1、离纯化并鉴定其粗毒液的主要成分，对主要成分进行基因克隆，并尝试进行原核表达，以获得南海石头鱼毒素的基本知识，加深对石头鱼毒素的理解和认识，并为石头鱼抗毒素的制备及石头鱼毒素的防治奠定基础。海洋毒素，是海洋动物经上亿年的自然筛选与进化发展而成的用于攻击猎物及防御自身的武器。毒素与其结构类似物相比，必然具有最强效果和最佳构效关系，且具有用量小，毒性强，击致命的特点。因此，开展石头鱼毒素的研究，不仅有助于深入了解刺毒鱼毒素的毒理及其他成分的药理作用，还为我国刺毒鱼致伤治疗提供手段。万方数据石头鱼粗毒液的毒性测定分离纯化及的分离引言石头鱼生活在印度洋和太平洋的热带及亚热带浅水区域。其毒性装置包括根背鳍棘根腹鳍棘根臀鳍棘以及附着在背鳍棘上并分布于背鳍棘两侧的毒囊。当石头鱼受到攻击时，毒棘会刺入猎。

2、在时，对小鼠完全没有中毒症状及致死性成功克隆了和亚基的序列，与冲绳海域玫瑰毒鲉的和的序列均具有高达的序列同源性以为表达载体，感受态细胞为宿主，对和亚基进行原核表达，成功表达了，产率为亚基未能成功表达。结论万方数据玫瑰毒鲉粗毒液的成分除外，还有至少类蛋白质第类是与有较高匹配度的蛋白质，推测为分子量较小的毒素或的降解片段第类推测为石头鱼的结构蛋白及代谢酶第类为多种分子量约为的蛋白质分子量约为的蛋白质对小鼠未表现出毒性，表明它们并非毒性成分首次探索到亚基的表达工艺。关键词石头鱼毒素毒性原核表达万方数据有时需要注射抗生素以防二次感染。对于低血压症状，可使用肾上腺素升高血压，若同时伴有心动过缓，可使用阿托品。图石头鱼毒液引起的肿胀目前，仅有种刺毒鱼抗毒素上市，为澳大利亚联邦血清学实验室，开发的石。

3、其中融合蛋白的结合能力强于融合蛋白，的结合能力强于。国内的石头鱼研究目前，国内对石头鱼的研究，仅仅停留于病例报告及有害生物防治的层面，尚未进行石头鱼毒素的毒性测定分离纯化基因克隆及蛋白质表达研究。本课题的研究目的内容和意义本课题组从年起，在国内率先开展石头鱼的毒素研究。该研究从本人进入实验室后开始进行。石头鱼对海洋渔业人员海洋旅游等构成较大威胁。从年到年，在澳大利亚，有例患者使用石头鱼抗毒素进行治疗美国每年约有例鲉鱼刺伤在新加坡，曾经在年的时间内有例石头鱼中毒病例在中国，从年，中山大学附属第三医院急诊外科共收治石头鱼毒鳍刺伤例。目前仅有种来自澳大利亚的石头鱼抗毒素可用于石头鱼中毒治疗且价格昂贵澳元瓶，约合人民币元，国内的医院并没有配备该药。本课题通过测定南海石头鱼粗毒液的毒性，。

4、为玫瑰毒鲉，主要分布于南海海域。目的获得南海石头鱼毒素的毒性状况组分的蛋白质序列及蛋白质表达方法，为其抗毒素的制备及石头鱼刺伤的防治奠定基础。方法提取南海石头鱼的粗毒液，利用及鉴定粗毒液的主要成分，再用小量分离粗毒液的主要成分，然后用蛋白质分离系统对粗毒液进行大量分离，并测定粗毒液及其分离组分的分离石头鱼毒囊组织，提取石头鱼毒囊，运用技术，获得毒素的全序列，连入中，进行原核表达。结果在粗毒液的电泳条带中，发现了个已知蛋白质和个未知蛋白质。其中个已知蛋白质被鉴定为已报道的亚基个未知蛋白质中，有个蛋白质与已报道的条带有最高匹配度另有个分别与微管蛋白，磷酸甘油醛脱氢酶匹配度最高对粗毒液进行分离后，发现了种尚未报道的分子量约为的小分子蛋白质粗毒液对小鼠的为，对小鼠的为，分子量约为的小分子蛋白质。

