1、设计引物为了获得准确目的基因序列的的表达，我们用作为内参基因。从上获却的蛋白质编码序列，利用引物设计软件设计和的引物序列见表。表扩增基因的引物序列和产物大小基因序列长度上游下游上游下游上游下游反应体系先扩增内参基因，反应体系如下上游引物下游引物反应条件预变性变性，退火，延伸，进行个循环，最后总延伸。根据定好的模板量，对进行扩增。反应体系如下万方数据上游引物下游引物仪进行反应，反应条件预变性变性，退火，延伸，进行个循环，最后。

2、的表达，结果显示与正常组比较，手术组和空转组磷酸化万方数据表达明显增高，而转染组明显降低用蛋白杂交结果进步证实的同样的趋势。提示磷酸化万方数据表达明显增高，而转染组明显降低用蛋白杂交结果进步证实的同样的趋势。提，说明血管损伤可以使表达下调转染组的表达明显增高，说明结果显示与正常组比较，手术组和空转染组的表达明显降低，用检测蛋白的表达,与正常组比较，手术组和空转染组的蛋白的表达明显降低组比手术组明显降低，说明可抑制血管吻合口。

3、。将吸附柱放回收集管中，加入静置,离心倒掉废液。重复上步次。将吸附柱放回收集管中离心。吸附柱放入干净的的管中，将吸附柱中加入静置离心。得到的总溶液，放入冰箱备用。加入溴酚蓝混匀，用琼脂糖电泳检测的纯度，当溴酚蓝跑至凝胶的时，用凝胶成像分析仪分析电泳结果，可见三条带，纯度较好可进行下步。取稀释无水中，测比值，计算含量。逆转录为取的总加入的和的引物放入仪中后立即放入冰中。加入以下试剂万方数据仪按以下程序反应，得到的,保存。半定。

4、调节的活化有关。可抑制家兔颈总动脉吻合口术后内膜的增殖。抑制吻合口狭窄的作用可能与示可以抑制血管吻合口狭窄其机制可能与抑制活化有关。明显降低，提示手术使的表达下调，而手术组的表达明显升高，转染组表达明显降低免疫组化测定表达，结果显示与正常组比较，手术组和空转染组的表达明显降低，用检测蛋白的表达,与正常组比较，手术组和空转染组的蛋白的表达明显降低，说明血管损伤可以使表达下调转染组的表达明显增高，说明转染成功免疫组化检测磷酸化。

5、出现棕黄色，蒸馏水冲洗干净。苏木素复染，返蓝。梯度酒精脱水，二甲苯中透明。中性树胶封片。阴性对照用代替抗。检测血管中和基因的转录总的提取将冻存的血管组织约剪碎放入研磨碗中，加入，倒入液氮研磨至浆状。万方数据将其吸入至新管中，加入的氯仿，漩涡震荡仪震荡，冰浴离心。离心后样本分为三层，上层为水相，中层和下层为有机相。吸上层水相至干净的管中并计算体积，加入倍体积的无水乙醇，混匀。将溶液转至吸附柱中，静置离心，将收集管中的废液倒掉。

6、延伸。半定量分析取的产物在的琼脂糖凝胶中电泳，恒压电泳后，凝胶成像系统拍照观察以为内参，用灰度扫描软件计算的比值。检测血管组织中和的表达蛋白质的提取取冻存的血管组织，用预冷的洗涤，吸净。加入组织裂解液倒入液氮，研磨组织至浆状，吸入管中。冰上裂解，离心。吸上清液，即为细胞总蛋白，保存。蛋白聚丙烯凝胶电泳取玻璃板和梳子洗净，干燥。配置的分离胶见表。表分离胶配置方法配方容积蒸馏水，过硫酸铵万方数据将配好的分离胶小心加入玻璃板间隙。

7、窄。测定和基因转录，结果显示与正常组比较,手术组和空转染组的明显降低，提示手术使的表达下调，而手术组的表达明显升高，转染组表达明显降低免疫组化测定表达，结果显示与正常组比较，手术组和空转染组的表达明显降低，用检测蛋白的表达,与正常组比较，手术组和空转染组的蛋白的表达明显降低，说明血管损伤可以使表达下调转染组的表达明显增高，说明转染成功免疫组化检测磷酸化的表达，结果显示与正常组比较，手术组和空转组磷酸化万方数据表达明显增高，。

8、件进行结果分析。统计学处理采用软件对各组数据进行统计学分析。两组均数的比较用单因素的方差分析或检验，以判断统计学有无显著性差异。万方数据实验结果对血管吻合口狭窄的影响在兔血管吻合术后天，取标本进行组织切片染色，观察血管吻合口情况，见图，可见手术组和空转染组血管内膜增殖，管壁明显增厚，血管腔变窄而转染组血管未见明显的管壁增厚和管腔狭窄。用专业图像处理软件软件测量血管内膜与中膜的面积，计算两者的比值图。从图中可以看出，与正常组。

