1、入的硫酸终止液,轻拍混匀,内用酶标仪在波长条件下测量每个微孔溶液的值。结果的计算和表述质量控制测试结果阳性质控的值要大于,阴性质控的值要小于,如果不能同时满足以上要求,测试的结果不被认可。对阳性结果要排除内源性过氧化物酶的干扰。临界值的计算每个微孔条的孔和孔为阴性质控,两个阴性质控值的平均值加上为临界值。示例阴性质控阴性质控平均值临界值结果表述值小于临界值的样品孔判为阴性,表述为样品中未检出型金的菌落数第稀释度高稀释倍数用于血浆凝固酶试验的菌落数计算系数稀释因子第稀释度。结果与报告根据平板上金黄色葡萄球菌的典型菌落数,按中公式计算,报告每样品中金黄色葡萄球菌数,以表示如值为,则以小于乘以最低稀释倍数报告。第法。

2、微孔溶液的吸光度值,样品中的葡萄球菌肠毒素与吸光度值成正比。检测步骤从分离菌株培养物中检测葡萄球菌肠毒素方法待测菌株接种营养琼脂斜面试管培养,用生理盐水洗下菌落,倾入产毒培养基中,每个菌种种瓶,振荡培养,振速为次,吸出菌液离心加热取上清液,取稀释后的样液进行试验。从食品中提取和检测葡萄球菌毒素方法乳和乳粉将乳粉溶解到的缓冲液中,混匀后同液体乳样按以下步骤制备。将乳于,离心。将表面形成的层脂肪层移走,变成脱脂乳。用蒸馏水对其进行稀释。取稀释后的样液进行试验。脂肪含量不超过的食品称取样品绞碎,加入的液进行均质。振摇。于,离心层。取上清液进行过滤除菌。取的滤出液进行试验。脂肪含量超过的食品称取样品绞碎,加入的液进行。

3、稀释液,均质查表报告结果用接种环从有细菌生长的各管中,移取环,分别接种平板,培养。取新鲜配置兔血浆,放入小试管中,再加入培养物,振荡摇匀,置温箱或水浴箱内,每半小时观察次,观察,如呈现凝固即将试管倾斜或倒置时,呈现凝块或凝固体积大于原体积的半,被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂,按说明书操作,进行血浆凝固酶试验用多通道加样器注入的洗液,再倾倒掉并在吸水纸上拍干。重复以上洗板操作次。本步骤也可由自动洗板机完成。每孔加入的酶标抗体,用手轻拍微孔板充分混匀,置室温下孵育。重复的洗板程序。加的底物和的发色剂至每个微孔中,轻拍混匀,室温黑暗避光处孵育。加。

4、。将孔中液体倾倒至含次氯酸钠溶液的容器中,并在吸水纸上拍打几次以确保孔内不残留液体。每孔用多通道加样器注入的洗液,再倾倒掉并在吸水纸上拍干。重复以上洗板操作次。本步骤也可由自动洗板机完成。每孔加入的酶标抗体,用手轻拍微孔板充分混匀,置室温下孵育。重复的洗板程序。加的底物和的发色剂至每个微孔中,轻拍混匀,室温黑暗避光处孵育。加入的硫酸终止液,轻拍混匀,内用酶标仪在波长条件下测量每个微孔溶液的值。结果的计算和表述质量控制测试结果阳性质控的值要大于,阴性质控的值要小于,如果不能同时满足以上要求,测试的结果不被认可。对阳性结果要排除内源性过氧化物酶的干扰。临界值终止液可使颜色由蓝变黄,并终止了酶反应以波长的酶标仪测量。

5、免疫吸附反应。孔酶标板的每个微孔条的孔分别包被了型葡萄球菌肠毒素抗体,孔为阳性质控,已包被混合型葡萄球菌肠毒素抗体,和孔为阴性质控,包被了非免疫动物的抗体。样品中如果有葡萄球菌肠毒素,游离的葡萄球菌肠毒素则与各微孔中包被的特定抗体结合,形成抗原抗体复合物,其余未结合的成分在洗板过程中被洗掉抗原抗体复合物再与过氧化物酶标记物抗结合,未结合上的酶标记物在洗板过程中被洗掉加入酶底物和显色剂并孵育,酶标记物上的酶催化底物分解,使无色的显色剂变为蓝色加入反应终止液可使颜色由蓝变黄释度接种管,将上述接种物于培养。倍系列稀释选择个适宜稀释度的样品匀液,各吸取,分别接种于管氯化钠胰酪胨大豆肉汤。接种平板血浆凝固酶试验检样样品。