5、溶血活性，还可以阻断在细胞膜诱导的电流。当该多抗被洗脱后，诱导的电流会逐渐恢复。另外，将细胞与该多抗孵育，再将多抗洗脱后，细胞仍然会被诱导产生电流。这表明，该多抗与的结合是个可逆过程，而与细胞膜的结合则是个不可逆过程。石头鱼毒素的表达目前，仅有关于表达的研究。等构建了毒囊的文库，在设计的引物的端加入凝血酶切割位点，端加入识别位点，利用技术从噬菌体克隆中扩增出和万方数据的序列。用和对载体进行双酶切，分别将和的序列连入，转化至大肠杆菌，进行表达和分离纯化。用凝血酶对表达的亚基进行切割并做端测序，得知的和均以和起始，为凝血酶的切割位点后面的序列与序列相符，与已测得的端序列相符。使用的多克隆抗体进行，发现无论是或与麦芽糖结合蛋白的融合蛋白，还是切割后的或，均可与多抗结合。

6、物体内，毒液从毒囊里挤压出来，沿着背鳍棘上的沟槽或沟管注入猎物体内，引起系列中毒症状，。中国南海有玫瑰毒鲉分布。等对肯尼亚位于非洲东海岸中部海域的玫瑰毒鲉进行了研究，测得其粗毒液对小鼠的为，并利用阴离子交换层析，羟基磷灰石柱层析和葡聚糖凝胶层析，从粗毒液中分离到毒素，分子量为，由两个分子量为和两个分子量为亚基组成。对小鼠的约为。等对日本冲绳海域的玫瑰毒鲉进行了研究，利用凝胶过滤层析从其粗毒液中分离到毒素，分子量为，由和两个亚基组成，分子量分别为和。对小鼠的约为。等从粗毒液中分离出种透明质酸酶，分子量为，能特异性降解透明质酸，不能降解硫酸软骨素和肝素。为了探究南海石头鱼粗毒液的毒性及主要成分，我们购买了捕捞于南海的玫瑰毒鲉并抽取粗毒液，作和，并用及蛋白质分离系统分离其粗毒液中的主。

7、鱼抗毒素，。该抗毒素是以粗毒液作为抗原免疫马，从马血清中分离出免疫球蛋白，再用胃蛋白酶消化得到的片段。对于严重的中毒症状，可采用石头鱼抗血清进行治疗。石头鱼毒素不仅可以中和的毒性，还可以中和玫瑰毒鲉，狮子鱼中的触角蓑鲉魔鬼蓑鲉和龙须蓑鲉斑马纹多臂蓑鲉，日本鬼鲉，云纹裸皮鲉和普氏鲉的溶血活性与致死性。但石头鱼抗毒素可能会带来严重的不良反应，如过敏性休克或血清疾病。石头鱼毒素的抗体制备目前已经制备了的单克隆抗体和多克隆抗体，的抗血清和的多克隆抗体。尚无的抗体。等将与弗氏佐剂初次免疫使用完全佐剂，以后采用不完全万方数据佐剂。下同做成乳剂免疫雌性小鼠，用蛋白亲和膜圆盘色谱法进行分离，制备了株单克隆抗体，亲和力常数范围为到。这些抗体均为，半含有κ轻链，另半含有轻链。其中有株单抗不仅可以对抗的致死。

8、究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印缩印或其它手段保留学位论文学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名导师签名年月日年月日万方数据万方数据目录中文摘要英文摘要主要英文缩略词前言石头鱼简介石头鱼的生物学特征石头鱼粗毒液的主要成分石头鱼毒素的生化特征石头鱼毒素的药理作用石头鱼中毒治疗石。

