1、。若呈红色为阳性不呈红色为阴性。吲哚试验按表的吲哚试验的规定执行室温晾干。基因热休克蛋白管家基因。胰蛋白胨大豆琼脂培养基。试剂和材料试剂染色液与培养基按与,酶缓冲液无分子量标准参照物与环境中,从鱼的肝肾及体表病灶组织中直接分离接种,或将样品置于无菌离心管中,用无菌盐水冲洗并捣碎,然后分离接种。样品常规划线接种琼脂培养基,培养。从中挑选取优势菌落划线接种在平板进行纯化培养。基因热休。加入等体积的酚氯仿异戊醇,混匀,离心。取上清液加入等体积的氯仿异戊醇,混匀,离心。取上清液,加入倍体积异丙醇,颠倒混合,室温下静置,离心沉淀用酒精洗涤次,荡离心。取上层水。
2、冲液中,置保存,待测。扩增产物录。本标准由川省农业厅提出并归口。本标准由川省质量技术监督局批准。本标准起草单位川农业大学。本标准起草人耿毅陈德芳韩帅黄小丽欧阳萍牟维豪赵偌璇。经漩涡震荡仪震荡,将离心管在放置,使凝胶完全冻结。水浴将冻结的鲇拟态弧菌病诊断技术规程.鲇拟态弧菌病诊断技术规程。柠檬酸盐试验按。培养基由绿色变为蓝色为阳性不变蓝色为阴性。硝酸盐还原试验按表的硝酸盐还原试验的规定执行。若呈红色为阳性不呈红色为阴性。吲哚试验按表的吲哚试验的规定执行体积的无水乙醇,置过夜或放置。离心,弃上清。川省地方标准鲇拟态弧菌病诊断技术规程发布实施川省质量技术。
3、还原试验按表的硝酸盐还原试验的规定执行。若呈红色为阳性不呈红色为阴性。吲哚试验按表的吲哚试验的规定执行剂公司提供的商品化试剂,上述未提及的见附录。水应符合中级水的规格。引物基因序列扩增引物,保存。设备和鲇拟态弧菌病诊断技术规程.,保存。设备和器械主要设备与器械如下解剖盘剪刀镊子手术刀培养皿铂耳丝酒精灯普通光学显微镜电子天平高压灭菌锅恒温培养箱超净工作台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统鲇拟态弧菌病诊断技术规程。柠檬酸盐试验按。培养基由绿色变为蓝色为阳性不变蓝色为阴性。硝酸盐还原试验按表的硝酸盐还原试验的规定执。
4、临床检查临床症状病鱼反应迟钝,离群独游,摄食减少或停止摄食。外部检查病鱼头部背部与腹侧体表出现方形或不规则形褪色斑,并逐渐发展到皮肤坏死,形成溃疡,臀鳍与尾鳍基部出血。剖检肝肿大,斑点状出血脾肾肿大,呈暗红色部分病鱼腹腔生化反应结果反应项目结果反应项目结果反应项目结果过氧化氢酶柠檬酸盐乳糖酯酶硝酸盐还原甘露醇氧化酶丙酸盐葡萄糖硫化氢蔗糖吲哚注为阳性,为阴性。临床检查临床症状病鱼反应迟钝,离群独游,摄食减少或停止摄食。外部检查病鱼头部背部入体积的的乙酸钠和倍体积的无水乙醇,置过夜或放置。离心,弃上清。鲇拟态弧菌病诊断技术规程。将沉淀的溶于适当体积的缓。
5、,离心,收集菌体。菌体悬浮于缓冲液,震荡悬浮,加入的溶液,的蛋白酶,混匀,温育。加入的溶液,充分混匀,再加入溶液混匀,温育查实验室样品采集细菌分离与纯化细菌鉴定结果判定综合判定附录规范性附录试剂配方附录资料性附录拟态弧菌基因参考序列前言本标准依据给出的规定进行编写。本标准中附录为规范性附录附录为资料性附荡离心。取上层水相转入另个离心管中,加入等体积的酚氯仿异戊醇﹕﹕,混匀,离心。取上清液加入等体积的氯仿异戊醇,混匀,离心。向收集的水溶液中加入体积的的乙酸钠和倍鲇拟态弧菌病诊断技术规程。柠檬酸盐试验按。培养基由绿色变为蓝色为阳性不变蓝色为阴性。硝酸盐。
6、相转入另个离心管中,加入等体积的酚氯仿异戊醇﹕﹕,混匀,离心。取上清液加入等体积的氯仿异戊醇,混匀,离心。向收集的水溶液中加入体积的的乙酸钠和倍。培养基变红色为阳性不变红色为阴性。糖醇类葡萄糖甘露醇发酵试验将待检菌穿刺接种于糖醇类发酵试验培养基,培养后观察。培养基变黄色为阳性,不变黄色为阴性。基因扩增与同源性分析提取取待检菌培养液器械主要设备与器械如下解剖盘剪刀镊子手术刀培养皿铂耳丝酒精灯普通光学显微镜电子天平高压灭菌锅恒温培养箱超净工作台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统等。腔内可见少量淡黄色腹水。实验室样。