6、金黄色葡萄球菌计数检验程序金黄色葡萄球菌计数程序见图。图金黄色葡萄球菌法检验程序操作步骤样品的稀释。接种和培养根据对样品污染状况的估计,选择个适宜稀释度的样品匀液液体样品可包括原液,在进行倍递增稀释时,每个稀释度分别吸取样品匀液接种到氯化钠胰酪胨大豆肉汤管,每个稀释度接种管,将上述接种物于培养。倍系列稀释选择个适宜稀释度的样品匀液,各吸取,分别接种于管氯化钠胰酪胨大豆肉汤。接种黄色葡萄球菌肠毒素值大于或等于临界值的样品孔判为阳性,表述为样品中检出型金黄色葡萄球菌肠毒素。生物安全因样品中不排除有其它潜在的传染性物质存在,所以要严格按照对废弃物进行处理。附录规范性附录金黄色葡萄球菌最可能数检索表金黄色葡萄球菌最可。

7、均质。振摇。于,离心。吸取上层悬浮液,转移到另外个离心管中,再加入的庚烷,充分混匀。于,离心。将上部有机相庚烷层全部弃去,注意该过程中不要残留庚烷。将下部水相层进行过滤除菌。取的滤出液进行试验。其它食品可酌情参考上述食品处理方法。振荡器。无菌吸管具刻度具刻度或微量移液器及吸头。无菌锥形瓶容量。无菌培养皿直径。注射器。计或比色管或精密试纸。培养基和试剂氯化钠胰酪胨大豆肉汤见附录中。氯化钠肉汤见附录中。血琼脂平板见附录中。琼脂平板见附录中。脑心浸出液肉汤见附录中。兔血浆见附录.食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验.。结果如可疑,挑取营养琼脂小斜面的菌落到,培养,重复试验。葡萄球菌肠毒素的检验可疑食物。

8、品置盛有磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠中,充分混匀,制成的样品匀液。用无菌吸管或微量移液器吸取样品匀液,沿管壁缓慢注于盛有稀释液的无菌试管中注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面,振摇试管或换用支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成的样品匀液。按操作程序,制备板,注意不要触及平板边缘。使用前,如平板表面有水珠,可放在的培养箱里干燥,直到平板表面的水珠消失。培养在通常情况下,涂布后,将平板静置,如样液不易吸收,可将平板放在培养箱培养等样品匀液吸收后翻转平皿,倒置于培养箱,培养,。兔血浆制备取柠檬酸钠溶液份,加兔全血份,混好静置或以离心,使血液细胞下降,即可得血浆。磷酸盐缓冲液成分磷酸氢。

9、中毒样品或产生葡萄球菌肠毒素的金黄色葡萄球菌菌株的鉴定,应按附录检测葡萄球菌肠毒素。结果与报告结果判定符合,可判定为金黄色葡萄球菌。结果报告在样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。第法金黄色葡萄球菌平板计数检验程序金黄色葡萄球菌平板计数程序见图。图金黄色葡萄球菌平板法检验程序操作步骤样品的稀释固体和半固体样品称取样品置盛有磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,均质,或置盛有稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打,制成的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取样品置盛有孔径。微量加样器。微量多通道加样器。自动洗板机可选择使用。酶标仪波长。原理本方法可用型金黄色葡萄球菌肠毒素分型酶联免疫吸附试剂盒完成。本方法测定的基础是酶。

10、择有典型的金黄色葡萄球菌菌落的平板,且同稀释度个平板所有菌落数合计在之间的平板,计数典型菌落数。如果只有个稀释度平板的菌落数在之间且有典型菌落,计数该稀释度平板上的典型菌落最低稀释度平板的菌落数小于且有典型菌落,计数该稀释度平板上的典型菌落稀释度平板的菌落数大于且有典型菌落,但下稀释度平板上没有典型菌落,应计数该稀释度平板上的典型球菌。第法金黄色葡萄球菌平板计数检验程序金黄色葡萄球菌平板计数程序见图。图金黄色葡萄球菌平板法检验程序操作步骤样品的稀释固体和半固体样品称取样品置盛有磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,均质,或置盛有稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打,制成的样品匀液。液体样品以无菌吸管吸取样。

