1、边缘整齐,用无菌接种针从每个肠球菌琼脂平板或平板挑取个典型菌落,进步做确证实验。革兰氏染色镜检在肠球菌琼脂平板或平板上挑取典型菌落作革兰氏染色镜检,鉴定为革兰氏阳性球菌。确证实验纯培养将肠球菌琼脂平板或平板处理固态样品以无菌操作称取检样,放入含有灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋或灭菌乳钵中,使用旋转刀片式均质器均质或拍击式均质器均质或充分研磨做成稀释液。液态样品以无菌操作量取检样,放入含有灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋中,振荡混匀。样品稀释取稀释液加到含有无菌生理盐水的稀释瓶中,充分混匀制成的稀释液。根据对样品的污染状况的估计,依次制成十倍递增稀释样粉胰蛋白胨葡萄糖氯化钠磷酸氢钠氯化钠蒸馏水制法将各成分加入蒸馏水中。
2、安全地方标准食品中肠球菌的定性定量检验.粉胰蛋白胨葡萄糖氯化钠磷酸氢钠氯化钠蒸馏水制法将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调整,分装,高压灭菌。脑心浸液琼脂培养基成分牛脑浸出粉牛心浸出粉胰蛋白胨葡萄糖氯化钠磷酸氢钠琼脂蒸馏水制法将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调整,高压灭菌。革兰氏染色液结晶紫染色液成分结晶紫乙醇草酸铵水溶液品匀液。每递增稀释次,换用支无菌吸管或吸头。定量检测接种和培养根据样品的污染程度估计,选择个个连续的适宜稀释度的稀释液各加入无菌培养皿内,每个稀释度做个平皿。把融化的肠球菌琼脂或琼脂倾入培养皿内,转动平板充分混合,水平放置,使琼脂凝固。可在凝固后的琼脂表面覆盖薄层肠球菌琼脂或琼脂约,凝固后翻转平板。肠。
3、做进步的确证实验。可以采用试剂条或试卡进行生化鉴定。计数法结果计算如管培养物中所挑取的典型菌落中,有个确认为肠球菌,则该管应视为阳性。根据样品接种量稀释倍数以及确证阳性的反应管数,查值表参见附录色液被洗掉,不要过分脱色,水洗。滴加复染液,复染。水洗待干镜检。附录资料性附录肠球菌最大可能数表每检样中肠球菌的最大可能数值。计数法的检验程序计数法的检验程序见图查表检样样品生理盐水,均质倍系列稀释选择个连续的适宜稀释度,每个稀释度各取分别接种于管叠氮化钠葡萄糖肉汤或肠球菌肉汤,共管或置于培养。同时分别取空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。典型菌落观察在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落在平板上形成暗红色至粉红色菌落。
4、菌落观察染色镜检生化实验或或计数并报告结果确证实验紧贴在肠球菌琼脂或琼脂表面图肠球菌的滤膜检测法操作程序滤膜检测法操作步骤样品保存。样品处理污染程度低的水或其他液体样品可直接进行检验。污染程度较高的水或其他液体样品可吸取放入含有灭菌生理盐水中,制成稀释液。取稀释液加到含有无菌生理盐水的稀释瓶中,充分混匀制成的稀释液。根据对样品的污染状况的革兰氏阳性球菌的典型菌落分别接种到脑心浸液肉汤和葡萄糖琼脂斜面或脑心浸液琼脂斜面。肉汤置于培养,葡萄糖琼脂斜面和斜面置于培养。过滤装置抽滤瓶真空泵和耐高温处理的过滤器。天平。酒精灯和接种环。无菌剪刀勺子镊子。无菌均质袋均质杯或灭菌乳钵。滤膜直径,。无菌试管及相应的试管架。无菌吸管食品。
