1、室温冷却，清洗。蒸馏水清洗，浸泡。在切片组织上滴加正常山羊血清，室温封闭。吸水纸吸掉封闭液，再在每张切片组织上滴加足够量的兔抗大鼠抗体比例为∶并放入湿盒，孵育过夜。阴性对照用液代替抗。取出湿盒，室温复温，浸洗切片次，每次。吸水纸吸干切片组织上多余液体后滴加稀释好的荧光抗比例为∶，湿盒中孵育。清洗次，每次学处理采用统计学软件进行分析，计量资料以表示，组间比较采用单因素方差分析，采用进行进步比较。为差异有统计学意义。结果抑制剂对内毒素血症大鼠血清浓度的影响组和组大鼠血清浓度无明显差异。与对照组组比较，处理大鼠后，组和组血清浓度显著升高组与组组比较，。处理内毒素血症大鼠后，血清浓度显著降低组与组比较，。如图。探。

2、间接促进κ磷酸化和激活κ炎症通路。缺血心肌细胞中，大量堆积的琥珀酸可通过自分泌血症大鼠心肌组织内的炎性反应。脓毒血症期间，血管功能异常和免疫细胞有氧代谢显著升高导致其余器官组织氧供明显降低，能量获取方式从氧化磷酸化转变为糖酵解，同时伴有明显的线粒体功能障碍和代谢中间产物的堆积。在缺血心肌组织中，被反向激活和酮戊酸脱氢酶催化导致缺血心肌中琥珀酸堆积，。由于琥珀酸有促进炎性反应的作用，本研究检测了内毒素血症大鼠心肌组织内琥珀酸含量和其关键调节酶的表达变化和其关系。结果发现，内毒素血症大鼠心肌组织内琥珀酸含量和的表达均明显升高，而检测各组心肌组织κ和总κ表达所获得的免疫条带检测各组心肌组织内表达所获得的免疫条带。

3、提供了新的靶点。漆波，张翕珠，江飞，张鹤，蔡佳君，李国智琥珀酸脱氢内琥珀酸含量和的表达均明显升高，而抑制剂能有效减少内毒素血症大鼠心肌组织内的琥珀酸含量，提示该模型下也被反向激活，进而促进琥珀酸的堆积。的反向激活与等的研究结果相似，而与等的结果相反，其可能原因在于本研究涉及的细胞与前者致，而与后者不同，。已有多个研究证实，琥珀酸作为信号传递因子通过促进的表达而导致细胞内炎性细胞因子的产生，其可能机制包括抑制脯氨酰羟化酶活性和诱导活性氧的产生等。本研究中，可抑制琥珀酸堆积而降低探讨琥珀酸和对心肌炎性损伤的影响实验医学梯度乙醇浸泡复水，双蒸水清洗次，每次。将切片放于盛有枸橼酸盐缓冲液的溶液中，臵于微波炉内加热。

4、达量无明显差异。与组比较，组和组心肌组织内κ磷酸化程度和表达量显著升高，提示处理明显激活大鼠心肌组织的炎性反应。与组比较，组心肌组织内κ和的表达量显著降低，提示有效抑制内毒素血症大鼠心肌组织炎性反应通路，如图。琥珀酸是羧酸循环中关键的中探讨琥珀酸和对心肌炎性损伤的影响实验医学参与介导的炎性通路，其机制可能和以上研究阐述的机制相关。本研究还发现，可抑制琥珀酸堆积而降低κ的磷酸化水平。κ是转录因子κ的抑制性结合蛋白κ的个亚型，κ磷酸化后被水解性降解，使κ游离并转位至细胞核中而激活等基因的转录。因此，本研究结果提示琥珀酸堆积促进κ磷酸化，进而通过κ介导的合成，其具体机制可能是琥珀酸通过产生活性氧和炎性细胞因子而。

5、低温离心离心半径后取上清液待测。采用琥珀酸检测试剂盒并按照说明书操作流程检测心肌组织内琥珀酸含量。免疫荧光法检测心肌组织内的表达实验完成后，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠，摘取心脏，取心室肌组织部分清洗，多聚甲醛固定，脱水，石蜡包埋，切片，烤片。此后甲苯脱蜡，不同梯度乙。缺血心肌细胞中，大量堆积的琥珀酸可通过自分泌的方式，分泌至心肌细胞外并激活心肌细胞膜上的琥珀酸受体使后者活化而加重心肌损伤。由于琥珀酸通路与炎性反应密切相关，该模型中琥珀酸是否可通过激活而调节和κ有待进步研究。总之，本研究发现琥珀酸在内毒素血症大鼠心肌组织中的含量变化和炎性损伤的关系，以及活性抑制剂在其中的保护作用，为研究和治疗脓毒血症心肌损。

6、琥珀酸和对心肌炎性损伤的影响实验医学。心肌组织素血症大鼠心肌组织内炎性因子的产生，图。图对内毒素血症大鼠心肌组织内和含量的影响生理盐水处理组抑制剂生理盐水处理组处理组抑制剂处理组，与组比较，与组比较讨论本研究大鼠内毒素血症模型参照文献和等介绍的方法建立。的给予剂量参考等的研究。本研究发现首先，内毒素血症大鼠心肌组织内琥珀酸和含量均升高其次，抑制剂能显著抑制内毒素血症大鼠心肌组织内的琥珀酸含量升高最后，抑醇浸泡复水，双蒸水清洗次，每次。将切片放于盛有枸橼酸盐缓冲液的溶液中，臵于微波炉内加热。室温冷却，清洗。蒸馏水清洗，浸泡。在切片组织上滴加正常山羊血清，室温封闭。吸水纸吸掉封闭液，再在每张切片组织上滴加足够。