9、转染组明显降低用蛋白杂交结果进步证实的同样的趋势。提示可以抑制血管吻合口狭窄其机制可能与抑制活化有关。结论可抑制家兔颈总动脉吻合口术后内膜的增殖。抑制吻合口狭窄的作用可能与调节的活化有关。关键词小凹蛋白细胞外信号调节激酶血管狭窄血管平滑肌万方数据，不洗。滴加抗鼠抗兔单克隆抗体用稀释浓度，放入湿盒中过夜。洗次。滴加生物素标记的二抗山羊抗小鼠，室温孵育分钟。冲洗次。滴加试剂滴,室温孵育。洗次。显色液显色，显微镜下观察，直至细胞。

10、适的膜并先放入甲醛中侵泡，同时剪张同样大小的滤纸并用转移缓冲液预湿，在转膜仪不锈钢板上从正极到负极依次铺层滤纸膜胶层滤纸，放入转膜仪中室温转移小时。将转好的膜放入的脱脂奶粉中封闭小时。加入比例稀释的抗，用缓冲液洗膜，次。加入辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔和山羊抗鼠，放在恒温箱中。用洗膜，次。化学发光显影按比例混合液和液，均匀涂抹在膜上，作用，用滤纸洗去膜表面多余的液体，随后用在暗盒中进行压片曝光及显影定影。万方数据用灰度扫描。

11、较，手术组和空转染组的比值明显增高，而与手术组比较，转染组内膜中膜面积比值明显降低。图各组血管染色正常组手术组空转组转染组万方数据检测血管中和基因的表达得到产物后凝胶电泳，通过凝胶成像仪成像拍照。我们可以清楚的看到和扩增条带见图。根据图中可以看到位于位置，位于位置。结果显示转染组和正常组可以看到基因的表达，而手术组及空转染组未见明显条带。统计分析结果图表明与正常组比较，手术组和空转染组的表达降低与手术组比较，转染组明显升高。

12、，在胶的上端加入蒸馏水将空气排出。约小时左右胶凝固后，倾倒出上层的蒸馏水，用滤纸小心将水吸干。配置积层胶，见表表积层胶配置方法配方容积蒸馏水，过硫酸铵将积层胶加在分离胶的上端，并将清洗干净的梳子插入胶中。总蛋白与上样缓冲液混匀，沸水中使蛋白变性。积层胶凝固后，将积层胶放入电泳槽中，槽中加入电泳缓冲液，缓慢拔出梳子。按次序加入蛋白和定量的蛋白。电泳开始电压用，当跑入分离胶后电压调至，电泳直至分离胶底部。转膜按胶的大小，剪去合。

参考资料：

[1]老年人健康管理知识普及演讲PPT 编号45（第36页，发表于2022-06-25）

[2]老年人健康管理知识普及演讲PPT 编号37（第36页，发表于2022-06-25）

[3]老年人健康管理知识普及演讲PPT 编号58（第36页，发表于2022-06-25）

[4]老年人健康管理知识普及演讲PPT 编号42（第36页，发表于2022-06-25）

[5]老年人健康管理知识普及演讲PPT 编号41（第36页，发表于2022-06-25）

[6]老年人健康管理知识普及演讲PPT 编号55（第36页，发表于2022-06-25）

[7]老年人健康管理知识普及演讲PPT 编号31（第36页，发表于2022-06-25）

[8]铁三角团队模式运行培训PP 编号38（第21页，发表于2022-06-25）

[9]铁三角团队模式运行培训PP 编号32（第21页，发表于2022-06-25）

[10]铁三角团队模式运行培训PP 编号34（第21页，发表于2022-06-25）

[11]铁三角团队模式运行培训PP 编号33（第21页，发表于2022-06-25）

[12]铁三角团队模式运行培训PP 编号32（第21页，发表于2022-06-25）

[13]铁三角团队模式运行培训PP 编号32（第21页，发表于2022-06-25）

[14]铁三角团队模式运行培训PP 编号49（第21页，发表于2022-06-25）

[15]铁三角团队模式运行培训PP 编号38（第21页，发表于2022-06-25）

[16]铁三角团队模式运行培训PP 编号61（第21页，发表于2022-06-25）

[17]铁三角团队模式运行培训PP 编号27（第21页，发表于2022-06-25）

[18]微党课拒绝舌尖上的浪费杜绝餐饮浪费《（制止餐饮浪费行为作出重要指示）解读》PPT 编号43（第25页，发表于2022-06-25）

[19]微党课拒绝舌尖上的浪费杜绝餐饮浪费《（制止餐饮浪费行为作出重要指示）解读》PPT 编号35（第25页，发表于2022-06-25）

[20]微党课拒绝舌尖上的浪费杜绝餐饮浪费《（制止餐饮浪费行为作出重要指示）解读》PPT 编号35（第25页，发表于2022-06-25）