(’-GTATTAACCCATGCGATTTC-’)最初设计是基于序列在SrRNA基因数据库访问和核糖体数据库项目(RDP)检查。根据使用探针DMC对碱基对不匹配数量检查,只有零个(DechlorimonasSIULSTR.及DechlorimonasMissRSTR.)或一个(Ferribacteriumlimneticumstr.Cda-)bp不匹配三个生物体被证实,因为它是专门为目标微生物设计。然而,没有纯种污泥可以绑定SrRNA基因探针DMC。因此,使用污泥杂交样品而不是纯种污泥,进行各种范围杂交温度、清洗温度和甲酰胺浓度来优化原位条件和验证关于目标生物探针特异性。...原位杂交污泥样品被固定在多聚甲醛磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液(PBS;mMNaCl;.mMNaHPO,.mMKCl,.mMKHPO,,pH.)小时℃。固定污泥样品在PBS中洗涤两次,再悬浮于PBS乙醇溶液(:,体积MgSOHO和.mL营养液。每升营养液包括以下化合物:.gFeClHO,.gHBO,.gCuSOHO,.gKI,.gMnClHO,.gNaMoOHO,.gZnSOHO,.gCoClHO和gEDTA。..化学分析混合液悬浮固体(MLSS)和磷酸盐分析是依据检验水和废水标准方法来执行[]。硝酸盐是使用一个高效能决定液相色谱仪配备一个阴离子柱(IC-Anion-PW,Tosoh,Japan)和一个紫外检测器(UV-,Tosoh,Japan)。TOC测量使用TOC分析仪(TOC-,日本岛津公司,日本)。..批量实验活性污泥从天后结束有氧或无氧条件下取出,并立即在不包含基础培养基培养液(pH.)中清洗两次,。该制备活性污泥分为三部分。其中两部分被孵育在合成废水和没有氮烯丙基硫脲下,分别在厌氧条件下,然后被暴露于有氧条件。另一部分在厌氧条件下与无氮烯丙基硫脲合成废水中孵育后被暴露在缺氧条件下。对于缺氧条件下,硝酸盐溶液(NO-N:mg)开始时添加。通过这种方式,分批实验利用取自所有反应器活性污泥运行在分钟厌氧条件和后续分钟好氧或缺氧条件下,在不同电子受体状况下磷吸收能力能够被调查和评估。..PCR-DGGE分析...取样和制备在每个反应器中污泥样品采自有氧或缺氧条件下,应立即通过rpm(CFR,Hitachi,Japan)在℃离心浓缩分钟,然后与体积(体积/重量)TE缓冲液(mMTris-HCl,mMEDTA,pH.)中旋转分钟。上述污泥样品准备工作重复次,然后存储在-℃。...DNA提取所制备污泥样品悬浮于体积(体积/重量)SL缓冲液(蔗糖,.M氯化钠mM乙二胺四乙酸二钠,mMTris-HCl,pH.)其中含有mg/ml溶菌酶,然后进行超声波处理秒。后在rpm离心分离分钟回收水相。如上所述,回收水相重复三次。所回收水相,在.体积(重量/体积)蛋白酶K,用.体积(重量/体积)dodecylsufate钠,随后用.体积(重量/体积)HTMAB,每次分钟,在℃培养。在,rpm下离心分钟后,被转移到一个新管水相中DNA用一个相同体积PCI溶液(酚-氯仿-异戊醇=::,体积/体积/体积)和CIA溶液(氯仿-异戊醇=:,体积/体积)提取,然后沉淀在.体积M醋酸钠(pH值.)和.倍体积无水乙醇中。DNA沉淀通过用(体积/体积)乙醇洗涤并在干燥干燥器方式获得。最后,将干燥沉淀重新悬浮于TE缓冲液中,并储存在℃。...PCR扩增大肠埃希氏菌SrDNA和位置相对应区域PCR扩增使用正向引物EUBf(’-CCTACGGGAGGCAGCAG-’)与GC夹(’-CGCCCGCCGCGCGGCGGCGGGCGGGGCGGCACGGGGGG–’)在’端部建立稳定DNA片段熔化行为和反向引物UNIVr(’-CCCCGTCAATTCCTTTGAGTTT-’)。PCR扩增以自动热循环仪(基因扩增PCR系统,应用生物系统公司,美国)使用以下协议进行:初始变性分钟℃,周期变性分钟℃,退火分钟℃,扩展分钟℃,紧随其后是最后一个扩展为分钟在℃。