9、，又可以抑制其溶血活性株单抗可以对抗的致死性，不能抑制或只能部分抑制其溶血活性另外株单抗既不能对抗的致死性，也不能抑制其溶血活性。具有种活性的株单抗的有相似的抗原表位特异性，而其他株单抗的抗原特异性则与之不同。结果表明，致死性和溶血性所对应的结构域并不完全相同。等将与弗氏佐剂做成乳剂免疫兔子，制备了多抗。等将溶解于，并与弗氏佐剂做成乳剂免疫雌性豚鼠，抽取血清并从中分离到抗体作为的抗血清。该抗血清与有极高的反应性，却不能中和的致死性与溶血活性，但仍然可以作为抗用于实验。该抗血清不仅可以与结合，还可以与触角蓑鲉魔鬼蓑鲉，龙须蓑鲉，日本鬼鲉和红鳍赤鲉的毒素结合，表明这些毒素与有较高的同源性。等将与佐剂做成油包水乳剂，免疫雌性新西兰白兔，抽取血清并从中分离到抗体作为的多抗。该多抗不仅可以抑制的。

10、石头鱼毒素的分离纯化毒性测定分子克隆及原核表达研究研究生姓名张龙霄指导教师姓名职称戴秋云研究员郑兴教授学科专业名称药理学研究方向分子药理与药物蛋白质组学年月万方数据万方数据南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读硕博硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研。

11、鱼毒素的抗体制备石头鱼毒素的表达国内的石头鱼研究本课题的研究目的内容和意义石头鱼毒素的分离纯化和毒性测定引言实验材料实验步骤实验结果讨论小结万方数据的基因克隆与原核表达引言实验材料实验步骤实验结果讨论小结结论参考文献文献综述附录致谢万方数据摘要石头鱼生活在印度洋和太平洋的热带及亚热带浅水区域，是世界上毒性最强的鱼。其毒液可以引起系列中毒症状，如剧痛水肿肌肉麻痹低血压等。目前已在石头鱼粗毒液中分离出毒素。中国海域的石头鱼为玫瑰毒鲉，主要分布于南海海域。目的获得南海石头鱼毒素的毒性状况组分的蛋白质序列及蛋白质表达方法，为其抗毒素的制备及石头鱼刺伤的防治奠定基础。方法提取南海石头鱼的粗毒液，利用及鉴定粗毒液的主要成分，再用小量分离粗毒液的主要成分，然后用蛋白质分离系统对粗毒液进行大量分离，并。

12、蛋白质并对主要成分及粗毒液作测定。实验材料实验动物玫瑰毒鲉捕捞自中国南海昆明小鼠，雄性，体重为左右，购自军事医学科学院动物中心。主要试剂万方数据除表中所列试剂外，其余化学试剂均为国产分析纯试剂。表主要试剂试剂名称生产厂家罗氏诊断公司牛血清白蛋白Ⅴ罗氏诊断公司甲叉双丙烯酰胺公司公司甘氨酸公司溴酚蓝公司公司丙烯酰胺上海生工公司公司过硫酸铵公司公司考马斯亮蓝公司公司固体可配制中杉金桥公司凝胶公司常用试剂的配制溶液取片，加水溶解，定容至。保存于。丙烯酰胺存储液丙烯酰胺，甲叉双丙烯酰胺，加水溶解，定容至。将溶液过滤后保存于棕色瓶中，保存于。分离胶缓冲液，加水溶解，调至，定容至。浓缩胶缓冲液，加水溶解，调至，定容至。过硫酸铵过硫酸铵，加水溶解，定容至。分装后，保万方数据分类号密级编号硕士学位论文南。

参考资料：

[1]绘本故事：你很快就会长高（优） 编号18060（第13页，发表于2022-06-24）

[2]绘本故事：你很快就会长高（优） 编号216（第13页，发表于2022-06-24）

[3]绘本故事：你很快就会长高（优） 编号18060（第13页，发表于2022-06-24）

[4]绘本故事：你很快就会长高（优） 编号18060（第13页，发表于2022-06-24）

[5]绘本故事：你很快就会长高（优） 编号18060（第13页，发表于2022-06-24）

[6]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18030（第21页，发表于2022-06-24）

[7]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[8]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[9]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[10]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[11]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[12]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[13]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[14]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[15]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[16]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[17]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[18]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18078（第26页，发表于2022-06-24）

[19]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[20]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）