1、试验材料仪器设备超净工作台，高压灭菌锅，离心机，搅拌器，显微镜，细菌过滤器，恒温培养箱，研钵，移液枪等。供试培养基培养基马铃薯，葡萄糖，琼脂，蒸馏水马丁培养基磷酸二氢钾，硫酸镁几名，蛋白陈，葡萄糖，孟加拉红，琼脂，蒸馏水。培养基牛肉膏，蛋白脉，氯化钠，，琼脂，蒸馏水。高氏号培养基硝酸钾，磷酸氢二钾，硫酸镁，氯化钠，硫酸亚铁，可溶性淀粉，琼脂，蒸馏水，营养液，其成分如下母液含母液含母液含涂布到平板上。培养后，从平板上将不同菌落形态特征的内生细菌挑取出来，纯化并保存。为检验表面消毒效果，吸取少量表面消毒中最后次冲洗材料的无菌水，涂布于平板，经培养后若无微生物长出，表明表面消毒彻底。大白菜根肿病菌拮抗菌的筛选休眠抱子悬浮液的制备取保存的。
2、水冲洗次。无菌条件下将经处理的各组织用消过毒的刀片切成见方的小块放于马丁培养基上，每皿放块组织小块，并吸取少量表面消毒中最后次冲洗材料的无菌水作对照，以检测表面消毒是否彻底。在下恒温培养，待各组织的切面处长出菌丝后，挑取菌丝尖端部分，转接于固体培养基上获得纯培养物，并于斜面中保存菌种队。植株组织内生细菌的分离称取适量的根茎叶枝条等组织材料，表面消毒后表面消毒方法内生真菌的分离方法，无菌条件下加无菌水充分研磨，将组织研磨液梯度稀释成倍和倍稀释倍数的组织稀释液，分别取林管束组织受增生细胞的挤压,发育不正常,输导系统不能连贯,致使植株吸收水分和养料困难。因此,病株表现生长迟缓和叶片萎垂,直至整株死亡。当前食品的安全问题已经备受人们关注，。
3、末开始进行根肿病研究，在常规抗病育种的同时进行分子学研究。等完成大白菜抗根肿病基因位点的确定和基因图谱的绘制，正在进行用方法克隆根肿病抗性基因的研究。等申请了抗根肿病基因在韩国的专利等从小麦油菜大白菜和象草地里生长的大白菜根中分离根殖真菌，在消毒土壤中，其中个菌株可以完全抑制根肿病菌，株根部内生菌在自然土中也可减轻根肿病的发生。等从荃菜叶片中分离得到能有效控制根肿病的茎点霉，通过对其活性物质进行分离纯化发现抑制根肿病菌的物质为顶环氧菌素氯三氟甲基毗陡基氯三氟甲基,二硝基苯胺，即可起作用。等通过温室和田间试验发现，个木霉菌株和个链霉菌菌株可以显著的减轻新西兰十字花科根肿病的发生。等发现放线菌与有机肥混用时对防治根肿病有效。等从韩国大。
4、次近些年国内外已经有部分人从白菜的土壤中筛选出对根肿病有作用的菌种，但是效果不太好正在改进当中。应用前景长期以来，由于化学防治速度快，效果高，杀病虫谱广，成本低，使用简便等，农业生产主要依靠化学农药。种新的化学农药般需要年的时间，所花的费用也比较高，会造成污染和残毒，杀伤天敌，破坏自然环境和生态平衡，而微生物农药只需要年时间，研究的费用也比较低，加之具有对人畜安全无毒，不污染环境，无残留对病害的特异性强，不易伤及天敌和有益生物，能保持生态平衡对病原物压低而不是消灭，多种有效成分和因素发挥作用，病原物难产生抗药性生产原料和有效成分属天然产物，能回归自然保证可持续发展可用现代生物技术和基因工程方法对微生物改进性能和提高质量等特点，化学。