PCR混合物最终体积为L,其中含有L*PCR缓冲液,.mMMgSO,引物各.mM,.mMdNTP,pg模板和U聚合酶。PCR扩增后,PCR产物用(重量/体积)琼脂糖凝胶在*TAE,V电泳分钟,然后在被装上变性聚丙烯酰胺凝胶前进行溴化乙锭染色检查。...电泳根据制造商说明,DGGE使用Dcode通用突变检测系统(BioRad,USA)。PCR产物在聚丙烯酰胺凝胶上*TAE缓冲液中(mMTris-HCl,mMCHCOOH,mMEDTA,pH.)电泳,在V和℃进行分钟,该凝胶包含从到线性梯度变性剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳后用SYBRGreenI(FMC生物制品,编号:)染色分钟,然后用数码相机(DCZOOM,Kodak,USA)直观显示在紫外透射仪下(CSF-BCCosmobio,Japan)。...测序从DGGE聚丙烯酰胺凝胶中切下两个条带进行SrDNA片段测序。切下来DNA片段使用QIAEXII凝胶提取试剂盒(Qiagen,USA)纯化,然后用无GC夹正向引物EUBf和反向引物UNIVr进行PCR扩增。PCR扩增后,PCR产物使用QIA快速PCR纯化试剂盒(Qiagen,USA)纯化。按照制造商说明,两股纯化PCR扩增产物被引物EUBf,F(’-GTGCCAGCAGCCGCGG-’),F(’-ATTAGATACCCTGGTA-’),R(’-ACCGCGGCTGCTGGC-’),R(’-CTACCAGGGTATCTAAT-’)和UNIVr通过ABIPRISM大终结者周期测序试剂盒(AppliedBiosystems,USA)和ABIPRISM自动DNA测序仪(AppliedBiosystems,USA)进行测序。..FISH分析...寡核苷酸探针SrRNA针对性寡核苷酸探针用CY标记EUB(’-GCTGCCTCCCGTAGGAGT-’)[]和用异硫氰酸荧光素(FITC)标记PAO(’-GTTAGCTACGGCACTAAAAGG-’)[]准备用于属于β-ProteobacteriaRhodocyclussp.原位检测。另一方面,因为没有寡核苷酸探针用于Dechlorimonassp.原位检测,探针DCM(’-GTATTAACCCATGCGATTTC-’)最初设计是基于序列在SrRNA基因数据库访问和核糖体数据库项目(RDP)检查。根据使用探针DMC对碱基对不匹配数量检查,只有零个(DechlorimonasSIULSTR.及DechlorimonasMissRSTR.)或一个(Ferribacteriumlimneticumstr.Cda-)bp不匹配三个生物体被证实,因为它是专门为目标微生物设计。然而,没有纯种污泥可以绑定SrRNA基因探针DMC。因此,使用污泥杂交样品而不是纯种污泥,进行各种范围杂交温度、清洗温度和甲酰胺浓度来优化原位条件和验证关于目标生物探针特异性。...原位杂交污泥样品被固定在多聚甲醛磷酸盐缓冲盐水(PBS)溶液(PBS;mMNaCl;.mMNaHPO,.mMKCl,.mMKHPO,,pH.)小时℃。固定污泥样品在PBS中洗涤两次,再悬浮于PBS乙醇溶液(:,体积个反应器污泥样品中SrDNA片段DGGE图谱。其中存在许多可见光波段,表现出污泥样品中微生物生态学复杂性和多样性。基于各自PCR扩增SrDNADGGE图谱分析,条带B和C显示相似片段图谱,然而条带C两波段缺失。.考虑图中所描述结果,培养在RAA反应器污泥每MLSS磷摄取量在缺氧条件下显著减少,似乎条带C波段和缺失与DNPAOs数量减少有关,因为在有氧条件下硝化作用受到抑制。另一个方面,与其他条带相比较,条带D图谱由于氧缺乏和硝酸盐存在有显著变化:其表现为五个新波段(,,,和)出现和六个波段(,,,,及)缺失,而在条带B和C中均含有,这一结果表明,参与生物除磷微生物群落可以根据电子受体条件而改变。