7、组心肌组织κ磷酸化相对表达量对内毒素血症大鼠心肌组织内和含量的影响组和组大鼠心肌组织内和水平无明显差异。与组比较，组和组心肌组织内和水平显著升高。与组比较，组心肌组织内和水平显著降低。该结果说明有效抑制内毒素血症大鼠心肌组织内炎性因子的产生，图。图滴加避光孵育。清洗次，每次。用含有抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在激光扫描共聚焦显微镜下观察采集图像。法检测心肌组织内κ和磷酸化κ的表达量心肌组织检测标本制备同前。蛋白浓度采用蛋白浓度检测试剂盒测定。取蛋白样本，上样于电泳凝胶，并在下电泳。将凝胶中的目标蛋白电转于膜上。图各组大鼠心肌组织琥珀酸脱氢酶表达量的比较生理盐水处理组抑制剂生理盐水处理组处理组抑制剂处理琥。

8、积。在缺血心肌组织中，被反向激活和酮戊酸脱氢酶催化导致缺血心肌中琥珀酸堆积，。由于琥珀酸有促进炎性反应的作用，本研究检测了内毒素血症大鼠心肌组织内琥珀酸含量和其关键调节酶的表达变化和其关系。结果发现，内毒素血症大鼠心肌组探讨琥珀酸和对心肌炎性损伤的影响实验医学处理组，与组比较，与组比较检测各组心肌组织κ和总κ表达所获得的免疫条带检测各组心肌组织内表达所获得的免疫条带各组心肌组织κ磷酸化相对表达量对内毒素血症大鼠心肌组织内和含量的影响组和组大鼠心肌组织内和水平无明显差异。与组比较，组和组心肌组织内和水平显著升高。与组比较，组心肌组织内和水平显著降低。该结果说明有效抑制内国公司。对内毒素血症大鼠心肌组织内κ磷。

9、酸含量的检测实验结束后，麻醉大鼠后立即打开胸腔，取出心脏并于液中清洗次后，将心脏放入液氮速冻左右完成。液氮条件下将心肌组织研磨成粉，取组织粉末加入琥珀酸检测缓冲液在条件下迅速匀浆，低温离心离心半径后取上清液待测。采用琥珀酸检测试剂盒并按照说明书操作流程检测心肌组织内琥珀酸含量。免疫荧光法检测心肌组织内的表达实验完成后，腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠，摘取心脏，取心室肌组织部分清洗，多聚甲醛固定，脱水，石蜡包埋，切片，烤片。此后甲苯脱蜡，不量的检测实验结束后，麻醉大鼠后立即打开胸腔，取出心脏并于液中清洗次后，将心脏放入液氮速冻左右完成。液氮条件下将心肌组织研磨成粉，取组织粉末加入琥珀酸检测缓冲液在条件下迅速匀浆。

10、提示该模型中琥珀酸参与介导的炎性通路，其机制可能和以上研究阐述的机制相关。本研究还发现，可抑制琥珀酸堆积而降低κ的磷酸化水平。κ是转录因子κ的抑制性结合蛋白κ的个亚型，κ磷酸化后被水解性降解，使κ游离并转位至细胞核中而激活等基因的转录。因此，本研究结果提示琥珀酸堆积促进κ磷酸化，进而通过κ介导的合成，其具体机制可能是琥珀酸通过产生活性氧和炎性细胞因子而间接促进κ磷酸化和激活κ炎症通剂可能通过调节κ和通路而降低内毒素血症大鼠心肌组织内的炎性反应。脓毒血症期间，血管功能异常和免疫细胞有氧代谢显著升高导致其余器官组织氧供明显降低，能量获取方式从氧化磷酸化转变为糖酵解，同时伴有明显的线粒体功能障碍和代谢中间产物的。

11、化程度和表达量的影响组和组大鼠心肌组织内κ磷酸化程度和表达量无明显差异。与组比较，组和组心肌组织内κ磷酸化程度和表达量显著升高，提示处理明显激活大鼠心肌组织的炎性反应。与组比较，组心肌组织内κ和的表达量显著降低，提示有效抑制内毒素血症大鼠心肌组织炎性反应通路，如图。图各组大鼠心肌组织琥珀酸脱氢酶表达量的比较生理盐水处理组抑制剂生理盐水处理组间产物。生理条件下，线粒体内琥珀酸脱氢酶将琥珀酸氧化为延胡索酸，同时释放电子参与氧化磷酸化。内毒素可使巨噬细胞内琥珀酸含量增加，堆积的琥珀酸可作为信号传导因子促进巨噬细胞炎性因子释放并且抑制抗炎细胞因子的合成。另外，缺血心肌细胞内也存在琥珀酸大量堆积，是心肌缺血再灌注损。

12、的兔抗大鼠抗体比例为∶并放入湿盒，孵育过夜。阴性对照用液代替抗。取出湿盒，室温复温，浸洗切片次，每次。吸水纸吸干切片组织上多余液体后滴加稀释好的荧光抗比例为∶，湿盒中孵育。清洗次，每次。统抑制剂对内毒素血症大鼠心肌组织内琥珀酸代谢和炎性损伤的影响第军医大学学报，。探讨琥珀酸和对心肌炎性损伤的影响实验医学。滴加避光孵育。清洗次，每次。用含有抗荧光淬灭剂的封片液封片，然后在激光扫描共聚焦显微镜下观察采集图像。法检测心肌组织内κ和磷酸化κ的表达量心肌组织检测标本制备同前。蛋白浓度采用蛋白浓度检测试剂盒测定。取蛋白样本，上样于电泳凝胶，并在下电泳。将凝胶中的目标蛋白电转于膜上。心肌组织内琥珀酸的表达和的合成，从反。

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