5、四川农业大学硕士论文，范成明土壤生物消毒对大白菜根肿病的防效评估及防治机理研究云南农业大学博士论文,张艳芸薹根肿菌拮抗菌的筛选及其种衣剂的研制,,孙彦生物分离工程北京化学工业出版社第二版，孙延忠,曾洪梅,李国庆抗生素对微生物作用的研究微生物学杂志涂漩,黄丽丽,高小宁,等黄瓜内生放线菌的分离筛选及其活性菌株鉴定植物病理学报川农业大学硕士论文，王静十字花科作物根肿病生防放线菌研究四川农业大学博士论文，，韩国专利,,,防效达。三研究内容和预期成果研究内容内生菌的分离从各地采集土壤和植物的组织，在不同培养基上进行培养，以获得各种菌落。抗菌内生菌的筛选及鉴定将分离出的菌落进行单胞分离，取患根肿病的组织分离休眠孢子，用分离出的菌株做抑菌试验，。
6、物防治法对环境污染和破坏作用小，而且对人几乎没有什么危害，由于生防菌与化学农药相比，具有安全性研究时间短和科研经费少等特点，目前世界各国的研究人员对其研究比较多，在我国近些年也有比较多的学者对其研究。十字花科根肿病最早于年在英国地中海西岸和欧洲南部发现，各个国家的学者很早就开始研究，由于根肿病不能人工培养对其研究比较难，目前已有的防治方法效果并不理想。在我国大白菜种植区域的根肿病爆发严重而且有逐年增加的趋势，没有有效的防治方法给我国的大白菜生菜带来严重损失，研究大白菜根肿病生物防治技术对我国白菜生产将有重大的意义。立题依据在实验室内拥有枯草芽抱杆菌。何月秋等报道过从大白菜根际土壤中分离到株枯草芽抱杆菌菌株室内防治效果达，田间防效。。
7、根在自来水下冲洗干净后，置于条件下腐烂，切碎后加无菌水用组织搅碎机搅成匀浆，用四层纱布过滤，滤液移入离心管，离心，取上清液及上层的灰色沉淀，加无菌水悬浮，离心，去上清液，沉淀溶于的无菌水中，离心，去上清液此步骤重复次，沉淀溶于的无菌水中，将抱子悬浮液稀释至个抱子，保存于冰箱内。根分泌物的搜集高度感病的白菜品种在下催芽，用营养液在恒温培养箱光暗交替培养，后收集根分泌物溶液，用细菌过滤器除菌后冰箱内保存。拮抗菌培养液的制备将分离生物菌株活化后接入液体培养基中，置于的摇床中振荡培养，制成含菌数量个抱子菌液。拮抗菌的筛选将拮抗菌培养液和根肿菌抱悬液各同时接种到灭好菌的装有根分泌物的三角瓶中，以加入无菌水和根肿菌抱悬液为对照，调值到，置于培。
8、箱黑暗培养，后镜检根肿菌休眠抱子的萌发情况，次重复。休眠抱子萌发的判定采用地衣红染色，显微镜下着色的为未萌发的休眠抱子，未着色的为萌发的休眠抱子，。休眠抱子萌发率处理后抱子萌发率处理前抱子萌发率抱子抑制率对照抱子萌发率处理抱子萌发率对照抱子萌发率温室试验在温室内用花盆种植感病品种的大白菜，待白菜长出个叶子后开始接种根肿菌孢子，将之前准备好的根肿菌孢子分别稀释成和四个浓度分别接种大白菜，每个处理盆，同时无菌水作为对照。，然后将筛选出的拮抗菌制成的浓度从根部施如用根肿孢子处理过的大白菜，随或伽母液④含分离采集的材料根肿病病田中未发病白菜及油菜根茎叶枝条等组织，并在它们的根际周围采集的土壤，将所采集的样品装入新的聚乙烯塑料袋中，土壤在室。
