1、时间视情况而定。用镊子将胶片放置在显影液中显影，再放置定影液中定形，而后进行流水冲洗，用自来水冲去残留的定影液后，室温下晾干。凝胶图像分析将胶片进行扫描或拍照，用凝胶图象处理系统分析目标带的分子量和净光密度值。四统计学方法采用统计学软件进行结果处理，对实验计量资料数据采用表示，实验组与对照组比较采用单因素方差分析，有统计学意义。结果动物体重改变及移植瘤体积变化如图所示，与空白对照组对比，组移植瘤体积差异无统计学意义。组组组及组与组和组相比移植瘤体积均有明显缩小，而各用药组之间及用药组与组之间的处死前体重无统计学意义从各用药组的抑瘤率表及绘制移植瘤的生长曲线中图，可看出单用丝裂霉素对移植瘤生长无明。

2、干燥，加入无酶去离子水，用移液器吸打多次，室温放置分钟使溶解。提取的在超低温冰箱中保存。取出各组总少量，用紫外分光光度仪测定各组总的浓度及纯度，均大于或等于。合成逆转录合成采用扩增仪。按照第链合成试剂盒的步骤进行。组织总反应量取加入，用无酶去离子水定容至，轻轻混匀。反应混合物在水浴分钟。冰浴后加入，轻轻混匀，水浴分钟，加入使终体积。反应混合物在水浴分钟，水浴分钟结束反应。分装，保存或即进行扩增以上加样均在冰上进行。扩增应用试剂盒，反应体系如下灭菌蒸馏水目的基因根据中的相应序列，以软件设计引物。由上海捷瑞生物工程技术服务有限公司合成。目的基因和内参基因的引物序列和反应条件见表表。反应结束后取各组目。

3、膜，先后用乙醇浸泡分钟去离子水浸泡分钟转移缓冲液浸泡分钟以上待用。按顺序在转移夹中放置海绵三层滤纸膜胶，三层滤纸海绵预先都用转移缓冲液浸泡，每层之间保证没有气泡。将转移夹按膜在正极胶在负极的位置放入转膜槽，接冷却水，转移小时。封闭用脱脂牛奶，冷室中摇动封闭过夜。洗膜与孵化抗体用洗膜，每次，共三次。加抗入封有膜的塑料袋中，赶尽所有气泡，室温下摇动孵育用洗膜，每次，共三次再加入二抗入封有膜的新的塑料袋中，赶尽所有气泡，室温下摇动孵育用洗膜，每次，共三次。压片与显色用镊子将膜放置在双层塑料中贴胶面向上，沿中线滴几滴液，轻轻晃动使液铺满整张膜，盖好上层塑料袋。将剪好的胶片放置在上层塑料袋上方进行压片，压。

4、素的耐药性罗格列酮在体内部分逆转细胞祼鼠移植瘤多药耐药的重要机制可能是通过下调基因及其编码的蛋白和基因在裸鼠移植瘤组织中的表达。关键词，罗格列酮，多药耐药，细胞株，管管管枪头等过夜。弃水，高压蒸汽灭菌组织匀浆器组织剪管管管枪头等，烤干备用。组织总提取取储存于液氮中的各移植瘤组织约置于管中，加入的溶液。组织匀浆器中进行充分匀浆至无组织碎片，移入离心管中，室温静置，使组织充分裂解。离心，弃沉淀。每管加入体积氯仿，振荡混匀分钟，室温放置。离心。吸取上层水相至另离心管中，加入等体积异丙醇，充分混匀，室温放置。离心，离心后在管底可见点状沉淀。弃上清，留取沉淀，加现配的的乙醇，洗涤沉淀离心。弃乙醇上清，自然。

5、灌胶。灌胶时，待胶面升到绿带中间线高度，胶上再加层水。胶凝后，再等使胶充分凝固后倒去胶上层水并用吸水纸将水吸干。配的浓缩胶，加入后立即摇匀即可灌胶，将剩余空间灌满浓缩胶然后将梳子插入浓缩胶中。用水冲洗下浓缩胶，将其放入电泳槽中。测完蛋白含量后，计算含蛋白的溶液体积，取出上样样品至的离心管中，加入上样缓冲液至终浓度为。上样前将样品于沸水中煮使蛋白变性。加足够的电泳液后开始准备上样，用微量移液器贴壁吸取样品，将加样器针头插至加样孔中加入样品。电泳电泳时间，电压为电泳至溴酚兰刚跑出凝胶底端，终止电泳，进行转膜。转膜按蛋白分子量标准位置切下目的条带所在的胶，浸泡于转移缓冲液中。取与胶同样大小的硝酸纤维素。

6、显抑制作用，单用罗格列酮或丝裂霉素联合罗格列酮或环孢霉素用药后对移植瘤生长有抑制作用，与组比较，与组比较。组别瘤体体积抑瘤率组组组组，组组，表各组裸鼠的体重变化组别建模前裸鼠体重处死前裸鼠体重组组组组组组注，组与各用药组比较，各用药组组间比较。图各组裸鼠移植瘤组组组组组组分类号密级编号硕士学位论文罗格列酮逆转人胃癌裸鼠移植瘤对丝裂霉素耐药的作用及机制研究生姓名廖文秋指导教师姓名职称张琍教授学科专业名称消化内科研究方向胃癌防治年月南华大学学位论文原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已。