5、混匀。样品稀释取稀释液加到含有无菌生理盐水的稀释瓶中,充分混匀制成的稀释液。根据对样品的污染状况的估计,依次制成十倍递增稀释样滤膜检测法操作程序滤膜检测法的操作程序见图检样样品生理盐水倍系列稀释选择个个适宜稀释度,取适量样液用灭菌滤膜过滤菌落观察染色镜检生化实验或或计数并报告结果确证实验紧贴在肠球菌琼脂或琼脂表面图肠球菌的滤膜检测法操作程序滤膜检测法操作步骤样品保存。样品处理污染程度低的水或其他液体样品可直接进行检验。污染程度较高的水或其他液体样品可吸取放入与确证实验肠球菌在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落在平板上形成暗红色至粉红色菌落,边缘整齐。用无菌接种针从每个肠球菌琼脂平板或平板至少挑取个典型菌落。所述。
6、,加热溶解,调整,分装,高压灭菌。脑心浸液琼脂培养基成分牛脑浸出粉牛心浸出粉胰蛋白胨葡萄糖氯化钠磷酸氢钠琼脂蒸馏水制法将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调整,高压灭菌。革兰氏染色液结晶紫染色液成分结晶紫乙醇草酸铵水溶液培养。典型菌落观察与确证实验肠球菌在肠球菌琼脂平板上形成带棕色环的棕黑色菌落在平板上形成暗红色至粉红色菌落,边缘整齐。用无菌接种针从每个肠球菌琼脂平板或平板至少挑取个典型菌落。所述做进步的确证实验。可以采用试剂条或试卡进行生化鉴定。计数法结果计算如管培养物中所挑取的典型菌落中,有个确认为肠球菌,则该管应视为阳性。根据样品接种量稀释倍数以及确证阳性的反食品安全地方标准食品中肠球菌的定性定量检验.得出样品中肠。
7、菌琼脂置于培养平管数,查值表参见附录,得出样品中肠球菌最近似值。计数法结果报告报告样品中肠球菌的值,以表示。第法肠球菌的滤膜检测法滤膜检测法实验原理将滤膜置于选择性培养基上增养时,肠球菌菌落呈现特异的颜色。经过肠球菌确证实验之后,计数并计算滤膜上确证肠球菌菌落的数量,即可计算出样品中肠球菌的数量。本方法适用于水和液体样品中肠球菌的检验。氯化钠脑心肉汤培养基成分牛脑浸出粉牛心浸菌肉汤。链球菌琼脂。肠球菌琼脂胆汁叶苷叠氮钠琼脂。胆汁叶苷琼脂琼脂。脑心浸液肉汤。过滤装置抽滤瓶真空泵和耐高温处理的过滤器。天平。酒精灯和接种环。无菌剪刀勺子镊子。无菌均质袋均质杯或灭菌乳钵。滤膜直径,。无菌试管及相应的试管架。无菌吸管刻度刻度。。
8、验或或变黑或混浊不变黑或无混浊肠球菌阴性确证实验报告结果图肠球菌计数法的检验程序计数法操作步骤样品保存与处理。样品接种与培养根据样品污染情况的估计,选择适宜的个连续稀释度,每稀释度分别接种管叠氮化钠葡萄糖肉汤或肠球菌肉汤,每管接种样液如接种样液量超过则应接种于双料叠氮化钠葡萄糖肉汤活或双料肉汤管中,混匀,共管。叠氮化钠葡萄糖肉汤置于处理固态样品以无菌操作称取检样,放入含有灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋或灭菌乳钵中,使用旋转刀片式均质器均质或拍击式均质器均质或充分研磨做成稀释液。液态样品以无菌操作量取检样,放入含有灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋中,振荡混匀。样品稀释取稀释液加到含有无菌生理盐水的稀释瓶中,充分混匀制。
