1、测沉默后的和蛋白的表达情况如图显示，下调细胞内表达后，下游基因，无论在水平还是在蛋白水平均升高，提示其受基因的表达抑制得到解除。另外的蛋白水平也显示出略有升高。万方数据三峡大学硕士学位论文图检测沉默后和的表达水平。检测沉默后和的蛋白表达在放射前后变化情况免疫荧光焦点检测成功感染细胞小时后接受线照射，分别于照射后和小时收集细胞，采用免疫荧光法检测细胞核内焦点的表达情况。实验结果如图所示，组细胞在射线照射后，细胞内焦点数目呈现最多，随着时间的推移，到时细胞内焦点数目接近放疗前水平，提示细胞具有较强的损伤修复能力而较对照组而言，组细胞在细胞内的焦点数目显著增多，且随着时间的推移，到时并没有回到基线水平放疗前水平，细胞内仍清晰可见较多。

2、感或存在放疗抵抗，进而导致治疗效果未从根本上得到改善。因此研究放射抗拒机制，积极寻找放射增敏途径是提高治愈率的有效途径。近年来，肿瘤干细胞，是形成不同分化程度肿瘤细胞和肿瘤增长复发及转移根源的观点逐渐被人们接受。且越来越多的研究显示肿瘤干细胞与肿瘤放射敏感性有密切相关。肿瘤细胞的放射敏感性与肿瘤染核在载玻片上滴上小滴抗荧光淬灭剂封片，具体操作为用镊子夹取玻片边缘，滤纸吸干玻片下缘液体，将玻片贴有细胞侧扣于载玻片上。荧光显微镜观察扫描及分析。焦点定量方法为以细胞内超过个焦点数目或焦点清晰可见做为阳性细胞，计数个细胞，计算阳性率，实验重复次。流式检测转染后细胞周期变化情况用不含的胰酶分别消化及三组细胞，计数约孔细胞接种于孔板，细胞。

3、染空载体病毒组表示正常目的细胞感染慢病毒细胞组编号后的序号表示针对目的基因不同的靶点号，如等检测基因沉默后的沉默效率。克隆形成实验检测放射敏感性万方数据三峡大学硕士学位论文为了解基因对细胞放射敏感性的影响，我们采用克隆形成实验检测沉默细胞内表达后，细胞的存活分数并拟合存活曲线。拟合曲线的结果如图所示表明相对于和组而言，基因沉默联合放疗，可使干扰组细胞的存活曲线平均致死剂量减小值减小，见表，从而直接增加细胞对放射线的敏感性其次组细胞存活曲线的肩区变窄值降低，反应其应对放射线所致的亚致死性损伤修复能力减弱放射增敏比为，提示下调细胞内表达，对细胞而言，具有显著增敏的效果。图和组放射剂量存活曲线表放射剂量存活曲线各参数数值放射参数和检。

4、干细胞牛血清白蛋白互补脱氧核糖核酸二甲基亚砜实时聚合酶链反应流式细胞仪绿色荧光蛋白磷酸甘油醛脱氢酶信使核糖核酸聚丙烯酰胺凝胶电泳磷酸盐缓冲液培养基万方数据三峡大学硕士学位论文引言鼻咽癌，是我国南方及东南亚各国常见肿瘤，居头颈部恶性肿瘤之首位，严重威胁人民健康和生命。由于其解剖位置的特殊性以及对放射线敏感的特性，使放射治疗成为其首选的治疗手段。随着三维适形放射治疗调强放射治疗立体定向放射治疗等精确放射治疗的广泛开展和普及，使正常鼻咽组织受到射线照射的剂量大大减少，使得放射治疗在鼻咽癌的治疗中的作用和地位日益突出。据统计表明，ⅠⅡ期患者年生存率分别达，但晚期ⅢⅣ鼻咽癌的年生存率仍徘徊在左右，其原因主要是因为晚期鼻咽癌患者对放疗不敏。