如图所讨论,每个反应器中展现了不同电子受体条件下每MLSS磷不同吸收能力下,这表明,磷吸收能力与根据电子受体条件而改变PAOs微生物群落结构有关。因此,结果表明,一些DGGE图谱可见光波段与PAOs微生物群落结构改变有关。我们最初预期,RNN反应器微生物群落结构多样性减少,因为当硝酸盐被单独提供作电子受体时,能够仅利用氧PAOs数量将减少。然而,与最初预期相反,条带D显示出比其他条带更加复杂波段图谱。因此,RNN反应器结果也似乎与PAOs微生物群落结构改变有关。基于DGGE波谱分析,可以看出,波段和普遍出现在所有条带中。因为尽管运行在不同电子受体条件下,所有反应器表现出同时利用氧和硝酸盐来吸收磷能力,波段和可能对应能够同时利用氧和硝酸盐作为电子受体DNPAOs。因此,将波段和从DGGE聚丙烯酰胺凝胶剪下,然后分析它们DNA序列。进一步,将所得到序列与基因库比对,然后确定其所属关系。图三个反应器中SrDNA图谱片段:(条带A)接种体,(条带B)RAN反应器,(条带C)RAA反应器,(条带D)RNN反应器。图从DGGE图谱切下SrDNA系统发育树。进化距离和简约分析采用bootstrap重采样在CLUSTALW进行。这规模表示.核苷酸替换每个核苷酸位置。该树是根植于以Cytophagalytica为基础SrDNA序列。..使用FISH分析法原位检测优势物种PCR-DGGE和DNA测序结果表明,Rhodocyclussp.,PAOs候选种类之一,普遍存在于所有在不同电子受体条件下进行强化脱氮除磷反应器中。尽管如此,从电泳中获得图谱并未给出任何信息关于微生物群落结构优势程度。因此,FISH分析法检测了Rhodocyclussp.和Dechlorimonassp.,因为原位杂交中使用SrRNA针对性寡核苷酸探针能够识别和监控微生物群落结构中特殊菌种。图(A)和(B)显示Rhodocyclussp.FISH图像,具体为在RNN反应器污泥样品寡核苷酸探针。Rhodocyclussp.在使用EUB(红色)和PAO(绿色)探测原位双杂交中显示出明显黄色信号,这一结果证明了在RNN反应器中Rhodocyclussp占据相当大比例。此外,其他反应器FISH分析还表明,与RNN反应器(数据未显示)一样,Rhodocyclussp.是大量存在。此外,FISH图片形态学观察揭示出在原位杂交中使用PAO探针(绿色)形成了一串串类似葡萄似图案,如图(A)所示,并且在形态学上与其他反应器相似。这一结果表明,类似Rhodocyclus微生物从DGGE聚丙烯酰胺凝胶分离出部分SrRNA序列能够兼性利用氧和硝酸盐作为电子受体吸收磷,因此在不同电子受体条件下强化生物除磷中其重要作用。然而,使用DMC探针杂交表明,Dechlorimonassp并不大量存在于所有反应器(数据未显示)污泥样品,这表明Dechlorimonassp并非是所有反应器优势种群,虽然它检测是通过DGGE。这很可能是因为从污泥样品提取Dechlorimonassp.srDNA通过通用引物PCR方法被夸张地放大,尽管它是比例很小微生物群落。因此,FISH分析表明,Rhodocyclussp.在所有以醋酸盐作为碳源所有反应器中是存在,即使电子受体条件彼此不同。图RNN反应器污泥样品中特定寡核苷酸探针Rhodocyclussp.FISH图像。污泥样品图像(A)采用FITC(绿色)标记PAO探针单杂交,(B)采用FITC(绿色)和CY(红色)EUB标记PAO探针双杂交。黄色代表Rhodocyclussp.,其他颜色代表其他细菌,bar=m。.结论在本文中,我们提出能够利用硝酸盐作为电子受体进行缺氧磷吸收DNPAOs特点和微生物多样性。从这项研究中,得到以下结果:()从每个反应器中获得污泥表明不同电子受体条件下每MLSS磷吸收能力不同,这透露,负责生物除磷PAOs包含至少三个种群包括DNPAOs,微生物群落结构根据电子受体条件而改变。