1、还原在的双蒸水中溶解细胞色素，加，静置，检测的比值要求在之间，若比值不在范围内，可延长静置时间，直到比值在范围内。酶活的测定在管中加，线粒体样品，还原的细胞色素迅速倒入微量比色杯读数分钟，读斜率值。心肌细胞线粒体含量的测定染毒后，弃培养基，用预冷的洗三次细胞，加检测裂解液，用细胞刮刮取细胞，待充分裂解后，用吸头转移至管中，离心，取上清。标准曲线的制备用检。

2、胞的培养及染毒细胞的复苏从液氮中取出冻存的心肌细胞，迅速在水浴锅中融化，用无菌滴管将含有细胞的冻存液转移到完全培养基含的中，置于，浓度为恒温培养箱进行培养。细胞的传代清洗当细胞贴壁面积达时，弃旧培养基，用清洗两遍。消化加入胰酶消化，在倒置显微镜下观察，待细胞变圆，相互分开时，弃胰酶。向培养瓶中加入完全培养基，用培养基吹打培养瓶底部，使得贴壁的细胞都能均匀。

3、置，此时浓度为。将分装成每万方数据对大鼠心脏及脑线粒体损伤的分子机制管，并用锡箔纸包好，存放到。实验时，用将稀释到，稀释好后，用锡箔纸包好，放在室温。检测时，用将稀释倍，避光，冰上静置，此时即为。在荧光酶标板每孔加，提取的线粒体，空白加，在室温暗处放置，酶标仪上检测吸光值。所测得的吸光值对应的线粒体蛋白含量，即为所求结果。细胞色素氧化酶活性的测定细胞色素。

4、,,万方数据,公司培养基购自公司各种蛋白酶抑制剂购自公司其余试剂均为国产分析纯。主要仪器细胞恒温培养箱，美国洁净工作台，上海振荡培养箱，哈尔滨立式压力蒸汽灭菌锅，上海扩增仪，美国倒置显微镜，日本多功能酶标仪，美国垂直电泳槽，美国台式离心机，美国数显鼓风干燥箱，上海紫外可见分光光度计，日本超低温冰箱，美国蛋白核酸测定仪，美国近红外双色激光成像系统，美国。细。

5、管中。离心，弃上清，加重悬沉淀，即为所提取的线粒体。线粒体蛋白含量测定采用考马斯亮蓝法测线粒体蛋白含量，按表在管中加样表蛋白标准曲线制备标曲标曲标曲标曲标曲标曲标曲样品蛋白含量水染液所有样品混匀后，将样品转移到酶标板中，加样孔，加三个平行，测处吸光值，根据标曲计算样品蛋白含量。线粒体膜电位的测定全程避光操作取管体积为，浓度为的，加溶解，充分混匀后，室温静。

6、测裂解液将标准溶液稀释成和，作为标准曲线。检测工作液的配制按照∶的比例用检测试剂稀释液稀释检测试剂。含量的检测在白色酶标板中加检测工作液，室温静置,消耗本底后，向对应的孔内加入相应的样品，迅速用吸头混匀，立即用酶标仪检测值。上清蛋白含量的测定参照。所测得值对应的上清蛋白含量，即为所求结果。总的提取将对数生长期的细胞接种在的细胞培养皿，待细胞贴壁密度达时，。

7、的分散在培养基里，以∶或∶将细胞扩大培养。传代结束后，置于恒温培养箱进行培养。细胞的染毒当细胞贴壁密度达到，将细胞进行传代做后续检测。传代时，按照不同的检测指标，将细胞传到不同规格的细胞培养皿中。待细胞在培养皿中贴壁密度达时，用不同浓度，万方数据第二章对心肌细胞线粒体损伤的分子机制的染毒，收集细胞检测相关指标。实验方法及步骤细胞存活和生长检测将对数生长期。

8、液转移至的离心管，室温孵育。加氯仿，剧烈振荡混匀，室温静置，离心。转移上清液到的离心管中，加入等体积异丙醇，室温放置，离心，弃上清液。加酒精，离心，弃上清，室温干燥。沉淀用适量溶解。定量用蛋白核酸测定仪测上述样品浓度。万方数据对大鼠心脏及脑线粒体损伤的分子机制的合成具体步骤见表。表的合成试剂用量Χ所需体积加好以上的样品后，金属浴上静置，之后，放到冰上。再。