7、基因产物及内参基因产物的值。表各基因引物序列及扩增产物长度基因引物序列注即上游引物即下游引物表各基因扩增反应条件基因预变性反应循环条件变性退火延伸循环数绘制融解曲线实时荧光定量仪，。数据分析及结果判定确认扩增曲线和融解曲线，目的基因的量，目的基因管家基因实验组目的基因管家基因对照组。表示的是实验组目的基因的表达相对于对照组的变化倍数。应用软件分析实验数据。检测蛋白表达从组织中提取蛋白质从液氮罐内冻存管中取少许待测样本，约，在电子秤上称重，置于研钵中。取适当量的裂解液，在使用前数分钟内加入，使的最终浓度。按照每组织加入裂解液的比例加入裂解液。用研磨棒将组织块研磨呈匀浆，裂解必要时置入冰箱过夜。充分。

8、癌细胞收集后接种于裸鼠背部皮下，观察移植后裸鼠的成瘤情况，筛选成瘤的裸鼠。术后两周将成瘤的裸鼠随机分为六组空白对照组生理盐水组丝裂霉素组组罗格列酮组组罗格列酮丝裂霉素组罗格列酮丝裂霉素组环孢霉素丝裂霉素组。每组只裸鼠待移植瘤长至大小约时开始分别给每组裸鼠灌胃给药均为每两日次，其中丝裂霉素腹腔注射给药，生理盐水罗格列酮环孢霉素灌胃。每隔日分别测量每只裸鼠移植瘤的大小并给裸鼠称重，并据此绘制移植瘤的生长曲线第天后处死荷瘤裸鼠，检测各组移植瘤的大小重量，计算抑瘤率染色观察移植瘤的组织形态检测表达免疫组化和检测蛋白的表达。结果裸鼠体重处死前各组裸鼠体重差别无统计学意义用药后对移植瘤体积的影响组组移植瘤瘤。

9、裂解后，用移液器将裂解液移至离心管中，然后在下离心，取上清分装于离心管中并置于保存。注裂解蛋白的所有步骤都需在冰上进行。法测定蛋白质的浓度取蛋白标准配制液加入到管蛋白标准中，充分溶解后配制成的蛋白标准溶液，保存。取适量蛋白标准，稀释至终浓度为稀释后的蛋白标准保存。根据样品数量，按体积试剂加体积试剂配制适量工作液。将标准品按微升加到孔板的标准品孔中，加标准品稀释液补足至微升。加适当体积样品到孔板的样品孔中，加标准品稀释液到微升。各孔加入微升工作液，放置分钟。波长测定，根据标准曲线计算出蛋白浓度。电泳清洗玻璃板。灌胶上样。玻璃板对齐后放入夹中卡紧，然后垂直卡在架子上准备灌胶。配分离胶，加入后立即摇匀。

10、校将论文加入中国优秀博硕士学位论文全文数据库，并按中国优秀博硕士学位论文全文数据库出版章程规定享受相关权益。同意授权中国科学信息技术研究所将本学位论文收录到中国学位论文全文数据库，并通过网络向社会公众提供信息服务。对于涉密的学位论文，解密后适用该授权。作者签名导师签名年月日年月日目录中文摘要英文摘要正文前言材料与方法结果讨论结论参考文献主要缩略英文索引综述读研究生期间发表的论文致谢罗格列酮逆转人胃癌祼鼠移植瘤对丝裂霉素耐药的作用及机制硕士研究生廖文秋导师张琍中文摘要目的观察激动剂罗格列酮能否逆转人胃癌细胞裸鼠移植瘤对丝裂霉素的耐药作用，初步探讨在体内逆转人胃癌细胞多药耐药相关的可能机制。方法将人。

11、体积差别无统计学意义，组组组组与组组比较移植瘤瘤体积差别有统计学意义，以组组移植瘤瘤体积最小用药后对移植瘤组织表达的影响组组表达最强，组组组组与组和组比较差异有统计学意义以组最高，组组组与组比较差异无统计学意义，组组依次减少差别有统计学意义，组组组组与组组比较差别有统计学意义以组最高，组组组与组比较差异无统计学意义，组组依次减少差别有统计学意义。结论罗格列酮可抑制人胃癌细胞祼鼠移植瘤瘤体生长罗格列酮可部分逆转人胃癌细胞祼鼠移植瘤对丝裂霉素的耐药性罗格列酮在体内部分逆转细胞祼鼠移植瘤多药耐药的重要机制可能是通过下调基因及其编码的蛋白和基因在裸鼠移植瘤组织中的表达。关键词，罗格列酮，多药耐药，细胞株。

12、发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得南华大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。作者签名年月日南华大学学位论文版权使用授权书本学位论文是本人在南华大学攻读博硕士学位期间在导师指导下完成的学位论文。本论文的研究成果归南华大学所有，本论文的研究内容不得以其它单位的名义发表。本人同意南华大学有关保留使用学位论文的规定，即学校有权保留学位论文，允许学位论文被查阅和借阅学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印缩印或其它手段保留学位论文学校可根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。同意学。

参考资料：

[1]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[2]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[3]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[4]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[5]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[6]绘本故事：讨厌的肥猫（优） 编号18060（第21页，发表于2022-06-24）

[7]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[8]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[9]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18078（第26页，发表于2022-06-24）

[10]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[11]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[12]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号250（第26页，发表于2022-06-24）

[13]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[14]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号176（第26页，发表于2022-06-24）

[15]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[16]绘本故事：我变成一只喷火龙了（优） 编号18060（第26页，发表于2022-06-24）

[17]绘本故事：我的幸运一天（优） 编号18060（第19页，发表于2022-06-24）

[18]绘本故事：我的幸运一天（优） 编号18060（第19页，发表于2022-06-24）

[19]绘本故事：我的幸运一天（优） 编号18060（第19页，发表于2022-06-24）

[20]绘本故事：我的幸运一天（优） 编号18060（第19页，发表于2022-06-24）