1、和变化值。微生物在生物浸出中数量动态监测过程中采用实时定量聚合酶链反应技术。所有这些中，发现复杂混合物同时包含自养属嗜铁钩端螺旋菌和。和和.效果是最好。嗜热嗜酸温和细菌生理之间互惠明显，涉及铁硫转变和有机复合转移，被认为是在促进黄铜矿溶解中发挥了关键作用。实时检测方法是可靠分析中度嗜热微生物种群动态生物浸出系统，以及分析结果是与这些菌株生理特征至。关键词中度嗜热嗜酸，生物浸出，黄铜矿，种群动态，实时。引言用嗜酸性微生物从矿石中溶出金属部分和随后恢复金属形式解决方案被称为生物浸出等人。年。黄铜矿是最丰富，含有耐火材料硫化铜，因此生物浸出铜矿是关键工业目标。而大多数研究主要集中在嗜温微生物应用，包括氧化亚铁硫杆菌，端螺旋菌杆菌和嗜酸硫杆菌，在成长最佳，而在此温度下黄铜矿生物浸出范围低溶解率沃特林。近年来，些研究戈贝尔和诺里斯等。年罗林斯等。年霍克斯等。年曾建议，端螺旋菌属菌。，和在生物浸出系统操作在间，对矿石溶解发挥。

2、瓶含培养基在，初始值.，转速摇床中培养。培养基不添加硫酸亚铁是用于黄铜矿生物浸出试验。矿石浓度为。浸出实验每组三样。在纯培养基中，通过离心和无菌水冲洗两次，用硫酸调整值到.，获得.,.,.,.等。然后，细胞悬浮在培养基并且没有硫酸亚铁溶液中，作为接种细菌。根据设计，数目相等细胞约细胞毫升，每株，按顺序接种于摇瓶。定期分析样品中铜，总溶解铁，亚铁，值，以及菌落结构。生物浸出实验，使用以下个菌落及属嗜铁钩端螺旋菌和嗜热号和嗜热楼楼.瓦特酵母提取物湖嗜铁钩端螺旋菌和.湖嗜铁钩端螺旋菌，嗜热号和菌。非生物控制也进行了设计。浸出实验持续了天。理化分析溶液中铜，铁总浓度测定用原子吸收光谱法。亚铁铁浓度确定，用钾滴定重铬酸钾。浸出系统值用计进行测定。浸出残渣过滤，洗涤，并用冷冻干燥干燥，最后由射线衍射分析。培养瓶中细胞密度测定用细胞计数仪。基因组提取使用基因组纯化试剂盒生物科技，有限公司，北京，中国提取摇瓶种植中纯培养微生物。。

3、养基中含有营养物质基础,.,.,.,.酵母膏，.。生物浸出实验射线衍射仪分析矿物样品表明黄铜矿为主要组成部分.和硫化铅.是引起少量连同对斑铜矿和闪锌矿硫化锌。化学样品矿物组成为.铁，.铜，和.硫。被粉碎矿物然后通过个有微米孔径筛。生物浸出试验，用毫升摇瓶含培养基在，初始值.，转速摇床中培养。培养基不添加硫酸亚铁是用于黄铜矿生物浸出试验。矿石浓度为。浸出实验每组三样。在纯培养基中，通过离心和无菌水冲洗两次，用硫酸调整值到.，获得.,.,.,.等。然后，毕业设计论文外文译文学生姓名学号专业名称生物工程译文标题中英文运用实时技术监测生物浸出黄铜矿中嗜热微生物数量译文出处.指导教师审阅签名外文译文正文运用实时技术监测生物浸出黄铜矿中嗜热微生物数量摘要为了比较由不同比例温和嗜酸细菌氧化黄铜矿氧化溶出率，由三种细菌混合培养嗜酸中端螺旋菌嗜铁钩端螺旋菌，和藻。用和个古菌摇瓶培养在孵育。黄铜矿溶解度可以通过测量可溶性铜，三价铁，。

4、价铁浓度在所有浸出系统中都很低。浸出液中三价铁浓度在群落和从开始增加到第天，至天后，三价铁浓度下降。三价铁浓度无明显变化观察在非生物控制和群落渗滤液。群落中接种细胞密度分别为对细胞。这是检测到细胞密度下降至.个细胞毫升在中间阶段约.个细胞在后阶段。在浸矿系统，初始细胞密度分别为约细胞毫升，然后中间阶段总细胞密度原核生物细胞为.。在后期，细胞密度分别为.个细胞毫升射线衍射分析结果表明，浸出群落残留，和主要包括黄铜矿，黄钾铁矾，硫酸铅矿和二氧化铅。然而，黄钾铁矾是由没有发现残留非生物浸出控制，群落和。在非生物浸出渣控制主要包含黄铜矿，硫酸铅矿，并导致二,.,。.接种于培养基中含有营养物质基础,.,.,.,.酵母膏，.。生物浸出实验射线衍射仪分析矿物样品表明黄铜矿为主要组成部分.和硫化铅.是引起少量连同对斑铜矿和闪锌矿硫化锌。化学样品矿物组成为.铁，.铜，和.硫。被粉碎矿物然后通过个有微米孔径筛。生物浸出试验，用毫升摇。