5、者生存期减低显著相关，提示过表达可能介导放射抗拒。为了证实这可能性，细胞经转染病毒载体，转染空载体病毒作为阴性对照组，。利用荧光倒置显微镜观察绿色荧光蛋白表达情况，以监测病毒转染效率。经观察，小时转染病毒表现出较高的转染效率，大部分细胞表达绿色荧光蛋白，和组转染效率都达到了。检测发现，转染在转录水平相对表达量降低达到，在蛋白水平几乎检测不到。和检测的转染效率万方数据三峡大学硕士学位论文图转染前后细胞荧光图片，镜下观蔡绿色荧光蛋白的表达数量，测得转染效率为表示细胞组，表示转染空载体组，表示沉默组表示放大倍数和分别表示明视野和荧光视野检测结果显示细胞中，相对于，组表达的敲减都达到以上，均为有效靶点。表示正常目的细胞表示正常目的细胞。

6、的红色荧光焦点，提示沉默细胞内表达能明显削弱其应对电离辐射所造成的损伤修复能力。万方数据三峡大学硕士学位论文图免疫荧光法检测射线照射前后不同时间点细胞核内焦点的表达情况，蓝色荧光表示细胞核，绿色荧光表示经过转染带有绿色荧光蛋白的细胞红色荧光表示焦点。射线照射后不同时间点，三组细胞细胞核内焦点数量统计学分析，结果为次实验的均值表示，差别有统计学意义。流式检测转染后细胞周期成功感染细胞小时后给予线照射，收集未做放射处理和照射后和细胞及三组细胞，利用流式细胞术检测三组细胞的细胞周期分布情况。结果显示图，沉默基因后，细胞周期再分布，表现为期明显延长，期细胞比例由增加至照射后，组期细胞所占的比例显著高于对照组，三组细胞中期细胞所占的比例。

7、贴壁后给予或不给予线照射，于照射后和收集细胞，各组设置个复孔。胰酶不含消化细胞，吹打，制成单细胞悬液后，滴管吸入离心管中离心，去上清加入适量洗涤沉淀，吹打混匀离心加入预冷的乙醇溶液，吹打混匀沉淀，冰箱内固定过夜次日，离心，弃上清加入适量的洗涤沉淀次离心重悬细胞后，转移至流式管中，加入约，水浴消化冰上操作，向上述流式管内再加入染液约，避光染色准备样品流式检测，软件分析细胞周期。流式检测转染后细胞凋亡变化情况按照双染试剂盒说明书操作。具体步骤如下用不含的胰酶分别消化及三组细胞，计数约孔细胞接种于孔板，待细胞贴壁后给予或不给予线照射，于照射后收集细胞，细胞收集应注意使用不含的胰酶，且消化时间不宜过长，否则易引起假阳性，各组设置个复孔。

8、研究成果，或实验数据为基础所形成的研究论文及成果，无论是以何种形式刊发学术论文进行成果鉴定或申报奖励，均以三峡大学为第作者单位或完成单位，并事先征得导师或学校相关部门的同意。我愿承担因违背上述承诺而引起的切法津和经济后果。学位论文作者签名日期万方数据三峡大学硕士学位论文内容摘要目的在前期研究鼻咽癌细胞具有类肿瘤干细胞特性，且在其中呈高表达的基础上，研究基因沉默后对人鼻咽癌细胞株细胞放射敏感性的影响，探索其对潜在的影响机制。方法常规培养细胞，并用流式细胞仪定量并分选细胞构建慢病毒转染采用克隆形成试验检测沉默后放射增敏比和检测基因沉默效率和下游调控基因相关蛋白和表达情况免疫荧光术检测放射造成双链损伤焦点情况流式细胞术检测放疗后凋亡。

9、离心，弃上清洗涤细胞，转速离心分钟细胞结合液重悬沉淀，吹打混匀后加入Ⅴ万方数据三峡大学硕士学位论文染液，室温下避光反应样品流式检测统计学分析使用软件统计数据，利用单因素方差分析和检验分析实验结果，比较各组间有无统计学差异，以为标准，认为具有统计学意义。万方数据三峡大学硕士学位论文结果检测细胞中的表达及分选纯度利用流式细胞术检测人鼻咽癌细胞株细胞中的表达。如图所示，细胞中的表达所占的比例大约为，这与我们之前的研究结论相致。利用流式分选技术，分选的细胞用于后续试验。每次分选出来的细胞，利用流式细胞术检测其分选纯度，细胞纯度达。图检测分选前后细胞中表达量慢病毒构建转染及细胞感染先前在其他系统的研究提示高表达与放射伴或不伴化疗治疗的患。