11、钾蒸馏水制法贮存液的磷酸氢钾溶于蒸馏水中,用大约的氢氧化钠溶液调节,用蒸馏水稀释至后贮存于冰箱。稀释液,用蒸馏水稀释至,分装于适宜容器中,高压灭菌。营养琼脂小斜面成分蛋白胨牛肉膏氯化钠琼脂蒸馏水制法将除琼脂以外的并终止了酶反应以波长的酶标仪测量微孔溶液的吸光度值,样品中的葡萄球菌肠毒素与吸光度值成正比。检测步骤从分离菌株培养物中检测葡萄球菌肠毒素方法待测菌株接种营养琼脂斜面试管培养,用生理盐水洗下菌落,倾入产毒培养基中,每个菌种种瓶,振荡培养,振速为次,吸出菌液离心加热取上清液,取稀释后的样液进行试验。从食品中提取和检测葡萄球菌毒素方法乳和乳粉将乳粉溶解到的缓冲液中,混匀后同液体乳样按以下步骤制备。将乳于,离。

12、数的检索见表每检样中金黄色葡萄球菌最可能数。金黄色葡萄球菌最可能数检索表阳性管数置信区间阳性管数置信区间下限上限下限上限注本表采用个稀释度和每个稀释度接种管。注表内所列检样量如改用和时,表内数字应相应降低倍如改用时,则表内数字应相应增高倍,其余类推。.食品安全国家标准食品微生物学检验金黄色葡萄球菌检验。离心管。滤器滤膜典型菌落计数和确认金黄色葡萄球菌在平板上,菌落直径为,颜色呈灰色到黑色,边缘为淡色,周围为混浊带,在其外层有透明圈。用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度,偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些,外观可能粗糙并干燥。选。

参考资料：

[1]NYT 2112-2011 绿色食品 渔业饲料及饲料添加剂使用准则（第6页，发表于2022-06-26）

[2]AQT 6108-2008 安全鞋、防护鞋和职业鞋的选择、使用和维护（第18页，发表于2022-06-26）

[3]GB 31621-2014 食品安全国家标准 食品经营过程卫生规范（第5页，发表于2022-06-26）

[4]GB 15193.9-2014 食品安全国家标准 啮齿类动物显性致死试验（第5页，发表于2022-06-26）

[5]GB 15577-2007 粉尘防爆安全规程（第7页，发表于2022-06-26）

[6]GB 4789.11-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 β型溶血性链球菌检验（第9页，发表于2022-06-26）

[7]GB 15193.11-2015 食品安全国家标准 果蝇伴性隐性致死试验（第6页，发表于2022-06-26）

[8]SNT 2565-2010 食品中志贺氏菌分群检测 MPCR-DHPLC法（第10页，发表于2022-06-26）

[9]GB 5009.33-2010 食品安全国家标准 食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定（第17页，发表于2022-06-26）

[10]GB 15193.18-2015 食品安全国家标准 健康指导值（第6页，发表于2022-06-26）

[11]GB 4789.26-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 商业无菌检验（第16页，发表于2022-06-26）

[12]DB13T 1177-2010 食品冷链物流技术与管理规范（第12页，发表于2022-06-26）

[13]GB 4789.31-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 沙门氏菌、志贺氏菌和致泻大肠埃希氏菌的肠杆菌科噬菌体诊断检验（第17页，发表于2022-06-26）

[14]GBT 4789.39-2008 食品卫生微生物学检验 粪大肠菌群计数（第7页，发表于2022-06-26）

[15]GB 24542-2009 坠落防护 带刚性导轨的自锁器（第12页，发表于2022-06-26）

[16]GBT 23465-2009 呼吸防护用品 实用性能评价（第14页，发表于2022-06-26）

[17]SNT 2562-2010 食品中霍乱弧菌分群检测 MPCR-DHPLC法（第9页，发表于2022-06-26）

[18]GB 15193.5-2014 食品安全国家标准 哺乳动物红细胞微核试验（第6页，发表于2022-06-26）

[19]GB 4789.7-2013 食品安全国家标准 食品微生物学检验 副溶血性弧菌检验（第15页，发表于2022-06-26）

[20]GB 4789.9-2014 食品安全国家标准 食品微生物学检验 空肠弯曲菌检验（第13页，发表于2022-06-26）