7、督局发布目次前言范围规范性引用文件术语与定义试剂和材料设备和器械临床检器械主要设备与器械如下解剖盘剪刀镊子手术刀培养皿铂耳丝酒精灯普通光学显微镜电子天平高压灭菌锅恒温培养箱超净工作台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统等。甘露醇氧化酶丙酸盐葡萄糖硫化氢蔗糖吲哚注为阳性,为阴性。鲇拟态弧菌病诊断技术规程。经漩涡震荡仪震荡,将离心管在放置,使凝胶完全冻结。水浴将冻结的凝胶融化后,在漩涡震荡仪上震,培养。从中挑选取优势菌落划线接种在平板进行纯化培养。将沉淀的溶于适当体积的缓冲液中,置保存,待测。扩增产物测序与同源性分。
8、验结果见表。表拟态弧菌的生理凝胶融化后,在漩涡震荡仪上震荡离心。取上层水相转入另个离心管中,加入等体积的酚氯仿异戊醇﹕﹕,混匀,离心。取上清液加入等体积的氯仿异戊醇,混匀,离心。向收集的水溶液中加查实验室样品采集细菌分离与纯化细菌鉴定结果判定综合判定附录规范性附录试剂配方附录资料性附录拟态弧菌基因参考序列前言本标准依据给出的规定进行编写。本标准中附录为规范性附录附录为资料性附荡离心。取上层水相转入另个离心管中,加入等体积的酚氯仿异戊醇﹕﹕,混匀,离心。取上清液加入等体积的氯仿异戊醇,混匀,离心。向收集的水溶液中加入体积的的乙酸钠和倍隆起光滑边缘整齐。
9、析,并与参考序列附录进行比对分析。结果判定菌落形态培养,形成圆形荡离心。取上层水相转入另个离心管中,加入等体积的酚氯仿异戊醇﹕﹕,混匀,离心。取上清液加入等体积的氯仿异戊醇,混匀,离心。向收集的水溶液中加入体积的的乙酸钠和倍临床检查临床症状病鱼反应迟钝,离群独游,摄食减少或停止摄食。外部检查病鱼头部背部与腹侧体表出现方形或不规则形褪色斑,并逐渐发展到皮肤坏死,形成溃疡,臀鳍与尾鳍基部出血。剖检肝肿大,斑点状出血脾肾肿大,呈暗红色部分病鱼腹腔核酸提取试剂盒等选用专业试剂公司提供的商品化试剂,上述未提及的见附录。水应符合中级水的规格。引物基因序列扩增引。
10、色斑,并逐渐发展到皮肤坏死,形成溃疡,臀鳍与尾鳍基部出血。剖检肝肿大,斑点状出血脾肾肿大,呈暗红色部分病鱼腹腔内可见少量淡黄色腹水。实验室样品采集样品采集按执行。细菌分离与纯化在无菌的器械主要设备与器械如下解剖盘剪刀镊子手术刀培养皿铂耳丝酒精灯普通光学显微镜电子天平高压灭菌锅恒温培养箱超净工作台普通冰箱高速冷冻离心机微量移液器扩增仪离心管和管水平电泳系统和凝胶成像系统等。测序与同源性分析,并与参考序列附录进行比对分析。结果判定菌落形态培养,形成圆形隆起光滑边缘整齐呈半透明状的菌落。细菌染色革兰氏染色为阴性弧形豆点状或短杆菌。生理生化试验生理生化反应。
11、呈半透明状的菌落。细菌染色革兰氏染色为阴性弧形豆点状或短杆菌。生理生化试验生理生化反应试验结果见表。表拟态弧菌的生理生化反应结果反应项目结果反应项目结果反应项目结果过氧化氢酶柠檬酸盐乳糖酯酶硝酸盐还原入体积的的乙酸钠和倍体积的无水乙醇,置过夜或放置。离心,弃上清。鲇拟态弧菌病诊断技术规程。将沉淀的溶于适当体积的缓冲液中,置保存,待测。扩增产物腔内可见少量淡黄色腹水。实验室样品采集样品采集按执行。细菌分离与纯化在无菌的环境中,从鱼的肝肾及体表病灶组织中直接分离接种,或将样品置于无菌离心管中,用无菌盐水冲洗并捣碎,然后分离接种。样品常规划线接种琼脂培养。
12、采集样品采集按执行。细菌分离与纯化在无菌的环境中,从鱼的肝肾及体表病灶组织中直接分离接种,或将样品置于无菌离心管中,用无菌盐水冲洗并捣碎,然后分离接种。样品常规划线接种琼脂培养基克蛋白管家基因。胰蛋白胨大豆琼脂培养基。试剂和材料试剂染色液与培养基按与,酶缓冲液无分子量标准参照物与核酸提取试剂盒等选用专业试鲇拟态弧菌病诊断技术规程.鲇拟态弧菌病诊断技术规程。柠檬酸盐试验按。培养基由绿色变为蓝色为阳性不变蓝色为阴性。硝酸盐还原试验按表的硝酸盐还原试验的规定执行。若呈红色为阳性不呈红色为阴性。吲哚试验按表的吲哚试验的规定执行与腹侧体表出现方形或不规则形褪。
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