()与氧及硝酸盐一起培养污泥在缺氧条件下磷吸收量呈大幅上升,这表明一小部分能够在有氧条件下利用硝酸盐DNPAOs是存在。()PCR扩增SrDNADGGE结果片段表明,在微生物群落变化取决于不同类型电子受体,系统发育从属关系确定表明,普遍存在于三个反应器中细菌为Rhodocyclussp.属于β-Proteobacteria。()FISH分析表明,Rhodocyclussp.在所有反应器中占据相当大比例,尽管电子受体条件彼此不同。参考文献(略)MgSOHO和.mL营养液。每升营养液包括以下化合物:.gFeClHO,.gHBO,.gCuSOHO,.gKI,.gMnClHO,.gNaMoOHO,.gZnSOHO,.gCoClHO和gEDTA。..化学分析混合液悬浮固体(MLSS)和磷酸盐分析是依据检验水和废水标准方法来执行[]。硝酸盐是使用一个高效能决定液相色谱仪配备一个阴离子柱(IC-Anion-PW,Tosoh,Japan)和一个紫外检测器(UV-,Tosoh,Japan)。TOC测量使用TOC分析仪(TOC-,日本岛津公司,日本)。..批量实验活性污泥从天后结束有氧或无氧条件下取出,并立即在不包含基础培养基培养液(pH.)中清洗两次,。该制备活性污泥分为三部分。其中两部分被孵育在合成废水和没有氮烯丙基硫脲下,分别在厌氧条件下,然后被暴露于有氧条件。另一部分在厌氧条件下与无氮烯丙基硫脲合成废水中孵育后被暴露在缺氧条件下。对于缺氧中文字出处:Waterresearch,,():-附录一使用聚合酶链反应变性梯度凝胶电泳法测定不同电子受体条件下反硝化聚磷菌特征JohwanAhn,TomotakaDaidou,SatoshiTsuneda,AkiraHirata化学工程学系,早稻田大学,--Ohkubo,东京新宿,东京-,日本年月日接收;年月日接收修订版;年月正式收录摘要为了调查反硝化聚磷菌(DNPAOs)特点以及微生物多样性,能够使用硝酸盐作为电子受体进行强化生物除磷(EBPR),三序批式反应器都工作在三个不同电子受体条件,即只有氧气,氧气和硝酸盐以及只有硝酸盐。根据关于每个反应器中生物化学转化化学分析,人们发现,负责强化生物除磷聚磷微生物包含至少有三个种群包括DNPAOs,并根据微生物群落结构改变电子受体条件。此外,与氧及硝酸盐培养污泥在缺氧条件下磷摄取量呈急剧增加,这表明在有氧条件存在一定比例DNPAOs能够利用硝酸盐。另一方面,微生物群落结构依靠不同电子受体而改变已经通过变性梯度凝胶电泳聚合酶链反应扩增S核糖体DNA片段结果分析得到证明。结果发现,包含在所有反应器中细菌通常是Rhodocyclussp.(同源性)和Dechlorimonassp.(同源性),基于从DGGE条带切下序列及测定亲缘关系分析得出,它们属于β-Proteobacteria。然而,在所有反应器中只有Rhodocyclussp.存在被荧光原位杂交分析所证明。爱思唯尔科技有限公司保留所有权利。关键词:s核糖体DNA;变性梯度凝胶电泳(DGGE);反硝化聚磷菌(DNPAOs);强化生物除磷(EBPR);荧光原位杂交(FISH);聚磷菌(PAOs);聚合酶链反应(PCR).介绍在过去几十年,生物脱氮除磷(BNR)法被广泛用于处理废水中含有营养物质,即氮和磷,以及化学需氧量(COD),因为与化学处理方法相比它有经济优势。由于磷是限制藻类大量繁殖养分,以聚磷菌(PAOs)为特点强化生物除磷(EBPR)工艺一直被视为防止水体富营养化一种手段。然而,EBPR工艺与生物脱氮工艺比有一个缺点,因为COD在低C/N比时作为磷释放和反硝化作用一个限制因素。如果是这样话,最合适解决关于COD限制影响方案是将反硝化聚磷菌(DNPAOs)引入到BNR过程,这样能够利用硝酸盐作为电子受体来同时去除废水中磷和氮[-]。在BNR过程使用DNPAOs另一个优势是使用硝酸盐而不是氧作为电子受体结果是更少数量污泥产生以及有效地利用COD因此,硝酸盐,产生有氧条件下硝化过程中,已被认为是另一个电子受体用于同时去除氮和磷而无需额外补充细胞外碳基质[]。