5、能力最强.在所有已定义群落。从图中可以看出。中值生物浸出系统先上升后下降。然而，对非生物控制值在直逐渐增加。可溶性铁液中三价铁含量变化如图所示。初始三价铁浓度在所有浸出系统中都很低。浸出液中三价铁浓度在群落和从开始增加到第天，至天后，三价铁浓度下降。三价铁浓度无明显变化观察在非生物控制和群落渗滤液。群落中接种细胞密度分别为对细胞。这是检测到细胞密度下降至.个细胞毫升在中间阶段约.个细胞在后阶段。在浸矿系统，初始细胞密度分别为约细胞毫升，然后中间阶段总细胞密度原核生物细胞为.。在后期，细胞密度分别为.个细胞毫升射线衍射分析结果表明，浸出群落残留，和主要包括黄铜矿，黄钾铁矾，硫酸铅矿和二氧化铅。然而，黄钾铁矾是由没有发现残留非生物浸出控制，群落和。在非生物浸出渣控制主要包含黄铜矿，硫酸铅矿，并导致二.,.,..,..,..,.,,...正文页面不够可加页，并在正文后附外文原文，统用纸张打印或手工誊写,.,。.接种于培。

6、了重要作用。个数据研究还表明，在高温条件下，溶铜从矿石中溶解更有效露等人。年拉姆等人。年。如今，出现对应用浸出矿物硫化物在混合培养和微生物群落分析，表现出越来越大兴趣.。等。年分析了三地菌群在搅拌缸中搅拌，多金属氧化集中在，和菌群由三个菌组成.，藻端螺旋菌。，和藻。和个古菌藻。我们还发现，从矿山酸性排水中富集温和嗜热微生物有类似群落结构。上述结果表明，这些简单社区可以很容易地构建。黄铁矿氧化溶解硫化铁，定义为由种中度嗜热菌组合端螺旋菌，硫杆菌，在。，脂环，属。和个古菌研究冲部和约翰逊年。但是，仅有少数报告对黄铜矿生物浸出定义为中度嗜热嗜酸微生物群落。因此，应努力把重点放在用中度嗜热嗜酸细菌构建有效菌群用于生物浸出黄铜矿。此外，在黄铜矿浸出系统中微生物传代，以及如何传代影响矿物溶解过程，是了解得不够清楚，并应进行调。为了优化操作条件，提高浸出效率，有必要让温和嗜热嗜酸最佳组合和监测反应温度，值等参数，来反应这些微生。

7、在生物浸出样品中提取运用刘等人修改了协议。年。固体集中和自由细胞是从毫升样本在离心分钟提取基因组溶于微升，值.，.。样本可视化，与溴化乙锭染色后，电泳通过瓦特琼脂糖凝胶。用于目，纯化基因组浓度用分光光度计测量使用钕分光光度计技术，威尔明顿，美国和调整，以最终浓度。设计特异性引物在这项研究中使用引物列于表。引物刘提到过，引物是用.设计。所有引物由生工合成由,.,.进行。该特定片段进行扩增，然后用.琼脂糖凝胶电泳检查和溴化乙锭染色，以确保产物即引物特异性和尺寸。序列由和合成，并在分析检查产品。这些引物用实行实时定量进行了测试其是否符合实验要求见下文。和实时常规方法是用梯度，哥廷根，德国。扩增在下分钟，其次是个循环下秒，下，下秒，最后循环为下分钟。产物分析采用琼脂糖凝胶电泳，并在必要时，采用纯化用自旋检测纯化试剂盒公司，希尔登，德国。对含量产品采用分光光度法测定钕分光光度计。由于片段所有基因长度分别为众所周知，数字进行。

8、硫酸亚铁溶液中，作为接种细菌。根据设计，数目相等细胞约细胞毫升，每株，按顺序接种于摇瓶。定期分析样品中铜，总溶解铁，亚铁，值，以及菌落结构。生物浸出实验，使用以下个菌落及属嗜铁钩端螺旋菌和嗜热号和嗜热楼楼.瓦特酵母提取物湖嗜铁钩端螺旋菌和.湖嗜铁钩端螺旋菌，嗜热号和菌。非生物控制也进行了设计。浸出实验持续了天。理化分析溶液中铜，铁总浓度测定用原子吸收光谱法。亚铁铁浓度确定，用钾滴定重铬酸钾。浸出系统值用计进行测定。浸出残渣过滤，洗涤，并用冷冻干燥干燥，最后由射线衍射分析。培养瓶中细胞密度测定用细胞计数仪。基因组提取使用基因组纯化试剂盒生物科技，有限公司，北京，中国提取摇瓶种植中纯培养微生物。在生物浸出样品中提取运用刘等人修改了协议。年。固体集中和自由细胞是从毫升样本在离心分钟提取基因组溶于微升，值.，.。样本可视化，与溴化乙锭染色后，电泳通过瓦特琼脂糖凝胶。用于目，纯化基因组浓度用分光光度计测量使用钕分光光度计技。