9、区采用平行跳跃式取样，每次分别抽样调查株，并作好标记，下次不再作调查。调查时间每隔天对小区大白菜进行次调查。同时去土壤检测筛选出的菌株在土壤中的数量，以确定其定植能力。技术路线大白菜根茎叶组织及根际周围土壤的采集室内盆栽试验菌株筛选大白菜内生菌的分离大田小区试验得到目标菌株参考文献黄云,马淑青,李晓琴,等油菜根肿病菌的形态和休眠抱子的生物学特性中国农业科学郭向华,肖崇刚,曾艳甘蓝根肿病菌生物学特性西南农业大学学报，,,刘树生,曹若彬,朱国念蔬菜病虫草防治手册北京中国农业出版社黄云植物病害生物防治学北京科学出版社,何月秋,熊国如,范成明防治十字花科根肿病的生物制剂及其应用中国,杨力凡深绿木霉生物菌肥的研制及对油菜菌核病根肿的生物防治。
10、择对根肿病具有防治作用的菌株，在进行形态学特征的鉴定以确定有防效的菌株。内生菌定植能力的测定菌株的定植能力的强弱是筛选生防菌株的重要指标，可通过植能力的强弱来确定生防菌株的应用潜力。高毒力菌株的选育筛选出的野生菌株生产力低，般不能满生产上的需要，需要对野生菌株进行人工育种改造。可应用紫外线和化学实试剂诱变处理，使菌株毒力和生产力提高。温室试验在温室进行盆栽试验，以确定具有生防效果的菌株。大田试验温室内环境条件比较简单，选育出的菌株在田间效果如何，还得进行大量田间试验。预期成果预计试验可以直接从土壤和植物的组织中分离出许多的内生菌株，经过分离鉴定可得到目标菌株，但是菌株生物生长繁殖受外界环境变化影响。四拟采取的方法和技术路线采取的方。
11、药的研究已经开始缓慢下降，生物农药的研究在逐年的增加，具有广阔的应用前景。研究现状国内，近年来研究生防菌的学者比较多，但根肿病生防菌的研究不多，相关报道较少。范成明从大白菜根际分离的枯草芽孢杆菌，处理在直栽内的大白菜没有明显症状，在收获期，两个菌株的防治效果分别达。张艳采集健康的茶树，红豆树，银杏树和白菜的根茎叶枝条等组织，分离出生防细菌包衣处理对白菜的防效最高，盆栽试验防效达到。杨力凡利用上海交通大学的深绿木霉加，突变菌株，对根肿休眠抱子萌发有明显的抑制作用，田间防治效果达到。王静从茶树红豆树银杏树白菜及油菜的根际土壤和根茎叶枝条等材料中，分离出放线菌菌株和对根肿病具有防效，菌株对白菜根肿病的室内盆栽防效分别为和。国外，韩国从世。
12、条件下放置后进行分离，植株组织放入冰箱保存并进行分离。病原菌菌种来源采自发病较重的地区，保存。试验品种的选择白菜品种选择高感根肿病。试验方法大白菜根内生菌的分离土壤内生菌的分离称取所采集的土样于三角瓶中，加入无菌水，摇床振荡，即得，土壤稀释液，然后吸取稀释度为土壤稀释液加到有无菌水的试管中振荡，制成土壤稀释液，用同法制成和，分别编号。采用平板涂布法进行分离，用移液枪吸以上制好的悬浮液，将之加入预先做好的平板培养基上，用型玻棒涂匀。待长出菌落后，挑取形态大小色泽不同的菌落，进行纯化。将纯化后的单菌落转移到斜面培养基上，于冰箱保存备用。植株组织内生真菌的分离取采集的植株根茎叶枝条等组织，用水冲洗干净后，用酒精表面消毒，次氯酸钠消毒，无。
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生物防治--防治大白菜根肿病生防菌的筛选可行性研究报告