆菌的菌落数第稀释度低稀释倍数用于蜡样芽胞杆菌鉴定的菌落数第稀释度高稀释倍数用于蜡样芽胞杆菌鉴定的菌落数计算系数如果第稀释度蜡样芽胞杆酪蛋白胨植物蛋白胨或大豆蛋白胨氯化钠无水磷酸氢钾葡萄糖琼脂粉蒸馏水制法将所述各成分于蒸馏水中加热溶解。校正至,分装每瓶。高压灭菌。水浴中冷却至,毎加入无菌脱纤维羊血,混匀后倾注平板。溶菌酶营养肉汤成分牛肉粉蛋白胨蒸馏水溶菌酶溶液制法除溶菌酶溶液外,将所述成分溶解于蒸馏水。校正至,分装每瓶。高压灭菌。每瓶加入溶菌酶溶液,混匀后分装灭菌试管,每管。溶菌酶溶液配制在灭菌的盐酸中加入溶菌酶,隔水煮沸溶解后,再用灭菌的盐酸稀释至。
6、于且有典型菌落,但下稀释度平板上没有典型菌落,应计数该稀释度平板上的典型菌落所有稀释度的平板菌落数均大于且有典型菌落,应计数最高稀释度平板上的典型菌落所有稀释度的平板菌落数均不在之间且有典型菌落,其中部分小于或大于时,应计数最接近或的稀释度平板上的典型菌落。个连续稀释度的平板菌落数均在之间且均有典型菌落。从毎个平中华人民共和国国家标准食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验发布实施前言本标准代替食品卫生微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验。本标准与相比,主要变化如下修改了标准的中文名称增加了第法蜡样芽胞杆菌计数法将选择性分离培养基培养条件由培养改为培养增加了溶菌酶试验修改了操作步骤增加了附录附录。食品安。
7、粉少许,如出现红色,表示硝酸盐未被还原,为阴性。反之,则表示硝酸盐已被还原,为阳性。酪蛋白琼脂成分酪蛋白牛肉粉无水磷酸氢钠氯化钠琼脂粉蒸馏水溴麝香草酚蓝溶液制法除溴麝香草酚蓝溶液外,将所述各成分溶于蒸馏水中加热溶解酪蛋白不会溶解。校正至.食品安全国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验.法用接种环取纯菌悬液环,接种于溶菌酶肉汤中,培养。蜡样芽胞杆菌在本培养基含溶菌酶中能生长。如出现阴性反应,应继续培养。西蒙氏柠檬酸盐培养基成分氯化钠硫酸镁磷酸氢氨磷酸氢钾柠檬酸钠琼脂粉蒸馏水溴麝香草酚蓝溶液制法除溴麝香草酚蓝溶液和琼脂外,将所述各成分溶解于蒸馏水内,校正至,再加琼脂,加热溶化。然后加入溴麝香草酚蓝溶液,混。
8、袋中,用拍击式均质器拍打。若样品为液态,吸取样品至盛有或生理盐水的无菌锥形瓶瓶内可预置适当数量的无菌玻璃珠中,振荡混匀,作为菌鉴定结果为,计算系数采用稀释因子第稀释度。结果与报告根据平板上蜡样芽胞杆菌的典型菌落数,按中公式公式计算,报告每样品中蜡样芽胞杆菌菌数,以表示如值为,则以小于乘以最低稀释倍数报告。结果于内发生气泡者为阳性,不发生气泡者为阴性。动力培养基成分胰酪胨或酪蛋白胨酵母粉葡萄糖无水磷酸氢钠琼脂粉蒸馏水制法将所述成分于蒸馏水,校正至,加热溶解。分装每管。高压灭菌,备用。试验方法用接种针挑取培养物穿刺接种于动力培养基中,培养。蜡样芽胞杆菌应沿穿刺线呈扩散生长,而蕈状芽胞杆菌常常呈绒毛状生长,形。
9、合均匀后分装试管,高压灭菌。制成斜面。试验方法挑取少量琼脂培养物接种于西蒙氏柠檬酸培养基,培养。每天观察结果,阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿色转为蓝色。明胶培养基成分蛋白胨牛肉粉明胶蒸馏水制法将所述成分混合,置流动蒸汽灭菌器内,加板中至少挑取个典型菌落小于个全选,划线接种于营养琼脂平板做纯培养,培养。计算公式菌落计算公式式中样品中蜡样芽胞杆菌菌落数稀释度蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数鉴定结果为蜡样芽胞杆菌的菌落数用于蜡样芽胞杆菌鉴定的菌落数稀释因子。菌落计算公式式中样品中蜡样芽胞杆菌菌落数第稀释度低稀释倍数蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数第稀释度高稀释倍数蜡样芽胞杆菌典型菌落的总数第稀释度低稀释倍数鉴定结果为。
10、再加琼脂,加热溶化。然后加入溴麝香草酚蓝溶液,混合均匀后分装试管,高压灭菌。制成斜面。试验方法挑取少量琼脂培养物接种于西蒙氏柠檬酸培养基,培养。每天观察结果,阳性者斜面上有菌落生长,培养基从绿明胶培养基见附录中。蜡样芽胞杆菌平板计数法第法检验程序蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序见图。图蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序图蜡样芽胞杆菌平板计数法检验程序操作步骤样品处理冷冻样品应在以下不超过或在不超过解冻,若不能及时检验,应放于保存非冷冻而易腐的样品应尽可能及时检验,若不能及时检验,应置于冰箱保存,内检验。样品制备称取样品,放入盛有或生理盐水的无菌均质杯内,用旋转刀片式均质器以均质,或放入盛有或生理盐水的无菌均质。
11、成蜂巢状扩散。动力试验也可用悬滴法检查。蜡样芽胞杆菌和苏之间且有典型菌落,计数该稀释度平板上的典型菌落个连续稀释度的平板菌落数均在之间,但只有个稀释度的平板有典型菌落,应计数该稀释度平板上的典型菌落所有稀释度的平板菌落数均小于且有典型菌落,应计数最低稀释度平板上的典型菌落稀释度的平板菌落数大于且有典型菌落,但下稀释度平板上没有典型菌落,应计数该稀释度平板上的典型菌落所有稀释度的平板菌落数均大于且有典型菌落,应计数最高稀释度平板上的典型菌落所有稀释度的平板菌落数均不在之间且有典型菌落,其中部分小于或大于时,应计数最接近或的稀释度平板上的典型菌落。个连续稀释度的平板菌落数均在之间且均有典型菌落。从毎个平法用。
12、国家标准食品微生物学检验蜡样芽胞杆菌检验范围本标准规定了食品中蜡样芽胞杆菌的检验方法。本标准第法适用于蜡样芽胞杆菌含量较高的食品中蜡样芽胞杆菌的计数第法适用于蜡样芽胞杆菌含量较低的食品样品中蜡样芽胞杆菌的计数。设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设。或者称取溶菌酶溶于的无菌蒸馏水后,用孔径为硝酸纤维膜过滤。使用前测试是否无菌。试验方法用接种环取纯菌悬液环,接种于溶菌酶肉汤中,培养。蜡样芽胞杆菌在本培养基含溶菌酶中能生长。如出现阴性反应,应继续培养。西蒙氏柠檬酸盐培养基成分氯化钠硫酸镁磷酸氢氨磷酸氢钾柠檬酸钠琼脂粉蒸馏水溴麝香草酚蓝溶液制法除溴麝香草酚蓝溶液和琼脂外,将所述各成分溶解于蒸馏水内,校正至,。
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GB 4789.14-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 蜡样芽胞杆菌检验