9、直接计算出浓度产物。将产物进行系列稀释从到份微每升和实时技术扩增建设标准曲线。实时技术运用了实时孔定量检测系统生物拉德实验室公司，大力士，美国。反应混合物中包含微升绿色荧光实时法师组合东洋纺有限公司有限公司，大阪，日本，其中包含聚合酶，浓度，氯化镁，和染料，反义引物，微升模板，和添加定容到微升。还要设计阴性对照。实时技术方案包括个分钟循环，然后循环秒，下秒，下秒。在完成每次运行，融化扩增曲线通过提高测量温度从至.，而监测荧光。该特异性扩增检查通过检查融化曲线，它对称性，以及缺乏非特异性山峰。全部都是式三份进行测试。结果比较温和嗜热嗜酸在混合培养基黄铜矿浸出混合培养中温和嗜热嗜酸黄铜矿浸出结果如图所示。第在生物浸出中铜浸出率比在非生物控制实验.中大很多。结果表明不同温和嗜热微生物混合培养铜回收比例不同后天。该黄铜矿铜萃取群落.无添加酵母中提取大大提高。此外，.和.铜是群落与群落分别从黄铜矿浸出。群落表明，黄铜矿浸出。

10、等人。年，和藻。株根据他们已知性能。我们实验室所有独立菌株，被培养在种激活培养基中。微生物是生长在适当液体培养基介质中，用来在混合菌剂使混合培养基中做生物浸出实验。属嗜铁钩端螺旋菌生长在培养基中，初始值.，和藻。种植在与.初始值中，补充.瓦特酵母提取物。是培养在培养基中以硫作为能源，初始为.。培养基克升,.,.,.,.,−,.,.,。.接种于培养基中含有营养物质基础,.,.,.,.酵母膏，.。生物浸出实验射线衍射仪分析矿物样品表明黄铜矿为主要组成部分.和硫化铅.是引起少量连同对斑铜矿和闪锌矿硫化锌。化学样品矿物组成为.铁，.铜，和.硫。被粉碎矿物然后通过个有微米孔径筛。生物浸出试验，用毫升摇瓶含培养基在，初始值.，转速摇床中培养。培养基不添加硫酸亚铁是用于黄铜矿生物浸出试验。矿石浓度为。浸出实验每组三样。在纯培养基中，通过离心和无菌水冲洗两次，用硫酸调整值到.，获得.,.,.,.等。然后，细胞悬浮在培养基并且没有。

11、术，威尔明顿，美国和调整，以最终浓度。设计特异性引物在这项研究中使用引物列于表。引物刘提到过，引物是用.设计。所有引物由生工合成由,.,.进行。该特定片段进行扩增，然后用.琼脂糖凝胶电泳检查和溴化乙锭染色，以确保产物即引物特异性和尺寸。序列由和合成，并在分析检查产品。这些引物用实行实时定量进行了测试其是否符合实验要求见下文。和实时常规方法是用梯度，哥廷根，德国。扩增在下分钟，其次是个循环下秒，下，下秒，最后循环为下分钟。产物分析采用琼脂糖凝胶电泳，并在必要时，采用纯化用自旋检测纯化试剂盒公司，希尔登，德国。对含量产品采用分光光度法测定钕分光光度计。由于片段所有基因长度分别为众所周知，数字进行直接计算出浓度产物。将产物进行系列稀释从到份微每升和实时技术扩增建设标准曲线。实时技术运用了实时孔定量检测系统生物拉毕业设计论文外文译文学生姓名学号专业名称生物工程译文标题中英文运用实时技术监测生物浸出黄铜矿中的嗜热微生物的数。

12、物种群动态。限制性片段长度多态性，单链构象多样，变性梯度凝胶电泳被用来揭示浸出环境菌落结构微生物群落巴塔利亚，布吕内等人。年等。年，迪亚比等人。年。然而，这些方法定量分析中都表现不佳。荧光原位杂交技术已成功地应用于测量生物浸出环境嗜酸细菌数量冈萨雷斯托瑞尔等。，年，冲部和约翰逊年。这种方法代表在分析浸矿微生物数量方面种重要进步，但它是耗费时间和人力。实时定量技术基于在线荧光产物检测，提供了种快速，简单方法来测量菌群中微生物种群并已成功地应用到测量细菌和古细菌硫化矿物浸出系统刘等人。年。这项工作目标是，从各种混合中度嗜热嗜酸文化和监测黄铜矿生物浸出过程中种群动态采用实时定量技术来比较黄铜矿溶解效率。这项研究结果可能提供资料逻辑设计，对用人工构建中度嗜热嗜酸菌落，用于特殊矿物生物浸出硫化物有重要作用。材料与方法微生物和培养条件中度嗜热嗜酸在此选择研究了在菌株邱等人。年，属嗜铁钩端螺旋菌菌株镐等人。年，嗜热号应变母语周。

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