10、艳学科专业免疫学指导教师许新华教授二四年五月万方数据三峡大学硕士学位论文，万方数据三峡大学硕士学位论文三峡大学学位论文原创性声明本人郑重声明所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果，除文中已经注明引用的内容外，本论文不含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体均已在文中以明确方式标明，本人完全意识到本声明的法律后果由本人承担。学位论文作者签名日期三峡大学研究生知识产权承诺书本人承认我作为三峡大学硕士研究生在校学习期间，在导师指导下，依据研究工作所作学位论文的知识产权全部权归三峡大学所有。本人承诺我有义务维护三峡大学的知识产权，凡是以我本人学位论文内的全部或部。

11、和周期分布情况。结果细胞中的表达所占的比例大约为倒置荧光显微镜下可见慢病毒载体成功转入克隆形成试验检测沉默后放射增敏比下游调控基因和在和蛋白水平表达增加组在接受放射处理后，细胞内焦点数目在放射后及均显著高于对照组，且表现出损伤修复受损放射后早期凋亡比例增加，沉默延长期且显著提高放射诱导的阻滞。结论在细胞的放射抗拒中发挥保护性作用。沉默基因能显著提高鼻咽癌类肿瘤干细胞放射的敏感性。可作为提高鼻咽癌类肿瘤干细胞放射敏感性的有效靶点。关键词基因鼻咽癌类肿瘤干细胞放射敏感性万方数据三峡大学硕士学位论文万方数据三峡大学硕士学位论文目录英文缩略词表引言材料与方法结果讨论小结参考文献综述后记万方数据三峡大学硕士学位论文英文缩略词表英文缩写英。

12、别为，差别具有显著统计学意义时，组期细胞所占的比例仍较对照组处于较高水平，放射损伤后细胞周期期阻滞时间延长。万方数据三峡大学硕士学位论文图转染后行线照射，收集未做放射处理和照射后和细胞，流式细胞术检测细胞周期分布情况。凋亡成功感染细胞小时后给予线照射，收集未做放射处理和照射后的及三组细胞，利用流式细胞术检测三组细胞的细胞凋亡情况。实验结果如图，放疗前，下调细胞内的的表达，组细胞早期凋亡增加，由增加至右上象限所示接受线照射后组细胞晚期凋亡增加，由增加至右下象限所示较对照组而言，组细胞总的凋亡率早期凋亡晚期凋亡显著增加，统计学结果意义显著。万方数据分类号密级公开硕士学位论文沉默基因对鼻咽癌类肿瘤干细胞放射敏感性的影响学位申请人刘小。

参考资料：

[1]直面挫折勇于面对挫折唱响生命赞歌动态PPT课件 编号18060（第16页，发表于2022-06-24）

[2]直面挫折勇于面对挫折唱响生命赞歌动态PPT课件 编号18060（第16页，发表于2022-06-24）

[3]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT讲稿 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[4]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[5]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT讲稿 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[6]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[7]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[8]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[9]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT讲稿 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[10]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT讲稿 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[11]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT讲稿 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[12]《弘扬传承伟大抗疫精神争做新时代好党员》党课PPT讲稿 编号18060（第20页，发表于2022-06-24）

[13]《利用有效时间提高复习效率》主题班会PPT讲稿 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[14]《利用有效时间提高复习效率》主题班会PPT讲稿 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[15]《利用有效时间提高复习效率》主题班会PPT讲稿 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

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[17]《利用有效时间提高复习效率》主题班会PPT讲稿 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[18]《利用有效时间提高复习效率》主题班会PPT讲稿 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[19]《利用有效时间提高复习效率》主题班会PPT讲稿 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）

[20]《利用有效时间提高复习效率》主题班会PPT讲稿 编号18060（第22页，发表于2022-06-24）