9、的细胞接种到孔板，待细胞贴壁密度达时，进行不同浓度的染毒，染毒后，每孔加浓度为的，培养。后，弃培养基，每孔加低速振荡。检测各孔吸光值。心肌细胞线粒体的提取及相关指标的测定线粒体的提取染毒后，弃培养基，用预冷的洗三次细胞，加胰酶消化，待细胞分离时，弃胰酶。加，冰上放，用细胞刮刮取细胞，将刮取的细胞用吸头转移至匀浆器中，匀浆后转移到管中。离心，转移上清至新的。

10、离心，弃收集管和废液。将吸附柱插在新的收集管中，加离心，弃废液，将吸附柱重新插在收集管中。加离心，弃废液，将吸附柱重新插在收集管中。，离心，彻底去除乙醇。弃收集管，将吸附柱插在无菌管中，向吸附柱中加入适量的预热的，室温静置，离心，收取。用蛋白核酸测定仪测上述样品浓度。总的提取的合成及荧光定量总的提取染毒后，弃培养基，加用吸头反复吹打，然后将收集的细胞裂解。

11、加下面的试剂试剂用量Χ总体系，程序为合成后存于，进行荧光定量。荧光定量引物设计表引物设计序列表万方数据中文摘要第章文献综述课题的研究背景二氧化硫的污染现状及其流行病学的研究二氧化硫作用机体后可能的毒理学机制二氧化硫对线粒体损伤的研究进展线粒体氧化磷酸化过程可能的调控途径课题的研究目的及意义课题的研究内容及实验技术路线课题的研究内容实验技术路线课题的创新之。

12、进行不同浓度染毒后收集细胞。万方数据第二章对心肌细胞线粒体损伤的分子机制染毒后，弃培养基，用预冷的清洗两次，加用细胞刮刮取细胞，用吸头转移至无菌的管中。加，水浴，中间定时摇摇，使细胞完全裂解。加的，室温孵育。加，混匀，静置。加常温无水乙醇，混匀。取吸附柱插在收集管中，将步骤所得溶液包括沉淀全部转移到吸附柱中离心，弃废液，将吸附柱插在收集管中。向吸附柱中加。

参考资料：

[1]硝酸说课PPT课件 编号42（第10页，发表于2022-06-25）

[2]硝酸说课PPT课件 编号32（第10页，发表于2022-06-25）

[3]销售与配销模块 编号39（第61页，发表于2022-06-25）

[4]销售与配销模块 编号25（第61页，发表于2022-06-25）

[5]销售与配销模块 编号35（第61页，发表于2022-06-25）

[6]销售与配销模块 编号40（第61页，发表于2022-06-25）

[7]销售与配销模块 编号36（第61页，发表于2022-06-25）

[8]销售与配销模块 编号32（第61页，发表于2022-06-25）

[9]销售与配销模块 编号29（第61页，发表于2022-06-25）

[10]销售与配销模块 编号37（第61页，发表于2022-06-25）

[11]销售与配销模块 编号49（第61页，发表于2022-06-25）

[12]销售与配销模块 编号44（第61页，发表于2022-06-25）

[13]小猫吃鱼PPT课件 编号31（第23页，发表于2022-06-25）

[14]小猫吃鱼PPT课件 编号41（第23页，发表于2022-06-25）

[15]小猫吃鱼PPT课件 编号24（第23页，发表于2022-06-25）

[16]大学生职业规划的调查问卷PPT课件（23页含内容） 编号654（第23页，发表于2022-06-25）

[17]大学生职业规划的调查问卷PPT课件（23页含内容） 编号20000（第23页，发表于2022-06-25）

[18]大学生职业规划的调查问卷PPT课件（23页含内容） 编号20000（第23页，发表于2022-06-25）

[19]大学生职业规划的调查问卷PPT课件（23页含内容） 编号20000（第23页，发表于2022-06-25）

[20]大学生职业规划的调查问卷PPT课件（23页含内容） 编号20000（第23页，发表于2022-06-25）