最近,为了考虑能够通过使用硝酸盐缺氧吸磷代替氧作为电子接受体PAOs比例,在DNPAOs反硝化活动中引入活性污泥模型(ASM)NO.dIAWQ任务组[]。然而,一个从微生物角度详细了解DNPAOs是缺乏。这是主要是因为在EBPR技术中参与关键化学转化反应DNPAOs目前为止还不能使用传统培养技术来培养。几个研究报告称,通过几个分子技术检测到PAOs属于β-Proteobacteria[-]。然而,这些研究仅限于PAOs高磷-在厌氧/好氧积累能力条件。因此,为确定在EBPR工艺过程中负责缺氧除磷DNPAOs,我们采用聚合酶链反应(PCR)变性梯度凝胶电泳(DGGE)法,该法已被广泛认为是研究微生物生态学一个强大工具。变性梯度凝胶电泳法是基于在电泳PCR扩增s核糖体DNA(rDNA)在聚丙烯酰胺凝胶碎片中含有一个线性增加变性梯度[]。不同DGGE条带是分离,根据具有相同长度但不同序列PCR产物融化行为,分别对应相应物种。因此,PCR-DGGE测定允许我们分析一个给定系统微生物组成和多样性而不需要分离单个物种[,]。这是特别有效分析非可培养环境微生物群落结构样品如EBPR工艺中微生物。此外,从DGGE凝胶切除条带序列分析提供了一个基础凝胶系统识别相应细菌对应条带以及sribosomalRNA(rRNA)设计有针对性寡核苷酸探针荧光原位杂交(FISH)分析,即使这些细菌是非可培养。本研究目是表征不同电子受体栽培条件下DNPAOs,在此基础上,采用PCR-DGGE和FISH法分析微生物群落结构、亲缘关系改变和识别执行生物除磷DNPAOs。.材料和方法..反应器运行三个序批式反应器(SBRS)各.L工作容积,提供了三种不同电子受体,即,氧气和硝酸盐(RAN反应器),无硝酸盐(RAA反应器),仅硝酸盐(RNN反应器),分别运行了天获得负责生物除磷PAOs。如表所示,RAN和RAA反应器在厌氧/好氧条件下运行,而RNN反应器在厌氧/缺氧条件下运行。在运行反应器之前,从东京一个市政污水处理厂好氧反应池取出活性污泥是接种过。在接种之前,这些污泥缺氧吸磷能力采用硝酸盐作为电子受体进行了评估。其结果是,总有机碳(TOC)被完全吸收并且磷在厌氧条件下释放,且在随后缺氧条件下观察到,磷吸收利用硝酸盐作为电子受体。所有反应器运行周期为h,包括一个分钟填充阶段,分钟厌氧阶段,分钟有氧或缺氧阶段,分钟沉降阶段和分钟退出阶段。一个周期后,.L流出量与相同数量入流量交换,因此保持h水力停留时间(HRT)。在一个循环结束时,为维持平均天细胞停留时间(MCRT),mL剩余活性污泥浪费了。在整运行期间,pH值维持在.和.之间。在此研究期间有关组件定期计量,监测生物除磷性能。表a硝酸盐由有氧条件下铵态氮硝化反应提供。b硝化作用氮烯丙基硫脲由控制,它被称为硝化抑制剂,抑制曝气污泥在有氧条件下硝酸盐或亚硝酸盐产生。C硝酸盐溶液(NO-N:g)在缺氧条件开始时分钟内提供。..合成废水每升基本培养基包含下列化合物:.gCHCOONaHO,mgKHPO,mg(NH)SO、mgCaClHO,mgMgSOHO和.mL营养液。每升营养液包括以下化合物:.gFeClHO,.gHBO,.gCuSOHO,.gKI,.gMnClHO,.gNaMoOHO,.gZnSOHO,.gCoClHO和gEDTA。..化学分析混合液悬浮固体(MLSS)和磷酸盐分析是依据检验水和废水标准方法来执行[]。硝酸盐是使用一个高效能决定液相色谱仪配备一个阴离子柱(IC-Anion-PW,Tosoh,Japan)和一个紫外检测器(UV-,Tosoh,Japan)。TOC测量使用TOC分析仪(TOC-,日本岛津公司,日本)。..批量实验活性污泥从天后结束有氧或无氧条件下取出,并立即在不包含基础培养基培养液(pH.)中清洗两次,。该制备活性污泥分为三部分。其中两部分被孵育在合成废水和没有氮烯丙基硫脲下,分别在厌氧条件下,然后被暴露于有氧条件。