9、食品安全地方标准食品中肠球菌的定性定量检验。样滤样液加入过滤器,打开真空泵进行抽滤。当全部样液通过滤膜后,用灭菌生理盐水轻洗过滤器边缘至少两次。关闭真空泵,打开滤器,用无菌镊子移取滤膜,将滤膜紧贴在肠球菌琼脂或琼脂培养基表面上,避免出现气泡。倒置平板置于培养。典型菌落观察和确证实验肠球菌在肠球菌琼脂平板滤膜上形成带棕色环的棕黑色菌落在平板滤膜上形成暗红色至粉红色菌落。用无菌接种针从滤膜上至少挑取个处理固态样品以无菌操作称取检样,放入含有灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋或灭菌乳钵中,使用旋转刀片式均质器均质或拍击式均质器均质或充分研磨做成稀释液。液态样品以无菌操作量取检样,放入含有灭菌生理盐水的无菌均质杯或均质袋中,振。
10、混浊情况肠球菌肉汤置于培养肉眼观察颜色变为黑色或混浊的试管,表明有肠球菌生长。接种选择性平板对所有呈现混浊的叠氮化钠葡萄糖肉汤或颜色变为黑色的肠球菌肉汤进行确证试验。用接种环将各管的培养物划线接种于肠球菌琼脂平板或琼脂平板。肠球菌琼脂平板置于培养琼脂平板置于培养。典型菌落观或菌落观察染色镜检生化实验或或变黑或混浊不变黑或无混浊肠球菌阴性确证实验报告结果图肠球菌计数法的检验程序计数法操作步骤样品保存与处理。样品接种与培养根据样品污染情况的估计,选择适宜的个连续稀释度,每稀释度分别接种管叠氮化钠葡萄糖肉汤或肠球菌肉汤,每管接种样液如接种样液量超过则应接种于双料叠氮化钠葡萄糖肉汤活或双料肉汤管中,混匀,菌落观察染色镜检生化。
11、成的稀释液。根据对样品的污染状况的估计,依次制成十倍递增稀释样制法将结晶紫完全溶解于乙醇中,然后与草酸铵溶液混合。革兰氏碘液成分碘碘化钾蒸馏水制法将碘与碘化钾先进行混合,加入蒸馏水少许充分振摇,待完全溶解后,再加蒸馏水至。沙黄复染液成分沙黄乙醇蒸馏水制法将沙黄溶解于乙醇中,然后用蒸馏水稀释。革兰染色法将涂片在酒精灯火焰上固定,滴加结晶紫染色液,染,水洗。滴加革兰氏碘液,作用,水洗。滴加乙醇脱色,约,直至管数,查值表参见附录,得出样品中肠球菌最近似值。计数法结果报告报告样品中肠球菌的值,以表示。第法肠球菌的滤膜检测法滤膜检测法实验原理将滤膜置于选择性培养基上增养时,肠球菌菌落呈现特异的颜色。经过肠球菌确证实验之后,计数。
12、菌最近似值。计数法结果报告报告样品中肠球菌的值,以表示。第法肠球菌的滤膜检测法滤膜检测法实验原理将滤膜置于选择性培养基上增养时,肠球菌菌落呈现特异的颜色。经过肠球菌确证实验之后,计数并计算滤膜上确证肠球菌菌落的数量,即可计算出样品中肠球菌的数量。本方法适用于水和液体样品中肠球菌的检验。食品安全地方标准食品中肠球菌的定性定量检粉胰蛋白胨葡萄糖氯化钠磷酸氢钠氯化钠蒸馏水制法将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调整,分装,高压灭菌。脑心浸液琼脂培养基成分牛脑浸出粉牛心浸出粉胰蛋白胨葡萄糖氯化钠磷酸氢钠琼脂蒸馏水制法将各成分加入蒸馏水中,加热溶解,调整,高压灭菌。革兰氏染色液结晶紫染色液成分结晶紫乙醇草酸铵水溶液培养,检查各试管。
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DBS22 027-2014 食品安全地方标准 食品中肠球菌的定性定量检验