另一部分在厌氧条件下与无氮烯丙基硫脲合成废水中孵育后被暴露在缺氧条件下。对于缺氧条件下,硝酸盐溶液(NO-N:mg)开始时添加。通过这种方式,分批实验利用取自所有反应器活性污泥运行在分钟厌氧条件和后续分钟好氧或缺氧条件下,在不同电子受体状况下磷吸收能力能够被调查和评估。..PCR-DGGE分析...取样和制备在每个反应器中污泥样品采自有氧或缺氧条件下,应立即通过rpm(CFR,Hitachi,Japan)在℃离心浓缩分钟,然后与体积(体积/重量)TE缓冲液(mMTris-HCl,mMEDTA,pH.)中旋转分钟。上述污泥样品准备工作重复次,然后存储在-℃。...DNA提取所制备污泥样品悬浮于体积(体积/重量)SL缓冲液(蔗糖,.M氯化钠mM乙二胺四乙酸二钠,mMTris-HCl,pH.)其中含有mg/ml溶菌酶,然后进行超声波处理秒。后在rpm离心分离分钟回收水相。如上所述,回收水相重复三次。所回收水相,在.体积(重量/体积)蛋白酶K,用.体积(重量/体积)dodecylsufate钠,随后用.体积(重量/体积)HTMAB,每次分钟,在℃培养。在,rpm下离心分钟后,被转移到一个新管水相中DNA用一个相同体积PCI溶液(酚-氯仿-异戊醇=::,体积/体积/体积)和CIA溶液(氯仿-异戊醇=:,体积/体积)提取,然后沉淀在.体积M醋酸钠(pH值.)和.倍体积无水乙醇中。DNA沉淀通过用(体积/体积)乙醇洗涤并在干燥干燥器方式获得。最后,将干燥沉淀重新悬浮于TE缓冲液中,并储存在℃。...PCR扩增大肠埃希氏菌SrDNA和位置相对应区域PCR扩增使用正向引物EUBf(’-CCTACGGGAGGCAGCAG-’)与GC夹(’-CGCCCGCCGCGCGGCGGCGGGCGGGGCGGCACGGGGGG–’)在’端部建立稳定DNA片段熔化行为和反向引物UNIVr(’-CCCCGTCAATTCCTTTGAGTTT-’)。PCR扩增以自动热循环仪(基因扩增PCR系统,应用生物系统公司,美国)使用以下协议进行:初始变性分钟℃,周期变性分钟℃,退火分钟℃,扩展分钟℃,紧随其后是最后一个扩展为分钟在℃。PCR混合物最终体积为L,其中含有L*PCR缓冲液,.mMMgSO,引物各.mM,.mMdNTP,pg模板和U聚合酶。PCR扩增后,PCR产物用(重量/体积)琼脂糖凝胶在*TAE,V电泳分钟,然后在被装上变性聚丙烯酰胺凝胶前进行溴化乙锭染色检查。...电泳根据制造商说明,DGGE使用Dcode通用突变检测系统(BioRad,USA)。PCR产物在聚丙烯酰胺凝胶上*TAE缓冲液中(mMTris-HCl,mMCHCOOH,mMEDTA,pH.)电泳,在V和℃进行分钟,该凝胶包含从到线性梯度变性剂。聚丙烯酰胺凝胶电泳后用SYBRGreenI(FMC生物制品,编号:)染色分钟,然后用数码相机(DCZOOM,Kodak,USA)直观显示在紫外透射仪下(CSF-BCCosmobio,Japan)。...测序从DGGE聚丙烯酰胺凝胶中切下两个条带进行SrDNA片段测序。切下来DNA片段使用QIAEXII凝胶提取试剂盒(Qiagen,USA)纯化,然 1中文7630字出处:Waterresearch,2002,36(2):403-412附录一使用聚合酶链反应变性梯度凝胶电泳法测定不同电子受体条件下的反硝化聚磷菌的特征JohwanAhn,TomotakaDaidou,SatoshiTsuneda,AkiraHirata化学工程学系,早稻田大学,3-4-1Ohkubo,东京新宿,东京169-8555,日本2000年6月15日接收;2001年1月4日接收修订版;2001年4月17正式收录摘要为了调查反硝化聚磷菌(DNPAOs)的特点以及微生物多样性,能够使用硝酸盐作为电子受体进行强化生物除磷(EBPR),三序批式反应器都工作在三个不同的电子受体条件,即只有氧气,氧气和硝酸盐以及只有硝酸盐。